腈水解酶重组茵发酵产酶条件的优化及应用

摘要：优化了重组茵E．coliBL21（DE3）／pET28b（＋）-NIT发酵产腈水解酶的条件,确定最适发酵培养基为：玉米浆粉25g·L-1,酵母浸出汁5g·L-1,NaCl10g·L-1,Fe3＋0．5mmol·L-1。初始pH值7．5;最适诱导产酶条件为：诱导剂乳糖0．5g·L-1,诱导剂加入时间为接种6h后,诱导温度30℃,诱导时间28h,在此条件下产酶量达到6161．46U·L-1。所得茵体用于不对称转化R,S-扁桃腈生成R-（-）-扁桃酸,转化率达92．02％,产物e．e．值达99％。     

苯丙氨酸脱氨酶发酵工艺及其酶学性质研究

选育出一株具有较高苯丙氨酸脱氨酶活性的菌株巨大芽孢杆菌AS1.127-NJU10。考察了该菌的发酵产酶条件,结果表明:蔗糖为最佳碳源、酵母浸膏和NH4C l组成最佳氮源,其质量浓度分别为:ρ(蔗糖)=20 g/L,ρ(酵母浸膏)=2 g/L和ρ(NH4C l)=10 g/L;发酵培养基最适pH=6.5,培养温度为37℃;诱导物ρ(L-苯丙氨酸)=1 g/L时,酶活最高达1 070 U。同时对苯丙氨酸脱氨酶的性质进行了研究,结果表明:该酶最适pH=5.8,最适温度为40℃,反应液中添加φ(吐温-80)=0.2%和c(K+)=10-5mol/L能明显提高酶活。     

两相体系生物转化L-苯丙氨酸生成2-苯乙醇

研究了水/有机溶剂两相体系中,酵母细胞转化L-苯丙氨酸(L-phe)生成2-苯乙醇(PEA)的过程.菌种选择表明酿酒酵母CICIM Y0086(T)的转化能力要高于马克斯克鲁维酵母AS.2.1440,有机溶剂的选择表明,在实验使用的4种有机溶剂中,油酸为该反应最适有机溶剂.当初始底物浓度为6 g/L、水和油酸的相体积比为1:1、反应温度30 ℃和pH值4.0、装液量20 mL/250 mL 的条件下,转化48 h,产物浓度达到3.0 g/L,比单水相提高了50%.     

微生物转化法生产睾酮的发酵工艺研究

采用亚硝基胍(NTG)对主产雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)的菌株YHT-1进行诱变,获得了一株睾酮(TS)产量较高的菌株YHT-103.通过对发酵条件及发酵培养基的优化,获得最佳转化培养基:葡萄糖15 g·L-1,硝酸铵4 g·L-1,MgSO4 0.5 g·L-1,K2HPO4 0.5 g·L-1,植物甾醇 2 g·L-1,Tween80 6 g·L-1,pH值6.5;种子培养时间30 h,接种量10%,培养温度28 ℃.在最佳转化条件下,TS转化率最高达46.20%.     

汽爆玉米秸秆脱毒及发酵丁醇工艺的实验研究

研究了不同脱毒方法对汽爆玉米秸秆发酵产丁醇的影响及发酵工艺。实验共考查了十种不同的脱毒工艺路线,结果表明:汽爆玉米秸秆经水洗预处理脱毒后,经酶解、离心去除沉淀物,并补加营养物质是一条较佳的工艺路线。在此基础上,进一步利用单因素实验和正交实验,考察了发酵温度、pH值、接种量、菌种种龄、培养基组成、发酵时间对丁醇发酵的影响,得到较优的丁醇发酵工艺条件为,发酵温度37℃,pH7.0,接种量7%,菌种种龄27h,培养基组成:酵母抽提物1.0g·L-1、KH2PO40.8g·L-1、MgSO4·7H2O 0.1g·L-1、(NH4)2SO42.0 g·L-1、FeSO4.7H2O 0.03g·L-1、尿素2.0g·L-1,发酵时间48 h。在此优化条件下,发酵液中起始糖浓度为50g·L-1时,丁醇的发酵浓度达到了9.42g·L-1。     

TiO2@酵母炭复合光催化剂的静电自组装制备及其光催化性能研究

以酵母炭为载体,通过静电自组装法制备负载型TiO2@酵母炭复合光催化剂,利用FE-SEM、EDS、XRD对TiO2@酵母炭的形貌、组成、尺寸和晶型进行分析和表征,并探讨了TiO2@酵母炭光催化性能的影响因素。FE-SEM分析表明,TiO2@酵母炭呈椭球状,长（3.6±0.3）μm、宽（2.5±0.5）μm,粒径分布均匀。X-射线粉末衍射分析表明,TiO2粒子为锐钛矿和金红石晶型。对于甲酚红的光催化降解研究表明,当甲酚红初始浓度为10mg·L-1、催化剂投加量为5g·L-1、溶液初始pH值为5时光催化效果最好,甲酚红的降解率为89.6%。H2PO-4、NO-3、Cu2＋的存在对甲酚红的降解具有抑制作用,而Mg2＋的存在无明显影响。     

利用响应面法优化出芽短梗霉As3．933产普鲁兰多糖发酵培养基

采用响应面分析法对出芽短梗霉As3．933产普鲁兰多糖的发酵培养基进行优化。首先利用Plackett-Bur-man实验筛选出影响普鲁兰多糖产量的主要因素为酵母膏、（NH4）zSO4和K2HPO4,再利用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,最后通过Box-Behnken实验并运用Design-Expert8．0软件优化发酵培养基。确定优化培养基组成为：蔗糖62．5g·L-1,（NH4）2S040．67g·L-1,酵母膏2．84g·L-1,K2HPO47．12g·L-1,NaCl1．25g·L-1,MgS04·7H200．25g·L-1,pH值6．5,优化后的普鲁兰多糖产量达到22．29g·L-1,较初始液体发酵培养基（17．32g·L-1）提高了28．70％。     

酶法制备D-谷氨酸和γ-氨基丁酸的工艺研究

考察了大肠杆菌AS1．505的L-谷氨酸脱羧酶对L-谷氨酸的专一脱羧作用,分析了转化体系温度、pH值等因素对L-谷氨酸脱羧酶活力的影响。实验结果表明最佳工艺为：温度37℃,转化体系pH值4．8,茵体浓度6g／L,吐温-800．15g／l,菌龄14h,底物浓度50g／L。L-谷氨酸脱羧酶在最适转化条件下比酶活可以达到15036U。1g湿菌体可重复使用3次共转化DL-谷氨酸25g,其中L-谷氨酸可以完全转化为γ-氨基丁酸。D-谷氨酸及γ-氨基丁酸的总收率可以分别达到理论收率的87％和85％。     

红酵母细胞壁中主要多糖含量和类胡萝卜素产量的相关性研究

对红酵母菌株不同培养条件下类胡萝卜素产量和红酵母细胞壁中主要多糖β-1,3-D-葡聚糖、甘露聚糖含量进行了分析.结果表明:当葡萄糖作为碳源、(NH4)2SO4作为氮源且添加量为10 g·L-1、培养时间为72 h、pH值为5时,类胡萝卜素产量、β-1,3-D-葡聚糖含量和甘露聚糖含量均达到最大值,分别为(14.98±0.12)mg·L-1、(38.89±0.21)%和(6.12±0.13)%.同时发现红酵母细胞壁中β-1,3-D-葡聚糖、甘露聚糖的含量与类胡萝卜素产量间均存在正相关关系,这表明类胡萝卜素合成代谢途径和这两种多糖的合成代谢途径间存在一定的关系.     

静息细胞转化制备6-脱氧-6-氨基（ⅣI羟乙基）--α-L-呋喃山梨糖的研究

以N-羟乙基葡萄糖胺为底物,采用氧化葡萄糖酸杆菌静息细胞转化制备6-脱氧-6-氨基（N-羟乙基）-α-呋喃山梨糖,考察了生物转化条件（温度、pH值、摇床转速、细胞浓度、底物浓度、金属离子、转化时间等）对转化反应的影响,并通过单因素实验和正交实验,确定摇瓶转化的最优条件如下：反应温度为25℃,pH值为6．0,摇床转速为200r·min^-1,细胞浓度为60g·L^-1,底物浓度为60g·L^-1,转化时间为48h,在此条件下目标产物的产率为87．5％。研究还发现在转化液中添加Mg^2＋对转化具有促进作用。     

羊毛脂微生物转化法制备胆固醇

以羊毛脂为底物筛选到一株能将羊毛脂转化为胆固醇的菌株,将其应用于微生物转化法制备胆固醇,并对发酵条件进行了优化。结果表明,在pH值为7．6、发酵温度为30℃、发酵时间为110h、麦芽糖浓度为90g·L-1、羊毛脂浓度为80g·L。的最佳发酵条件下,胆固醇的产量达到516mg·mL-1。     

可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5基因工程菌发酵培养和诱导表达条件的优化

在实验室试管培养条件下优化了基因工程菌E.coli BL21（DE3）pET15b/K5发酵产可溶型非融合血管生长抑制因子Kringle 5的培养基和诱导表达条件。经菌体干重测定和SDS-PAGE检测,确定最佳培养基（g.L-1）为：胰蛋白胨10.0,酵母提取物5.0,NaCl 10.0,葡萄糖6.0,NH4Cl 2.6,NaH2PO45.0,Na2HPO46.0;优化的诱导表达条件为：诱导剂浓度0.01mmol.L-1,诱导时间6h,诱导温度37℃,摇床转速220r.min-1。在优化的培养基和诱导表达条件下,菌体干重为1.8g.L-1,Kringle 5表达量为360mg.L-1,占总蛋白含量的20%,与基础LB培养基相比,Krin-gle 5表达量提高了1.18倍。     

Fenton法氧化降解聚乙烯醇的研究

本文采用Fenton氧化法处理浓度为1.5g.L-1的聚乙烯醇(PVA)模拟废水,研究了反应时间、溶液的初始pH值、H2O2投加量、H2O2/Fe2+投加比和反应温度等因素对PVA氧化降解的影响。结果表明,在pH值为4、H2O2/Fe2+的摩尔比为10∶1,温度40℃,时间为40min,H2O2投加量为7g/100mL时,PVA的降解率可达93.28%。     

锰改性硅藻土对水中Cr~(6+)的吸附研究

用锰氧化物改性硅藻土制备吸附剂,考察pH值、吸附剂投加量、吸附时间和Cr6+初始浓度条件下,改性吸附剂对水中Cr6+去除的影响。结果表明,去除率随着吸附剂投加量的增高而上升,随pH值和Cr6+初始浓度升高而降低,吸附2h后达到吸附平衡。室温条件下,当pH值为1,吸附剂投加量为40g·L-1,吸附反应时间为2h,Cr6+的初始浓度为5mg·L-1,Cr6+去除效率能达到96%以上。锰改性硅藻土对Cr6+的等温吸附符合Langmuir和Freundlich方程。     

固定甘氨酸制备阳离子交换树脂及其吸附金属离子性能的研究

利用环氧氯丙烷活化法将甘氨酸固定于SephadexG-25凝胶上制备弱酸性阳离子交换树脂。通过树脂对水中Ca2＋和Mg外的静态吸附、动态吸附和解吸等实验,探讨了金属离子溶液初始浓度、树脂pH值和流速等对树脂吸附Ca2＋和Mg2＋的影响以及再生条件。结果表明,环氧氯丙烷活化法固定甘氨酸制备阳离子交换树脂的偶联率为12mg·g-1;树脂对Ca2＋和Mg2＋有良好的吸附／解吸性能,室温下,对Ca件和Mg抖的静态饱和吸附量分别为7．59mg·g-1和6．16mg·g-1,而动态饱和吸附量则分别达到10．83mg·g-1和8．80mg·g-1。该树脂交换柱较好的操作条件如下：以pH值为8．5的0．05mol·L2＋ Tris—HCl溶液作为平衡液,上样流速1mL·min-1;以pH值为1．5的1mol·L-1 NaCl-HCl溶液作为洗脱液,流速0．5mL·min2＋。该树脂性能稳定,再生效果好,可重复多次使用。     

炼厂油泥降解菌的筛选及降油条件初探

从某炼厂的土壤和处理水中筛选到了3株降解炼厂油泥中原油效果较好的菌株T1、A2、Z8,其中菌株T1对原油的降解效果最好。初步研究了菌株T1的培养条件以及降解原油的条件。结果表明,菌株T1的最佳培养条件为:温度30℃、转速160r·min-1、pH值9.0;最佳的培养基组成(g·L-1)为:葡萄糖25、NaCl 3.0、(NH4)2SO41.0、NaNO31.0、KH2PO44.0、K2HPO4·3H2O 25.0,与其它无机盐相比,K2HPO4·3H2O对T1菌株降解油泥的影响最大。在最佳条件下,第一代T1菌株对油泥中原油的降解率达71.3%。     

HP20大孔吸附树脂对L-苯丙氨酸吸附条件的研究

文章研究了HP20大孔吸附树脂对L-苯丙氨酸的吸附性能.通过实验,确定了HP20大孔吸附树脂对L-苯丙氨酸吸附的最佳工艺条件.在事温下,采用2 g/L L-Phe和0.5～0.75 mol/L NH<,4><'+>、pH为6.0的溶液作为上柱液,在2.0BV/h吸附流速下经过HP20大孔吸附树脂柱,99%L-Phe被吸...     

卷枝毛霉发酵产壳聚糖酶的条件优化

以壳聚糖为诱导物,诱导卷枝毛霉产生壳聚1糖酶,并对产酶备件进行了优化。通过单因素实验确定最佳产酶条件为：壳聚糖浓度0．8g·L-1、培养温度40℃、培养基pH值5．5、培养时间84h、摇床转速180r·min-1。