~(131)I标记新型小分子肽VP2

本文通过双功能偶联剂5-(三正丁基锡)-3-吡啶甲酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPC)将131I标记到小分子融合多肽VP2上,研究了131I标记多肽VP2的体内外稳定性及在正常小鼠体内的代谢与分布。结果表明,该标记药物室温下放置48h后放化纯度仍可达97%,其在小鼠体内可通过胃肠道快速代谢,在甲状腺的摄取较低。用间接标记法得到的131I-SPC-VP2在体内外有良好的稳定性。     

电转条件对Cas9核糖核蛋白基因编辑效率的影响

直接向细胞内输运CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物(Cas9 RNP)对于进行各种基因编辑、基因表达调控和DNA/RNA成像具有重要意义。电转是向细胞内导入Cas9 RNP的重要方法。本工作研究了电压、脉冲长度及脉冲次数等电转条件对Cas9 RNP细胞内基因编辑效率的影响,评估了不同电转条件下的细胞存活率。结果显示:电压为1 300 V,脉冲次数为1,脉冲宽度为30 ms时,Cas9 RNP具有较高的基因编辑效率且生物安全性较好。本工作为CRISPR/Cas9复合物进一步的生物医学应用提供了指导依据。     

64Cu-NOTA-NOC的制备及体内生物分布初步研究

对生长抑素八肽类似物NOTA-NOC进行⁶⁴Cu标记,并对⁶⁴Cu-NOTA-NOC的体外稳定性、脂水分配系数、正常及荷瘤小鼠体内分布进行初步研究。建立⁶⁴Cu-NOTA-NOC的标记及质控条件;考察⁶⁴Cu-NOTA-NOC的体外稳定性,测定其脂水分配系数;通过尾静脉注射⁶⁴Cu-NOTA-NOC至小鼠体内,进行生物分布研究。结果表明：室温条件下即可获得标记率大于95%的⁶⁴Cu-NOTA-NOC;⁶⁴Cu-NOTA-NOC在缓冲溶液及10%胎牛血清溶液中具有良好的稳定性,脂水分配系数为-1.12±0.005 6;⁶⁴Cu-NOTA-NOC在正常昆明（KM）小鼠体内主要经肾脏代谢,血液摄取值随时间下降明显,显示其体内清除速度较快;在荷BON-1胰腺癌裸鼠体内也主要经肾脏代谢;在肿瘤中具有较高的摄取,注后2 h,肿瘤/肌肉摄取比值达10.38;荷BON-1胰腺癌裸鼠的PET/CT显像结果显示,1 h时,肿瘤对⁶⁴Cu-NOTA-NOC的摄取率最高,为7.7%ID/g,而给予阻断剂后,肿瘤对⁶⁴Cu-NOTA-NOC的摄取率显著降低,为0.94%ID/g。NOTA-NOC的⁶⁴Cu标记在室温条件下即可完成,⁶⁴Cu-NOTA-NOC在缓冲溶液及10%胎牛血清中具有较好的稳定性;其在动物体内主要经肾脏代谢,体内清除较快,在胰腺癌肿瘤组织中有较高摄取;PET/CT实验结果显示肿瘤对⁶⁴Cu-NOTA-NOC的摄取具有特异性。初步的研究结果表明,⁶⁴Cu-NOTA-NOC具有用于胰腺癌诊疗的潜质,值得开展进一步研究。     

靶向微小RNA-155的放射性探针在乳腺肿瘤细胞的靶向研究

探讨靶向microR-155(微小RNA-155,miR-155)放射性探针在乳腺癌细胞水平的靶向调控、摄取和分布情况,以期为活体靶向研究提供有效的候选探针。通过双功能偶联剂NHS-MAG3构建放射性~(99m)Tc标记的miR-155靶向和无义探针。置于人新鲜血清中,使用薄层层析法测定其放化纯度。转染乳腺癌MCF-7细胞后,通过western blotting评价其对miR-155靶蛋白C/EBPβ的调节作用,并测定不同时间点该探针的细胞摄取率。合成荧光蛋白FAM标记的靶向和无义探针,通过共聚焦显微镜评价荧光标记探针在肿瘤细胞内的分布情况。结果显示,~(99m)Tc标记miR-155靶向探针的标记率为97%,放化纯度大于98%,放射性比活度为3.75GBq/μg。在人新鲜血清中12h,放化纯度大于95%。与未处理细胞对比,未标记和标记的miR-155靶向探针均能上调MCF-7细胞内C/EBPβ蛋白表达水平。随着孵育时间延长,~(99m)Tc标记的miR-155靶向探针在MCF-7肿瘤细胞的细胞摄取率明显高于对照组。荧光标记的miR-155靶向探针在MCF-7细胞中24h显示出稳定、高效的靶向分布。结果表明,miR-155靶向的放射性探针在乳腺癌细胞水平具有良好的靶向性和生物活性,具有潜在的体内肿瘤显像应用价值。     

64Cu标记DKFZ-PSMA-617探针的制备、质控及体内分布的研究

目的：利用医用回旋加速器固体靶系统制备PET核素⁶⁴Cu,进行前列腺特异性膜抗原（PSMA）分子探针DKFZ-PSMA-617（PSMA-617）研究。建立⁶⁴Cu-PSMA-617标记化合物生产及初步快速质量控制方法,为PSMA高表达肿瘤的PET显像及放射性免疫导向手术提供新型探针。方法：通过优化反应条件,实现固体靶制备的⁶⁴Cu对PSMA-617的快速标记与纯化。利用放射性薄层层析分析(Radio-thin layer chromatography, Radio-TLC)和放射性高效液相色谱(Radio-high performance liquid chromatography, Radio-HPLC),进行⁶⁴Cu-PSMA-617放化纯和稳定性检测。参考2015年《中国药典》进行⁶⁴Cu-PSMA-617的初步质量控制。通过静脉注射1.85 MBq的⁶⁴Cu-PSMA-617至Balb/c小鼠体内,进行该探针的体内分布研究。结果：⁶⁴Cu-PSMA-617的标记率>96%, 放化纯度>98%,标记化合物在多种缓冲液中放置24 h依然保持原有放化纯度。经过尾部静脉注射到小鼠体内后, 放射性主要积累在肝脏/肾脏部位,符合该探针在生物体内的代谢行为。结论：本研究实现了⁶⁴Cu-PSMA-617探针的快速标记并建立了其质量控制方法,⁶⁴Cu-PSMA-617具有较好的理化性质,体内分布研究确认了其具有较好的生物学性质,该研究结果可为其进一步用于前列腺癌诊疗的临床转化奠定基础。     

新型肺癌小分子多肽的~(131)I标记及其在小鼠体内的生物分布

建立肺癌特异性靶向小分子多肽cNGQGEQc的~(131)I标记方法,研究~(131)I-cNGQGEQc在正常小鼠体内的生物学分布特性。采用氯胺-T法对N端连接有酪氨酸的cNGQGEQc进行~(131)I标记,测定~(131)IcNGQGEQc的标记率、放化纯度、脂水分配系数及在生理盐水(NS)和正常人血清中的体外稳定性,并对标记物在正常小鼠体内的分布进行了初步研究。结果表明,~(131)I-cNGQGEQc的标记率大于90%,比活度为0.4TBq/g;~(131)I-cNGQGEQc在正常人血清和NS中较稳定;~(131)I-cNGQGEQc的脂水分配系数lgP为—1.68,体内生物分布结果表明,肾脏的放射性摄取率在1 h和12 h分别为(10.59±4.66)%ID/g和(1.79±0.89)%ID/g,肾脏的放射性摄取明显高于其他脏器,表明~(131)I-cNGQGEQc主要经肾脏代谢。以上结果表明,~(131)IcNGQGEQc的标记率较高,在体外具有良好的稳定性。~(131)I-cNGQGEQc为水溶性,可用于进一步的靶向诊断与治疗的研究。     

碘标锰卟啉及其小鼠体内分布

通过131I标记锰卟啉(MnTBAP)探讨锰卟啉在小鼠体内的分布代谢。采用Iodogen法对锰卟啉进行131I标记;以聚酰胺薄膜为支持介质、生理盐水为展开剂,测定标记物的标记率和放化纯度;KM小鼠尾静脉注射131I-MnTBAP(每只185kBq,n=6),分别于注射后5、10、30、60、120、240、1 440min取各脏器,称重、测定计数率,计算每克组织摄取注射剂量的百分率(%ID/g)。结果表明,131I-MnTBAP标记率达96.3%,其放化纯在标记后2、24、48h分别为96%、95%、94.5%;动物实验显示131I-MnTBAP在小鼠体内广泛分布,主要经肝和肾脏进行代谢,肝、肾的放射性摄取在注入后5min时分别为8.34%ID/g、12.23%ID/g,4h时则分别下降为0.34%ID/g、0.73%ID/g,血液中放射性清除较快,注入后5min时血液中放射性摄取为5.55%ID/g,4h为0.86%ID/g。因此,碘标记锰卟啉的标记物体外稳定,体内主要经肝、肾代谢,可用于进一步的微量示踪研究。     

超顺磁性氧化铁纳米粒子SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的~(64)Cu标记、纯化及生物分布

对64 Cu标记超顺磁性氧化铁纳米粒子SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的标记及纯化条件进行探索,并根据其在小鼠体内的生物分布研究结果,揭示其主要的代谢方式。通过对标记过程中配体浓度、温度、时间等条件的改变,探究64 Cu标记SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的最优条件;并采用二乙基三胺五乙酸(DTPA)螯合标记混合物中游离的64 Cu,经PD-10柱纯化后得到放化纯较高的标记物;采用快速薄层层析法测定标记物的标记率和放化纯;分别测定了标记物的体外稳定性和脂水分配系数;将64 Cu标记的氧化铁纳米粒子经尾静脉注射到正常鼠的体内,分别于注射后不同时间点取各脏器,称重、测定放射性计数率,计算每克组织的百分注射剂量率(%ID/g)。经条件优化后得到的64 Cu-SPION-dopa-PEG-DOTA/RGD的标记率为63%,PD-10柱纯化后放化纯大于95%,水溶性良好,且放化纯在标记后12h内在磷酸盐缓冲液和人血清白蛋白中表现出了较高的稳定性;动物体内生物分布实验显示,该标记物在小鼠体内主要经肝脏代谢,肾脏排泄,血液中放射性清除较快。该标记物可用于后续的PET/MRI双模态显像的研究。     

123I-MIBG的制备及动物实验研究

采用亚铜离子催化法制备¹²³I-MIBG,对其制备条件进行了优化,并研究了所制备的¹²³I-MIBG在常温下存放的稳定性以及在正常小鼠体内的生物分布情况。采用优化后的标记条件,¹²³I-MIBG的标记率可达95%以上,制得的不同浓度和比活度的¹²³I-MIBG室温下至少可稳定存放48h以上,显示出其良好的体外稳定性。体内生物分布数据显示：¹²³I-MIBG在肾上腺有最高的摄取(6.18±1.01)%ID•g^-1,且在48h内一直保持着较强的吸收;在心、肝、脾、肺、胃肠中也均有一定的摄取,但在血中的摄取量较低。¹²³I-MIBG在组织内的吸收与代谢趋势与文献报道结果相一致。     

~(64)Cu标记DKFZ-PSMA-617探针的制备、质控及体内分布的研究

目的:利用医用回旋加速器固体靶系统制备PET核素~(64)Cu,进行前列腺特异性膜抗原(PSMA)分子探针DKFZ-PSMA-617(PSMA-617)研究。建立~(64)Cu-PSMA-617标记化合物生产及初步快速质量控制方法,为PSMA高表达肿瘤的PET显像及放射性免疫导向手术提供新型探针。方法:通过优化反应条件,实现固体靶制备的~(64)Cu对PSMA-617的快速标记与纯化。利用放射性薄层层析分析(Radio-thin layer chromatography, Radio-TLC)和放射性高效液相色谱(Radio-high performance liquid chromatography, Radio-HPLC),进行~(64)Cu-PSMA-617放化纯和稳定性检测。参考2015年《中国药典》进行~(64)Cu-PSMA-617的初步质量控制。通过静脉注射1.85 MBq的~(64)Cu-PSMA-617至Balb/c小鼠体内,进行该探针的体内分布研究。结果:~( 64)Cu-PSMA-617的标记率96%,放化纯度98%,标记化合物在多种缓冲液中放置24 h依然保持原有放化纯度。经过尾部静脉注射到小鼠体内后,放射性主要积累在肝脏/肾脏部位,符合该探针在生物体内的代谢行为。结论:本研究实现了~(64)Cu-PSMA-617探针的快速标记并建立了其质量控制方法,~(64)Cu-PSMA-617具有较好的理化性质,体内分布研究确认了其具有较好的生物学性质,该研究结果可为其进一步用于前列腺癌诊疗的临床转化奠定基础。     

125I标记重组MIF在炎症模型小鼠体内的生物学分布

为初步评价125I-rMIF(重组巨噬细胞移动抑制因子,Recombinant Macrophage Migration Inhibition Factor ,rMIF)在炎症显像中的应用价值,研究了125I-rMIF的稳定性、特异性及在炎症模型小鼠体内的生物学分布规律.结果显示,125I-rMIF的标记率为96.5%,室温下48 h内其生物学性质稳定.体内生物学分布研究显示,125I-rMIF主要由肝脏和肾脏代谢,血液清除较快.尾静脉注射125I-rMIF 0.5、1、6、24 h后,炎症肢体(靶)与对侧健肢(非靶)的放射性摄取比(T/NT)分别为1.42、1.35、2.18和2.05.以上结果表明,125I-rMIF具有在活体内炎症定位导向能力,但在早期优越性不明显,6 h后效果较佳,因此对隐匿性或亚急性炎症病灶的诊断具有潜在的临床价值.     

~(99m)Tc标记生长抑素类似物KE108的制备及生物学评价

为了探讨生长抑素类似物~(99m)Tc-HYNIC-KE108用于生长抑素受体阳性肿瘤显像的可行性,本研究设计合成了新型的生长抑素类似物HYNIC-KE108,并进行~(99m)Tc标记,优化标记条件,测定标记物的脂水分配系数和体外稳定性,研究其在正常小鼠及荷瘤鼠体内的生物分布。在优化条件下,~(99m)TcHYNIC-KE108的标记率90%,经Waters Oasis HLB小柱纯化后,放化纯度98%,标记物的脂水分配系数logP为0.43±0.02(n=3),体外稳定性良好。标记物在正常小鼠体内血液清除快,主要通过肾脏代谢,在胃、肺和肝脏中放射性摄取相对较高。荷瘤鼠体内分布结果表明,标记物注入体内4h时在肿瘤中的放射性摄取为(1.14±0.91)%ID·g-1,肿瘤与血、肌肉、心脏的放射性摄取比(T/NT)为1.78、8.14、3.35。本工作为进一步研究~(99m)Tc标记的KE108作为生长抑素受体阳性肿瘤显像剂提供了实验依据。     

^99Tc^m-EC-guanine在小鼠体内分布的研究

本文研究99Tcm-EC-guanine在小鼠体内的生物分布规律,用薄层色谱仪和纸层析法测定其标记率及放化纯.正常健康昆明小鼠48只,随机分为8组,尾静脉注射99Tcmr-EC-guanine 3.7 MBq,不同时间点放血处死.取血、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脑、骨骼、肌肉,测量其每克组织注射百分剂量率(%ID/g).同时,正常小鼠及荷LOVO大肠癌小鼠各3只,注射99Tcm-EC-guanine,相同时间点进行平面显像,观察99Tcm-EC-guanine在小鼠体内各器官的分布.99Tcm-EC-guanine标记率98%,8 h内放化纯大于95%,在30 min内,正常小鼠除肾脏外的各组织、器官的%ID/g下降均明显.血液廓清速度快,主要通过肾排泄、肝代谢,5min时,在肾、肝的%ID/g分别为20.66和13.20,30 min、4 h时分别为15.43、7.03和11.37、7.31;脑的各时间点%ID/g均小于0.5;肌肉组织分布少,30 min时为1.11,4 h为0.65,在心、肺、脾、胃、肠及骨骼分布不多;显像结果与体内分布一致,荷瘤小鼠瘤体清晰显示.99Tcm-EC-guanine标记简便,标记率及放化纯高,小鼠体内生理分布表明其可能成为一种好的嘌呤代谢显像剂.     

99Tcm(CO)3-CNRGD的制备及生物学评价

合成了含异腈基团的多肽偶联物（CNRGD）,并用［⁹⁹Tc^m(CO)₃(H₂O)₃］⁺标记,得到具有与整合素α_vβ₃受体多结合位点的⁹⁹Tc^m(CO)₃-CNRGD,并对其进行了体内外生物学评价。结果表明,在优化的标记条件下,⁹⁹Tc^m(CO)₃-CNRGD的标记率达到77%,纯化后,标记物放射化学纯度大于96%。体外稳定性实验显示其具有很高的稳定性;脂水分配系数显示其具有较好的脂溶性。正常小鼠体内分布显示,⁹⁹Tc^m(CO)₃-CNRGD在血液中清除较快,主要通过肝肾代谢。荷MCF-7人乳腺癌裸鼠体内分布显示,注射1、4h后,标记物在肿瘤部位的摄取值达(2.38±0.37)%ID/g和(1.57±0.21)%ID/g,瘤/血比分别达0.71±0.09、1.15±0.15,表明该标记物在肿瘤细胞中有一定的摄取和较长的滞留时间。     

生长抑素类似物EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA的99Tcm标记及动物实验

本文设计合成了新的生长抑素类似物99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA,并进行了正常小鼠及荷瘤裸鼠体内分布和显像,以探讨99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA作为生长抑素受体阳性肿瘤显像药物的可能性。合成了Nε-HYNIC-Lys0-TOCA及其中间产物,并经核磁共振谱和质谱等分析确证。在优化的标记条件下,99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA的标记率为96%左右,经Sep-Pak柱纯化后,放化纯达99%以上。体外稳定性实验及小鼠尿样分析表明标记物具有很好的体内外稳定性。99Tcm-EDDA/HYNIC-Lys0-TOCA在正常小鼠体内的清除非常迅速(血液半衰期为20min左右),主要通过肾脏途径代谢,同时在胃、肺和肾上腺也有相对较高的放射性摄取。荷瘤裸鼠体内分布实验显示该药物在肿瘤组织有较高的放射性摄取,给药1h后肿瘤与血、肌肉等组织有较高的T/NT比值。γ显像表明,在给药后1h至2h,肿瘤组织有明显的放射性摄取,显像清晰。初步研究结果显示,该药物有望发展成为生长抑素受体阳性肿瘤的显像剂。     

99Tcm-DTPA-Folate的制备及其荷瘤裸鼠体内分布

制备了99Tcm-DTPA-Folate并对其在荷瘤裸鼠的体内分布进行了初步探索.将叶酸(Folate)与DTPA连接,合成DTPA-Folate,再用99Tcm标记,考察标记物的纯度和稳定性,并进行荷人SGC-7901胃癌肿瘤裸鼠的体内分布特性研究.结果表明,99Tcm-DTPA-Folate的标记率＞98%.标记物室温放置4h,放化纯度＞90%.裸鼠腹腔注射99Tcm-DTPA-Folate后8h,肿瘤与周围肌肉的含量比值高达7.51.     

碘标记毒死蜱及其在小鼠体内的生物分布

为探讨¹³¹I标记毒死蜱（Chlorpyrifos, CPF）在小鼠体内的分布特点,采用Iodogen法对CPF进行¹³¹I标记,KM小鼠尾静脉注射¹³¹I-CPF（185 kBq/只,n=5）,分别于注射后5、10、30、60、120、240、1440 min取各脏器,计算每克组织摄取注射剂量的百分率（%ID/g）。结果显示,¹³¹I-CPF标记率达93.5%,放化纯度为96.9%,¹³¹I-CPF在小鼠体内广泛分布,主要经肺、胃、小肠、大肠、肌肉和颌下腺吸收,其放射性摄取率在注药后 10 min 时达高峰,分别为37.12%ID/g、6.18%ID/g、8.12%ID/g、8.15%ID/g、7.04%ID/g和7.02%ID/g;经肝和肾进行代谢,其放射性摄取率在5 min时分别为4.34%ID/g和8.50%ID/g, 4 h为0.22%ID/g和 0.69%ID/g。血液中放射性清除较快,放射性摄取率在注入后5 min时为37.27%ID/g,4 h为1.35%ID/g。碘标记CPF体外稳定,体内主要经肺和消化道吸收,肝、肾代谢,可用于进一步的微量示踪研究。     

125I-NGF在小鼠体内的血药浓度-时间过程

本研究涉及应用Idogn法对神经生长因子（NGF）进行¹²⁵I标记,并用同位素示踪法与电泳法相结合的方法研究¹²⁵I- NGF在小鼠体内的血药浓度时间过程。结果显示，静脉注射 ¹²⁵I- NGF在小鼠体内的代谢规律符合二房室开放模型。分布相半衰期为0.13h，消除相半衰期为3.68h，¹²⁵I-NGF在小鼠体内分布和消除均较快，清除率为0.125L•h^-1•kg^-1，表观分布容积为0.697L•kg^-1，曲线所围面积为16.01μg•h•L^-1。     

188Re标记抗人前列腺癌单克隆抗体及其在荷瘤裸鼠体内的放射性分布

为探讨188Re标记抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3的方法及其生物学分布,采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物,常规测定标记率和免疫活性,在荷瘤裸鼠体内检测标记物的生物学分布.结果显示,188Re-7E11C5.3的标记率为(93.16±2.18)%,免疫活性分数为(74.86±1.86)%;经尾静脉注入裸鼠体内后,肿瘤组织摄取率在24h达高峰,非肿瘤组织在4h摄取率较高,以后均随时间延长逐步降低;血液放射性清除迅速;24h时T/NT值达最大,至72h仍可保持在较高水平.结果表明,188Re-7E11C5.3在裸鼠体内对前列腺癌移植瘤有良好的靶向定位作用,可用于前列腺癌放射免疫显像和治疗研究.     

99Tcm-EGF的直接法合成及其在荷C6动物体内生物学分布

探索用⁹⁹Tc^m直接标记表皮生长因子（EGF）的方法并研究其在荷C6动物体内的生物学分布特点。巯基乙醇（20 mL/L）10 μL还原EGF（2.5 μg）;含0.5 μg SnCl2的亚甲基二膦酸盐（MDP）溶液将还原高价锝使之与还原EGF的巯基结合,放化纯度大于95%,标记物稳定性较好,在6 h内放化纯度大于95%。通过内皮细胞培养进行⁹⁹Tc^m-EGF的生物活性鉴定,显示EGF在锝标记前后生物学活性未见明显改变（P＞0.05）。⁹⁹Tc^m -EGF在荷瘤鼠体内生物学分布显示肝、脾、肾等组织放射性分布较高,瘤区放射性较高,而脑组织最低,4 h瘤与正常组织放射性摄取比值(Tumor/Normal Tissue)为2.25, SPECT全身显像显示瘤组织放射性核素浓聚。因此直接合成的⁹⁹Tc^m-EGF可望成为特异性诊断高表达EGFR肿瘤的SPECT分子显像剂。