壳聚糖膜固定化葡萄糖氧化酶的特性研究

研究了以壳聚糖膜为载体、戊二醛为交联剂的固定化葡萄糖氧化酶的特性。结果表明：固定化酶、溶液酶的最适pH均为5．5；固定化酶、溶液酶的最适温度分别为40℃，35℃；固定化酶的Km值为12．16mmol／L，溶液酶的Km值为20．86mmol/L；固定化酶比溶液酶更耐热，且贮藏稳定性及操作稳定性也有所提高；该固定化酶重复使用率较高。     

均相壳聚糖固定化磷脂酶A1(PLA1)的研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂、酶液,三者均相反应,固定化磷脂酶A1,对它的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究.固定化最佳条件,以脱乙酰度为92.8%,平均分子量为7.84×10 5,戊二醛浓度为3%缩合后,在0.5mg/100mL酶、pH6.0、25mmol/L CaCl2、4℃条件下固定化酶,酶活力回收可达59%.固定化酶最适温度60℃、最适pH值8.0,Km=9.08μmol/L.     

金针菇漆酶的固定化及其性质研究

采用海藻酸钠包埋法制备固定化漆酶,结果表明,固定化pH值为4.5,海藻酸钠与CaCl2质量浓度均为2％,酶液与海藻酸钠体积比为1∶1时,漆酶的固定化效果最佳,酶活回收率为48.6％.固定化酶的最适pH值为3.0,最适温度为40℃,米氏常数Km为21.5μmol/L,游离酶的最适pH值为3.0,最适温度为30℃,米氏常数Km为18.6μmol/L,与游离酶相比,固定化漆酶的热稳定性有明显提高,耐酸性略有增加,最适反应温度提高了10℃.     

海绵态壳聚糖固定化单宁酶及其酶学性质研究

以海绵态壳聚糖为载体,0.25%戊二醛为交联剂固定化单宁酶,确定固定化酶的最佳工艺参数为:给酶量6mg/g载体、固定化pH5.0、固定化温度4℃、固定化时间8h.制备的固定化单宁酶Km为3.83mmol/L,而游离酶的Km为33mmol/L.固定化酶的热稳定性、酸碱稳定性均高于游离酶,稳定pH范围向酸性方向偏移.     

酰肼载体固定化乳糖酶的特性及其操作稳定性研究

以酰肼颗粒为载体、戊二醛为交联剂,通过共价结合制得固定化乳糖酶,对它的特性进行了研究.结果表明,固定化乳糖酶的最适反应温度为38～41℃.最适反应pH值为6.5～7.0,动力学常数Km=304.87 mmol/L,Vmax=0.10 mmol/(g·min),固定化酶在较低温度下的使用稳定性好,在10℃下反应65个批次后活性仅降低15.8%,而在室温下(24～26℃)经过65批的反应活性下降将近50%.     

固定化蔗糖酶的研究

利用海藻酸钙凝胶球的包埋作用制备固定化蔗糖酶，并对其性质进行了初步研究，结果表明，游离酶被固定化后，最适pH值为4.0，最适温度为60℃。在高pH值（pH8）和高温下，固定化酶比游离酶更稳定；固定化酶的米氏常数（Km=49.05mmol/L）略大于游离酶（Km=45.45mmol/L）；同时固定化酶明显提高了游离酶的储藏稳定性和操作稳定性。     

生物素-亲和素系统定向固定糖化酶的研究

以生物素-亲和素系统定向固定糖化酶,首先,通过正交试验确定生物素标记糖化酶的最佳条件是:质量浓度为4 mg/mL的酶液2 mL、反应温度20℃、反应pH 4.6、搅拌时间2.5 h;其次,确定了亲和素-磁性琼脂糖微粒的最佳制备条件是:亲和素30μg/mg载体、反应时间20 min、pH 6.6;最后,确定了生物素-亲和素系统定向固定糖化酶的最佳条件是:生物素标记糖化酶液40μL/mg载体、反应时间20 min、反应温度20℃、pH 6.1。此条件下固定化酶活力为1 629.7 U/g,活力回收率为50.3%,固定化酶相对活力为64.7%。对固定化糖化酶的酶学性质的研究表明,固定化酶的最适作用温度65℃,最适作用pH 5.1,米氏常数Km为2.28 mg/mL,较游离糖化酶的米氏常数Km(5.56 mol/L)小,说明其与底物的亲和力提高。固定化酶连续使用5次,酶活仍保持71.8%,固定化酶的半衰期为84 d。     

环氧化聚苯乙烯的制备及其在果胶酶固定化中的应用

将环氧聚醚接枝于胺化的聚苯乙烯微球,制备环氧化聚苯乙烯微球,研究胺化聚苯乙烯微球的溶胀时间、反应体系、反应时间、温度等因素对微球环氧化的影响.结果表明,该反应的最佳条件:反应溶剂用二氧六环,反应温度80℃,反应时间25 h,溶胀时间4 h,胺基担载量2.1 mmol NH2/g 时反应的环氧基固载量达到最大,最大环氧基担载量可达1.59 mmol/g.并用该环氧微球作为载体,对果胶酶进行固定化,研究微球吸附温度、吸附pH值、吸附时间对果胶酶固定化效果的影响,得到活力较高的固定化果胶酶,酶活力回收率约为56.4%,最适反应温度由游离酶的50℃上升至65℃,最适pH由游离酶的3.5升至4.5,Km值由游离酶的5.14 g/L降低为3.11g/L.操作稳定性很强,连续使用10批次,酶活仍为77%.     

菊芋多酚氧化酶的酶学特性研究

采用0.1mol/L柠檬酸缓冲溶液匀浆法从菊芋中提取多酚氧化酶(PPO),并对菊芋中多酚氧化酶的酶学特性进行了研究。实验结果表明,以邻苯二酚为底物,该酶的最适pH值为7.4,最适温度为20℃,Km值为11.11mmol/L,Vm值为0.536OD415/min,90℃热处理2min可完全钝化PPO的活性,0.40g/L的抗坏血酸、5.0mmol/L的亚硫酸氢钠能有效抑制PPO的酶活性。     

聚乙烯醇复合固定化植酸酶方法研究

分别以海藻酸钠、聚乙烯醇(PVA)及聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠复合凝胶为载体,对植酸酶进行固定化研究.结果表明,由于PVA复合凝胶的多孔性网状结构,有利于物质传递.海藻酸钠有助于阻止酶活力的漏失,包埋效果优于其他两种方法.植酸酶经过固定化后,机械性能和化学稳定性都得到提高,可以重复多次对植酸钠进行水解反应.同时对该自南酶和固定化酶进行酶学特性研究.发现自南酶和固定化酶的最适pH值分别为5.5和7.0,最适反应温度分别为45和60%.固定化酶的Km(20mg/mL)大于自由酶的Km(14 mg/mL).植酸酶红固定化,提高了酶的操作、温度和贮藏稳定性.     

聚乙烯醇环氧化载体制备及在植酸酶固定化中的应用

该文以聚乙烯醇为原料,利用戊二醛为交联剂,聚合得到交联球形聚乙烯醇,并将其与环氧氯丙烷反应用以固载环氧基团,得到可用于酶固定化的载体。讨论了交联聚乙烯醇球环氧基的固载条件和酶的固定化条件。植酸酶经过固定化后,机械性能和化学稳定性都得到提高,可以重复多次对植酸钠进行水解反应。同时对该自由酶和固定化酶进行酶学特性研究。发现自由酶和固定化酶的最适pH值分别为5.5和7.0,最适反应温度分别为55℃和70℃。植酸酶经固定化,提高了酶的操作、温度、pH值和贮藏稳定性。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶研究

以磁性壳聚糖微球为载体,通过戊二醛交联进行脂肪酶固定化,对影响脂肪酶固定化各种因素进行考察,确定最佳条件,并比较游离酶与固定化酶pH和热稳定性。结果表明,固定化适宜条件为:脂肪酶加入量5.0 mg/100 mg载体、温度40℃、时间5 h、pH 8.04、戊二醛浓度10%、最高固载率可达90.56%,酶活4034 U/g载体;与游离酶相比,固定化酶pH和热稳定性都有较宽适用范围。     

定向固定化葡萄糖氧化酶及其酶学性质的研究

戊二醛将伴刀豆球蛋白(ConA)和载体壳聚糖膜交联,然后利用ConA 与葡萄糖氧化酶糖链的特异性结合作用,实现酶的定向固定化。定向固定化的最适条件为戊二醛浓度0.1%、ConA 浓度0.02mg/ml、葡萄糖氧化酶浓度0.08mg/ml。定向固定化葡萄糖氧化酶的最适pH4.0、最适温度57℃,米氏常数Km 为15.84mmol/L,与游离酶及非定向固定化葡萄糖氧化酶比较,定向固定化葡萄糖氧化酶的最适pH 值向酸性范围发生了偏移并有更宽的pH 值适用范围,最适温度提高,与底物的亲和力较大。     

海藻酸钠-阿拉伯胶固定化糖化酶及其性质的研究

以海藻酸钠（SA）与阿拉伯胶（GA）为载体固定化糖化酶,以酶活回收率为评价指标,在单因素试验基础上,通过响应面法优化固定化条件,得到固定化糖化酶最佳工艺条件为SA-GA质量比2.7∶1,氯化钙质量浓度6.2 g/100 mL,固化时间0.8 h,此条件下固定化糖化酶酶活回收率为67.91%。通过对固定化酶酶学性质的研究得出：经固定化的糖化酶最适反应pH值与最适作用温度均与游离酶相同,pH值为4.6,温度45 ℃,热稳定性及操作稳定性均优于游离酶。     

壳聚糖固定化α-葡萄糖苷酶的研究

以粉末状壳聚糖为载体 ,采用吸附 交联的方法将α 葡萄糖苷酶固定化。在最适固定化条件下 ,室温吸附 6h ,然后与 3 5%的戊二醛在 4 5℃交联 6h ,可得到固定化酶的活力为1430 0U ,酶活力回收率为 59 6 %。通过实验发现 ,与游离酶相比 ,固定化酶的最适 pH向酸性方向移动 0 5pH单位 ,为 pH 4 5;最适作用温度达到 70℃ ,比游离α 葡萄糖苷酶提高 5℃ ;酸碱稳定性、热稳定性及贮存稳定性均有较大提高 ;在 6 0℃操作半衰期为 16 8h     

壳聚糖—戊二醛固定化木聚糖酶的技术研究

采用壳聚糖微球一戊二醛交联的方法固定木聚糖酶,探讨壳聚糖浓度、戊二醛体积分数和交联时间对固定化酶相对酶活力的影响.以正交试验确定木聚糖酶的最佳固定化条件,比较固定化酶与其游离酶的最适反应pH值、pH值稳定性、最适反应温度及热稳定性.结果表明,在壳聚糖质量浓度0.1g/mL、戊二醛添加量3％、给酶量2000U/g载体、交联时间2.5h时,固定化酶的回收率较高,可达到65.38％,同时固定化和游离酶的最适温度分别为60℃、55℃,最适pH值分别为4.5、5.0,热稳定性有不同程度的提高,pH稳定性两者变化不大.木聚糖酶的固定化能有效地提高其作用性能,从而为木聚糖酶的工业化应用提供了一定的理论依据.     

海藻酸钠固定化碱性蛋白酶制备及酶学性质的研究

对采用海藻酸钠固定化碱性蛋白酶的方法和酶学性质进行了研究。在单因素实验基础上,采用响应面优化方法确定固定化的最优条件,得到的最佳条件为:海藻酸钠浓度3.1%,pH9.4,CaCl2浓度3.0%,游离酶添加量10000U/g,时间1.8h,固定化酶活力可达5518U/g。固定化酶的最适pH为10,最适温度为60℃,制得的固定化酶的热力学稳定性和操作稳定性较好。此外,固定化酶重复利用5个循环后酶活力仅降低40%。     

氨基化Fe3O4-SiO2固定化磷脂酶A1

以磁性Fe3O4-SiO2纳米颗粒为载体,研究固定化条件对磷脂酶活力的影响,通过响应面试验得到最优固定化条件为：固定化pH 6.7、固定化温度30 ℃、固定化时间7.9 h、戊二醛质量分数8.3%、加酶量8.2 mL/50 mg,在此条件下酶活力回收率能达到63.6%,蛋白固载率68%。并对制备的固定化磷脂酶的化学组分、形态结构和粒径进行分析,结果表明磷脂酶固定化效果较好,粒径均一,载体平均粒径为200 nm左右。固定化酶热稳定性、pH值稳定性和贮藏稳定性增强,最适反应温度为50 ℃,最适pH 6.0,重复操作10 次后保留60%以上的初始酶活力。     

PVA小珠表面固定化α-淀粉酶及其性质研究

聚乙烯醇(PVA)具备优良的生物相容性和大量可以用于修饰的羟基。文中通过戊二醛交联得到水不溶性PVA小珠,对PVA小珠的表面进行环氧改性,并采用共价交联法固定化α-淀粉酶。对固定化与自由α-淀粉酶性质进行对比:固定化酶的最适催化温度(70℃)比自由酶(65℃)高,最适催化pH(6)与自由酶相同,热稳定性优于自由酶,对酸碱的敏感性也降低;重复使用8次仍保持60%酶活力。     

Immobilization of pepsin on chitosan beads

In this study, chitosan beads were prepared by using a cross-linking agent and the resulting beads were employed in immobilization process. Studies on free and immobilized pepsin systems for determination of optimum temperature, optimum pH, thermal stability, pH stability, operational stability, storage stability and kinetic parameters were carried out. The optimum temperature interval for free pepsin and immobilized pepsin were 30–40 and 40–50 °C, respectively. Free and immobilized pepsin showed higher activity at pH 2.0–4.0. Apparent K_m = 12.0 g L⁻¹ haemoglobin (1.56 mM tyrosine) and V_max = 5220 μmol (mg protein min)⁻¹ values were obtained for free pepsin, while apparent K_m = 20.0 g L⁻¹ haemoglobin (2.16 mM tyrosine) and V_max = 2780 μmol (mg protein min)⁻¹ values were obtained for immobilized pepsin. Thermal stability and storage stability of immobilized pepsin were higher than that of free pepsin. Milk clotting activity was used for evaluation of the applicability of pepsin immobilization to industrial process. Optimum milk clotting temperature was found as 40 °C for free pepsin and 50 °C for immobilized pepsin.