海枣曲霉产内切菊糖酶的发酵条件及菊糖酶解条件的研究

利用海枣曲霉发酵获得菊糖酶粗酶液,对粗酶液的发酵条件和酶解条件进行了研究.结果表明,菊糖酶的最适发酵条件为:菊糖2%,磷酸二氢铵0.5%,磷酸二氢钾0.25%,MgSO4·7H2O 0.05%,pH 6.0～7.0,接种量8%,温度28℃,时间60h,按最优条件得到的菊糖酶粗酶液,酶活为18.39 U/mL,I/S值为...     

菊糖内切酶催化生产果寡糖研究进展

菊糖内切酶能催化菊糖不完全水解形成果寡糖。果寡糖具有许多独特的生理功能,例如调节肠道菌群、非致龋齿性、降低血清胆固醇、改善脂质代谢、提高机体免疫力且对人体无任何生理毒性等,是公认的益生元代表,因而受到广泛关注。文中简要论述了果寡糖的生理功能和生产方法,重点论述了菊糖内切酶活性测定方法、酶学性质、分子生物学,以及应用等方面的最新研究进展。     

产菊糖酶固定化细胞包埋剂的筛选

把产菊糖酶的克鲁维酵母γ-85细胞固定于脱乙酰几了质、聚乙烯醇-海藻酸钠、琼脂、海藻酸钠、明胶等不同的载体上进行连续发酵,经过对凝胶的机械强度、固定化细胞的最适作用条件及其稳定性、酶活保留率和制作工艺等的综合比较,最后认为明胶是较好的载体。     

菊糖酶在果糖生产中的应用

<正> 脆壁克鲁维氏酵母菊糖酶可水解菊糖生成果糖,通过对其水解工艺条件的研究表明:酶的含量越大,底物浓度越高,水解率越高。在5％菊糖中,添加30u/g菊糖酶,水解约10小时,水解率80％以上,最适作用的温度为50℃,pH5.2。利用热渗法从菊芋中制备5％菊糖抽提液,在50℃,pH 5.2,加酶量30u/g的条件下水解8小时,水解率为86％,产品果糖含量高于90％。 果糖作为甜味剂,具有味感好,甜度高,无析晶现象和具有一定保健功能,是食品加工工业中大量使用的原糖。目前,高果糖浆(含果糖90％)的生产方法是     

菊糖酶提高酿酒酵母利用菊糖产乙醇能力的研究进展

化石能源的枯竭和生态环境的恶化,使乙醇等清洁能源的生产受到越来越多的关注。作为非粮作物的菊芋,因富含菊糖且生态适应能力极强,是生产乙醇的优良生物质原料。但因绝大多数酿酒酵母不具有菊糖降解能力,而无法直接利用菊糖生产乙醇,阻碍了利用菊芋生产乙醇的工业化进程。本文总结了近年来国内外学者采用发酵工程和基因工程手段优化菊糖生产乙醇的研究进展,探讨了菊糖酶在酿酒酵母生产乙醇中所起到的关键作用,并展望了利用菊糖降解元件的数据库挖掘及酿酒酵母菊糖酶的表面展示实现乙醇高效生产的前景。      

牛蒡菊糖的提取及其分离纯化

以水提醇沉工艺,采用单因素实验和正交实验设计方法研究料液比、提取温度、提取时间以及提取次数对牛蒡菊糖提取率的影响,得到牛蒡菊糖提取的最佳因素组合：料液比1∶15（g∶mL）,提取温度80℃,提取时间90 min,提取2次,提取率为90.86%。比较不同的脱色、脱蛋白方法,得到纯度较高的均一多糖。     

内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

利用A¨KTA UPC-900快速蛋白液相色谱系统(FPLC)从黑曲霉发酵粉中分离纯化出内切β-葡聚糖苷酶。分离纯化后的酶比活力提高了8.1倍,回收率为7.5%。经SDS-PAGE电泳分析该内切酶的相对分子质量为26 400。酶学试验研究表明:该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为4.8,Lineweaver-Burk法求得动力学参数,Km和Vmax分别为6.838×10-3mg/mL、2.906×10-2(mL.min)/mg。并确定了FPLC层析缓冲液的离子强度为4.8 mmol/L时分离效果达到最佳。     

发状念珠藻藻蓝蛋白分离纯化及性质研究

采用冻融法破碎发状念珠藻细胞,经过磷酸缓冲液提取、硫酸铵分步沉淀、离子交换层析和凝胶层析分离纯化发状念珠藻藻蓝蛋白,其纯度(A615/A280)达到5.321,纯化因子为7.623。纯化的藻蓝蛋白最大吸收峰为615 nm,其室温荧光发射峰为646 nm,SDS-PAGE电泳显示其α和β亚基的分子质量在14.4～18.4 ku。稳定性实验表明,低温、避光、pH 6～8以及低浓度的蔗糖等条件下发状念珠藻藻蓝蛋白是稳定的。实验结果将为开发利用发状念珠藻藻蓝蛋白提供参考。     

绿色木霉内切葡聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

采用DEAE-650C弱阴离子交换层析、CM-650M弱阳离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶层析和Octyl Sepharose CL-4B疏水层析等分离纯化技术,从绿色木霉M1发酵液中分离纯化得到4个电泳纯的内切葡聚糖酶组分(EG1、EG2、EG3和EG4),比活力分别为41.83,139.96,117.72,126.50 U/mg,分子质量分别为25.4,28.8,56.3,60.5 ku,最适反应温度分别为50,45,55,60℃,最适反应p H分别为6.0,5.0,4.0,5.0,米氏常数Km值分别为9.51,5.06,4.16,4.86 mg/m L。组分EG1、EG3和EG4在30~50℃范围较稳定,组分EG1、EG2和EG4在p H4.0~6.0范围稳定性较好,而组分EG3只在p H5.0的条件下较稳定。Zn2+、Mg2+和K+对组分EG4有激活作用,对组分EG1、EG2和EG3有抑制作用,Ca2+对组分EG1、EG2和EG3有激活作用。     

Aspergillus ficuum 内切菊粉酶的酶解条件优化及酶解动力学研究

采用Aspergillus ficuum 内切型菊粉酶Endo-Ⅰ 酶解商品菊粉制备低聚果糖,经正交试验确定其最适酶解条件为：pH5.0、温度45℃、底物浓度50g/L、加酶量10U/g,在此酶解条件下,低聚果糖得率可达70.37%,酶解产物以DP3 和DP4 为主,同时含有一定量的DP2、DP5、DP6、DP7、DP8;在此条件下酶解自制菊芋干粉时,低聚果糖得率为41.72%,酶解产物以DP3～DP6 的低聚果糖为主,DP2 含量很少,同时酶解液中还含有大量的果糖;在此条件下酶解自制菊芋提取液时,低聚果糖得率高达79.80%,酶解产物中除DP6 含量较低外,其他各聚合度的低聚糖分布比较平均。在此相同酶解条件下酶解72h 时,3 种底物中,以菊芋提取液酶解后的低聚果糖得率最高。因此,应用Aspergillus ficuum 内切型菊粉酶Endo-Ⅰ酶解菊芋制备低聚果糖宜选择菊芋提取液作底物。     

菊粉低聚糖生产的研究进展

菊粉低聚糖是一种功能性低聚糖 ,可以洋姜 ,菊苣等为原料 ,由菊粉内切酶酶解而生产 ,工艺简单 ,成本低。本文简单介绍了菊粉低聚糖的生产意义 ,基本生产过程 ,产物分析方法 ,及国内外开发现状 ;重点介绍了生产过程中技术新进展 ,主要包括原料的预处理 ,菌种的选用 ,酶的固定化 ,细胞的固定化 ,以及原料对产品的影响     

Aspergillus ticuum菊粉酶酶学性质的研究

本实验对Aspergillus ticuum产菊粉酶体系中的外切菊粉酶和内切菊粉酶的酶学性质进行了研究,研究表明二者酶学性质非常相似:两种酶的最适反应温度均在45℃左右;外切菊粉酶的最适反应pH为4.5,内切菊粉酶为pH5.0; Ag 完全抑制两种酶的活性,Fe2 和Al3 对两种酶有较强的抑制作用,尤其是外切菊粉酶,Mg2 对两种酶有激活作用;实验还对两种酶的动力学常数进行了测定和比较.     

毛云芝菌漆酶的分离纯化和性质研究

将发酵液经真空抽滤后得粗酶液,以硫酸铵为盐析剂进行分级盐析沉淀、再经DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析对漆酶进行分离纯化,用SDS-PAGE证明可获得纯的漆酶,纯化倍数为183.69倍,酶活回收率为24.77%。实验表明,该酶在30℃条件下具有较高的稳定性;在pH3.4～5.8范围内的相对酶活均在80%以上,漆酶稳定性较好,pH3.8的时候漆酶的稳定性最好。     

Aspergillus ficuum产果聚糖酶体系的分析

采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳法对Aspergillusficuum产果聚糖酶体系进行了分离 ,获得8条谱带 ;进一步运用薄层色谱 (TLC)和高效液相色谱 (HPLC)法进行分析 ,发现 8条谱带中有 3条属于外切菊粉酶 ,2条属于内切菊粉酶 ,证明了Aspergillusficuum能同时产内切菊粉酶和外切菊粉酶 .     

曲霉羧肽酶的分离纯化研究

采用 (NH4) 2 SO4、酒精、DE52 和SephadexG1 0 0对AspergillusspCP 1发酵液进行分离纯化 ,并检测在分离纯化过程中酶的回收率和比活力 ,最后用SDS PAGE电泳检验酶的纯度。确定 (NH4) 2 SO4饱和浓度在 60 %～ 90 %之间 ,酒精浓度为 3 5 %～ 70 %之间用于粗酶液的提纯 ;电泳得到一个清晰的条带。它们的分子质量约为 15 942u。     

一种耐热性植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究

采用半固态发酵方式培养泡盛曲霉(Aspergillus awamori)AS3.324,通过有机膜超滤、阴离子交换层析、凝胶层析后,得到纯化的植酸酶。酶学性质表明,其反应最适温度为50-55℃,最适pH为5.5,在37℃下以植酸钠为底物的Km值为1.03 nmol/L,Vmax为2.13μmol/(L.min)。EDTA基本不影响植酸酶活性;Ca2+,Mg2+,Mn2+对植酸酶活性有轻微的抑制作用;Fe2+,Zn2+对酶促反应有显著的抑制作用。对该酶的耐热性研究表明,经较高温度条件处理后,仍有较高残余酶活性,与当今商品化的植酸酶相比,有较强的耐热性。泡盛曲霉植酸酶作为动物饲料添加剂具有广泛的应用前景。     

米曲氨基酰化酶的提取及其酶学性质的表征

通过硫酸铵分级沉淀、SephadexG5 0凝胶层析和DEAE Sepharose阴离子交换层析 ,从米曲霉 3 0 42中提取得到了米曲氨基酰化酶 ,该酶的纯化倍数为 5 4.2 9,比活为 647.66U/mg ,总收率为49 5 3 %。详细考察了温度、pH、缓冲体系的离子强度和金属离子对米曲氨基酰化酶酶活的影响。结果表明 ,该酶促反应的最适pH为 7 5～ 8 0 ,最适反应温度随催化反应时间的延长而降低 ,缓冲体系中的离子对酶活有抑制作用 ,而低浓度的Co2 +对酶活有激活作用。     

Partial Purification and Characterization of Sulfhydryl Oxidase from Aspergillus niger

ABSTRACT: Sulfhydryl oxidase (SOX) was purified after extraction and the contaminating catalase activity was completely eliminated in the last chromatography step. A yield of 25% was obtained with a purification factor higher than 300. The isoelectric point was 3.7 and the molecular weight 110 kDa. SOX exhibited an optimal activity at pH 5.6 and its efficiency (V_mapp/K_mapp) increased from pH 4.5 to 6.5. At pH 5.6, the K_mappvalues were 0.5, 2.5, 10.5, 110, and 450 mM for GSH, cysteine, g-glu-cys, dithiothreitol, and homocysteine, respectively, and the V_mappvalues represented 2, 34, 24, and 44% of the V_maPPvalue found for GSH, respectively. Cys-gly was not oxidized by SOX. In the presence of GSH, SOX is able to catalyze the oxidation of cysteine and cys-gly at a significant rate.