骨髓基质细胞对放射损伤复合烧伤小鼠粒单系祖细胞…

研究骨髓基质细胞对放射损伤复合烧伤小鼠粒单系祖细胞的。结果表明：（１）基质细胞培养上清液可支持少量粒单系祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ０生长；而骨髓贴壁细胞层对ＣＦＵ－ＧＭ有明显刺激生长作用。（２）加入外源性粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）时，未见到基质细胞对粒系祖细胞生长的 影响。（３）烧伤、放射损伤、放射烧伤复合伤伤后３￣５ｄ，均见到ＣＦＵ－ＧＭ生长受抑制。损伤后仍能见到基质细胞对粒系细胞生长的刺     

骨髓基质细胞对放射损伤复合烧伤小鼠粒单系祖细胞生长的影响

研究骨髓基质细胞对放射损伤复合烧伤小鼠粒单系祖细胞的影响。结果表明：（１）基质细胞培养上清液可支持少量粒单系祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）生长；而骨髓贴壁细胞层对ＣＦＵ－ＧＭ有明显刺激生长作用。（２）加入外源性粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）时，未见到基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。（３）烧伤、放射损伤、放射烧伤复合伤伤后３～５ｄ，均见到ＣＦＵ－ＧＭ生长受抑制。损伤后仍能见到基质细胞对粒系细胞生长的刺激作用。粒细胞受抑制严重的单放组和复合伤组，基质细胞的刺激作用较单烧伤组明显。以上结果说明，在放烧复合伤造血损伤的修复与重建过程中，骨髓基质细胞起着良好的刺激作用     

60Co γ射线照射对培养小鼠骨髓基质细胞IL-6表达的影响及机制研究

观察了^60Coγ射线照射对培养小鼠骨髓基质细胞（BMSCs)的白细胞介素－6（IL－6）mRNA及蛋白表达的影响。采用Dexter方法体外培养小鼠BMSCs,8.0Gy^60Coγ射线照射后用放射免疫法测定培养上清液中IL－6的浓度,应用逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）的方法检测IL－6的mRNA表达,同时与NF－KB抑制剂PDTC或地塞米松预处理的BMSCs相比较。结果表明,培养小鼠BMSCs在正常情况下低表达IL－6,辐射后2h时其mRNA水平表达升高,4h时达峰值,之后开始下降;其蛋白表达在2h时开始升高,8－12h时达峰值,24h时基本恢复正至正常水平;而BMSCs在受照射前2h用PDTC或地塞米松预处理后,辐射并不引起IL－6mRNA表达的改变。结果显示,^60Coγ射线照射能够激活培养小鼠BMSCs细胞IL－6基因的转录,使细胞分泌IL－6增多,其机制可能与照射引起的NF－KB活化有关。     

小鼠骨髓细胞及骨髓基质细胞混合输注对受致死剂量照射小鼠造血重建的影响

为观察小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）及骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）混合输注对受致死剂量照射 小鼠造血重建的影响,给予受致死剂量照射的 Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠输注同基因 ＢＭＣ１×１０７个及经体 外扩增的同基因原代 ＢＭＳＣ ２×１０５个,并与单纯骨髓移植组进行了比较。结果表明,移植后第 １４天外周血白细胞、血小板回升较快,第 １５天、第 ２０天粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系 祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ、 ＣＦＵ－Ｅ）、造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）明显高于后者,第 ２０天已达正常。说明原 代ＢＭＳＣ不仅可以移植,而且能够加快造血重建;提高移植效果。     

辐射对小鼠骨髓基质细胞分泌血管内皮生长因子的影响

摘要为研究γ射线对小鼠骨髓基质细胞中血管内皮细胞生长因子（Vascular endothclia growth factor,VEGF）的影响,使用不同剂量（0、2．5、5、10Gy）的γ射线全身照射C57BL／6J小鼠。分别用逆转录多聚酶链反应（Reverse transfer polymcrasc chain reaction,RT-PCR）和酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbcnt assay,ELISA）法研究了照射后体外培养3、6、10d的骨髓基质细胞中mRNA和培养上清中的VEGF水平。结果发现,对非照射组,随着骨髓基质细胞体外培养时间的延长,其VEGF在基因和蛋白水平都显著升高。受到5Gy或10Gy射线照射后,VEGF随时间变化的总趋势与非照射组相同。在各时间点照射组的VEGF基因表达均高于同时点的非照射组。照射组培养6d上清液中VEGF含量高于同时点的非照射组;而在第10d时,却显著低于同时点的非照射组。分析其原因是因为受到照射后培养10d的骨髓基质细胞数已显著低于非照射同时点的细胞数,其培养上清中VEGF的减少与分泌VEGF的总细胞数减少有关。结果说明,5Gy或10Gy射线会引起骨髓基质细胞VEGF的表达增强。这一现象提示VEGF的表达升高可能是机体的一种代偿性反应,有利于机体造血的重建。辐射后,小鼠骨髓中VEGF的改变与骨髓基质的损伤、造血恢复的关系值得进一步研究。     

枸杞多糖对受X射线照射小鼠外周血象及骨髓单个核细胞的影响

利用直线加速器全身均匀一次性照射昆明小鼠,建立放射损伤模型,经腹腔分别注射生理盐水(NS)、枸杞多糖(LBP)50、100和200 mg/kg,连续注射观察14天,计数小鼠外周血WBC、RBC、PLT及骨髓单个核细胞(BMNCs),检测BMNCs的细胞周期、凋亡率及BMNCs表面黏附分子CD49d和CD44的表达水平。结果表明,照射后小鼠表现为饮水、进食减少,行动缓慢、嗜睡,毛发凌乱,光泽性差,说明放射损伤模型建立成功;在相同时间点下,NS组与正常对照组相比,外周血WBC、RBC、PLT及BMNCs细胞计数明显减少(p0.05)、BMNCs的细胞增殖能力明显减弱(p0.05)、S期细胞比例显著减少(p0.05)、G_0/G_1期细胞比例显著增加、BMNCs的细胞凋亡率明显增多(p0.05)、黏附分子CD49d和CD44表达明显减少(p0.05);而各LBP组与NS组相比,外周血各项指标、BMNCs细胞计数明显增多(p0.05)、BMNCs细胞的增殖能力明显增强(p0.05)、S期细胞比例显著增多(p0.05)、G_0/G_1期细胞比例显著减少、细胞凋亡率明显减少(p0.05)、黏附分子CD49d、CD44表达明显增加(p0.05)。以上结果说明,LBP可能通过加速BMNCs细胞周期由G_0/G_1期向S期转换、降低BMNCs细胞凋亡率,提高放射损伤小鼠BMNCs细胞的增殖能力,进而上调细胞表面黏附分子CD49d和CD44的表达,来促进辐射损伤小鼠造血功能的恢复。     

E838对放射损伤小鼠活存及造血功能的影响

动物照射前后不同时间给予新型抗放药E838腹腔注射,观察其死亡率和死亡动物活存时间,并在用药后不同时间检测其外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、骨髓粒系祖细胞集落形成单位CFU－GM和造血干细胞CFU－S数,研究了E838对放射损伤小鼠存活及造血功能的影响,结果表明,E838预防用药能够明显提高损伤动物的30d存活率及平均活存时间,对造血功能的研究结果也表明,E838预防用药能够减少损伤后外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、骨髓粒－单系祖细胞数及造血干细胞CFU－S数的下降幅度,显示出E838对放射损伤具有确切的预防效果,对损伤小鼠造血功能也有明显的保护作用。     

白细胞介素-6及肿瘤坏死因子对受照小鼠造血恢复的影响

采用PHILIPS－SL18型电子直线加速器产生的6MV高能X射线照射Balb/c小鼠（剂量为6．5Gy),照后不同时间皮下注射不同剂量的白细胞介互－6（IL－6）和／或肿瘤坏死因子（TNF）,观察外周血白细胞,血小板,骨髓有核细胞计数和脾集落形成单位（CFU－S）的变化,以探讨IL－6对放射损伤后造血恢复的影响,结果表明,照射后应用IL－6组较对照组外周血白细胞,血小板和骨髓有核细胞计数恢复快,且呈量依赖关系,CFU－S则在TNF与IL－6协同作用时数量多,体积大,提示IL－6和TNF有利于放射损伤后的造血恢复。     

四环素衍生物CMT-8对人类宫颈癌细胞HeLa的生长及其放射敏感性的影响

探讨四环素衍生物CMT-8对人宫颈癌细胞HeLa的生长以及放射增敏性的影响。分别采用MTT法、伤口愈合实验、细胞粘附实验、流式细胞术和Western blot法测定CMT-8对HeLa细胞生长、迁移、粘附、周期的影响及其相关蛋白表达水平的改变。实验结果表明,CMT-8可有效抑制HeLa细胞的生长,降低其迁移、粘附能力,引起细胞G0/G1期阻滞、下调周期蛋白Cyclin D和Cyclin E的表达水平。CMT-8联合X射线能明显抑制细胞的生长,下调DNA损伤修复蛋白Ku70和DNA-PKcs的表达水平。这些发现提示,CMT-8作为人宫颈癌抗肿瘤新药可能是与其抑制细胞生长、细胞周期调控和抗迁移有关。另外,CMT-8在低剂量下可以提高人宫颈癌细胞的放射敏感性,与其调节DNA损伤修复蛋白的表达水平有关。     

神经肽P物质对放射损伤皮肤成纤维细胞周期及凋亡的影响

为探讨神经肽P物质(substance P,SP)对放射损伤皮肤成纤维细胞凋亡及周期的影响,将人皮肤成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF-1)分为0 Gy组(对照组)和12 Gy组、18 Gy组、12 Gy+SP组、18 Gy+SP组4个实验组。实验组经12 Gy、18 Gy的电子束照射,其中12 Gy+SP组、18 Gy+SP组于照射前1 h给予10^-7 mol/L SP干预。照射后48 h,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax表达情况。细胞周期检测显示,与0 Gy组相比,12 Gy和18 Gy组细胞G₂期百分比显著增加;18 Gy+SP组与18 Gy组相比,细胞G₂期百分比显著降低。细胞凋亡检测显示,与0 Gy组相比,12 Gy和18 Gy组细胞凋亡率显著升高;SP干预组(12 Gy+SP组、18 Gy+SP组)较照射组(12 Gy组、18 Gy组)的细胞凋亡率显著降低。实时荧光定量PCR对Bcl-2和Bax表达检测显示,与0 Gy组相比,12 Gy和18 Gy照射组细胞Bax基因表达显著升高,Bcl-2基因表达显著降低;SP干预组(12 Gy+SP组、18 Gy+SP组)较照射组(12 Gy组、18 Gy组),Bcl-2基因表达显著升高,Bax基因表达差异不显著。上述结果揭示,电子束照射可诱发人皮肤成纤维细胞的凋亡及细胞G₂期阻滞;SP可抑制放射损伤人皮肤成纤维细胞的凋亡及G₂期阻滞。     

混输脾基质细胞与骨髓细胞悬液在小鼠大剂量辐射损伤修复中的作用

Ｃ５７ＢＬ／６／小鼠经６０Ｃｏγ射线一次整体照射８Ｇｙ后，分成三组：（１）单纯照射８Ｇｙ组。（２）照射后单纯骨髓移植组，（３）照射后混输脾基质细胞（ＳＳＣ）与骨髓细胞（ＢＭＣ）组，以观察骨髓移植和回输脾基质细胞对大剂量照射后受体存活率及造血干细胞（ＣＦＵ－Ｓ）的影响，并初步探讨其可能的机理。结果表明：单纯骨髓移植组受体存活率比单纯照射组高出２７％；而照射后混输ＳＳＣ组之存活率比单照射组高４７％，比单纯骨髓移植组高２２％（Ｐ＜０．０５）。混输ＳＳＣ可明显提高脾ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－Ｆ及ＡＮＡＥ染色（＋）（－）细胞数。在体外混合培养中脾基质细胞对实质细胞增殖起支持与调节作用。     

辐射损伤后造血细胞增殖能力的变化

辐射损伤后，存活的造血细胞的增殖丰伤后造血功能的状态和预后。本实验以辐射损伤小鼠为模型，用ＢｒｄＵ掺入法和ＣＦＵ－ＧＭ培养等方法，观察到４－１０Ｇｙ射一全身照射后４ｈ骨髓细胞的的增殖指数就显著下降，在观察时间内一直处于较低水平（仅为对照组的２０％或更低）。在４－１０Ｇｙ照射后４ｈ或更长，几乎看不到骨髓造血细胞的ＣＦＵ－ＧＭ集落，推测存在一个“成集落休克期”。可见，射线在损伤造血细胞的同时，还明显抑     

小鼠骨髓基质祖细胞低剂量辐射效应研究

采用体外单层和半固体培养方法,研究小鼠骨髓细胞在受到０、２５、５０、７５、１００ｍＧｙ照射后,骨髓基质祖细胞的形成、特性及功能变化。结果表明：各照组组ＣＦＵ－Ｆ有不同程度增多,５０、７５ｍＧｙ组有显著意义;ＣＦＵ－Ｆ基支对粒系祖细胞集落形成单位（ＣＦＵ＿ＧＭ）的支持作用增加;ＣＦＵ－Ｆ基质层对骨髓细胞的粘附能力在５０、７５ｍＧｙ组有显著提高。结论是骨髓基质祖细胞低剂量照射时具有兴奋效应。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞CDK4表达的影响

采用流式细胞术和Northern blot检测X射线全身照射后小鼠骨髓细胞CDK4转录水平和蛋白表达的变化。结果表明,2GyX射线全身照射后4－48h CDK4 mRNA转录水平及蛋白表达均明显下降;0.5-6Gy X射线全身照射后12h CDK4 mRNA水平及蛋白表达亦呈降低改变。结果提示,CDK4在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞G1期阻滞中可能起重要作用。     

电离辐射对小鼠骨髓造血细胞周期进程的影响

采用流式细胞术（ＦＣＭ）观察了Ｘ射线全身照射后小鼠骨髓造血细胞周期进程的时程变化和剂量效应关系,为探讨电离辐射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响。结果显示,２ＧｙＸ射线全身照射后１２ｈ,骨髓细胞出现Ｇ１期细胞百分数升高（ｐ〈０．０５）,４ｈＳ期细胞百分数下降（ｐ〈０．０５）,Ｇ２＋Ｍ期细胞百分数于后４ｈ和１２ｈ升高（ｐ〈０．０５）。量效研究显示,０．５～６Ｇｙ照射后１２ｈＧ１期细胞百分数高于对照组,其中     

致死剂量辐射诱导小鼠骨髓细胞凋亡特征的研究

经＾６０Ｃｏ γ射线以不同剂量全射照射２１３只ＬＡＣＡ小鼠,于照射后４周内分批 杀,将骨髓标本分别进行Ｈ．Ｅ染色,半薄及超薄切片,并通过原位末端标记和ＤＮＡ交电泳观察其生化特性。结果表明：射后６ｈ,各一组小鼠骨髓造血细胞出现凋亡明显增多,且剂量赵大,凋亡细胞越多。凋亡的细胞形态上表现为染色质深度缩、边移,呈半月型,环状或不规则状,核碎片喜讯发小体形成,电泳下可见ＤＮＡ梯状图谱。在２．５～７．０Ｇ６     

蜂胶对大鼠骨髓辐射损伤的防治作用

采用3．0Cy^60Co γ射线一次性全身照射大鼠,观察不同时期给予蜂胶对大鼠外周血白细胞计数(WBC)和骨髓细胞有丝分裂指数的影响。结果表明,照射前、后给予蜂胶均能够显著抑制受照大鼠骨髓细胞有丝分裂指数的降低,减轻大鼠骨髓的辐射损伤并促进白细胞的恢复。     

不同剂量X射线全身照射对小鼠骨髓细胞周期进程的影响

本文采用流式细胞术研究了不同剂量X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化。结果表明，0．075GyX射线全身照射后2－72h骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；2．0Gy全身照射后4h骨髓细胞便开始出现明显的G2阻滞，12h同时出现G1、G2阻滞，而后很快恢复到假照水平。不同剂量（0．05Gy-6.0Gy）全身照射后12h量效结果表明，低剂量范围内（0．05－0．2Gy）骨髓细胞周期各时相细胞百分数未发生明显变化；较大剂量范围内（0．5Gy-6.0Gy）照射后出现明显的G1、G2阻滞，S期细胞百分数减少。提示低剂量全身照射后骨髓细胞周期进程未检测出变化；而较大剂量全身照射后，骨髓细胞出现DNA合成抑制，G1和G2阻滞。     

螺旋藻(Spirulina Platensis)多糖蛋白对辐射诱发小鼠PCE微核率及白细胞数的影响

本试验通过对NIH小鼠骨髓细胞微核分析及外周血白细胞计数表明,螺旋藻多糖蛋白能显著减轻辐射对小鼠PCE微核率及白细胞数的影响。故螺旋藻多糖蛋白有可能作为一种新的有效的天然辐射防护剂。