洋葱皮黄酮微胶囊技术研究

通过制备洋葱皮黄酮微胶囊,以提高洋葱皮黄酮的稳定性。实验以β-环糊精为壁材,研究了分子包埋法制备微胶囊工艺中不同因素对微胶囊化包埋率的影响。结果表明:芯材与壁材的最佳配比为1∶11.49,搅拌时间60.6min,搅拌温度61℃。在此条件下,产品微胶囊化效率达到41.26%。      

洋葱皮黄酮微胶囊技术研究

通过制备洋葱皮黄酮微胶囊,以提高洋葱皮黄酮的稳定性。实验以β-环糊精为壁材,研究了分子包埋法制备微胶囊工艺中不同因素对微胶囊化包埋率的影响。结果表明:芯材与壁材的最佳配比为1∶11.49,搅拌时间60.6min,搅拌温度61℃。在此条件下,产品微胶囊化效率达到41.26%。     

不同茶多糖对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用比较

本实验利用小鼠3T3-L1前脂肪细胞对绿茶多糖（green tea polysaccharides,GTP）、红茶多糖（black tea polysaccharides,BTP）和乌龙茶多糖（oolong tea polysaccharides,OTP）的减肥作用进行评价。使用气相色谱对GTP、BTP、OTP的单糖组成进行分析。采用噻唑蓝染色法测定3?种茶多糖（tea polysaccharides,TPs）对3T3-L1前脂肪细胞增殖活力的影响。使用流式细胞仪检测3?种TPs对3T3-L1前脂肪细胞细胞周期的影响。采用传统“鸡尾酒”法诱导3T3-L1细胞分化成脂后,测吸光度并计算其分化率。采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶（glycerol phosphate oxidase-peroxidase,GPO-PAP）法测定细胞中甘油三酯（triglyceride,TG）含量的变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术测定与脂质代谢相关基因的表达量。结果显示3?种TPs均能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化（P＜0.05）。添加100?μg/mL的TPs能使细胞分化率显著下降至（62.00±6.61）%（GTP）、（82.95±4.25）%（BTP）、（97.24±5.80）%（OTP）。另外,在细胞培养至第5天检测表明,这3 种TPs显著促进G0/G1期细胞数量的累积,细胞比例分别为（68.52±2.28）%（GTP）、（67.11±1.68）%（BTP）、（59.69±1.35）%（OTP）。RT-PCR分析结果显示TPs可以调控相关脂肪细胞因子的表达。在本研究中,在3T3-L1前脂肪细胞中GTP的减肥作用强于BTP和OTP。TPs的加入上调脂联素的表达从而激活腺苷酸活化蛋白激酶信号通路调控相关脂肪细胞因子的表达,并最终抑制TG的合成与3T3-L1前脂肪细胞的分化。     

3T3-L1前脂肪细胞在功能性成分评价中的应用

脂肪细胞的增殖与分化异常是导致人类肥胖、心血管疾病和Ⅱ型糖尿病等的发生的主要原因,而3T3-L1前脂肪细胞是国际上公认的研究脂肪代谢的细胞模型,因此脂肪细胞的增殖与分化已成为研究的热点。本文主要论述3T3-L1前脂肪细胞的体外培养、增殖与分化及调控及其在功能性成分的评价中的应用,以期为预防和治疗肥胖及糖尿病等并发症提供一定的理论参考。     

大孔吸附树脂分离纯化洋葱皮黄酮的研究

以黄酮含量为指标,比较6种大孔吸附树脂对洋葱皮黄酮的吸附和解吸效果。通过静态吸附与解吸实验,筛选出效果较好的X-5树脂进行动态实验研究。结果表明:X-5树脂纯化洋葱皮黄酮的工艺条件为吸附流速2mL/min、上样溶液pH5.0、上样液质量浓度0.5mg/mL、50mL 80%乙醇作为洗脱液,洗脱流速lmL/min。经X-5树脂纯化后,洋葱皮黄酮纯度从7.95%提高到80.78%。三次重结晶后其纯度可达94.5%。该方法简单可行,纯化效果好,适合于工业化生产。     

蕨菜提取物抗肥胖作用及其机制

研究蕨菜对3T3-L1前脂肪细胞分化和高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠肥胖的抑制作用,初步探讨其作用机制。培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导其分化,油红O染色比色分析蕨菜乙醇提取物(PAE)对其分化程度的影响,Western blot法检测其对脂肪细胞分化转录调控因子(PPARγ、CEBPα、SREBP-1c)与脂质合成相关基因(FAS、ACC)的表达水平。以高脂饮食6周建立C57BL/6J肥胖小鼠模型,将诱导成功的肥胖小鼠分为高脂对照组(HFD)、1%蕨菜乙醇提取物组(HFD+PAE),另设立正常饲料喂养的C57BL/6J小鼠为正常组(ND)。继续喂养8周后测定各组小鼠体质量,评价其脂代谢状况(甘油三酯、胆固醇)及糖代谢情况(血糖、葡萄糖耐量)。结果显示,PAE能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。PAE显著影响脂肪细胞分化过程中细胞分化转录调控因子PPARγ、CEBPα、SREBP-1c的蛋白表达(P0.05),同时降低脂质合成相关基因FAS、ACC的表达(P0.05)。经过高脂饮食诱导C57BL/6J肥胖小鼠体质量增加,体脂沉积显著,血糖、血脂水平明显高于ND组(P0.05)。PAE干预后,小鼠体质量、甘油三酯、血糖水平均较HFD明显降低(P0.05),葡萄糖耐量也得到显著改善(P0.05)。蕨菜乙醇提取物抑制了3T3-L1脂肪细胞分化,改善了肥胖小鼠体质量,消除了高血脂和高血糖异常,修复了葡萄糖耐量,这一作用可能与其调控脂肪细胞分化转录调控因子和脂质合成相关基因等密切相关。     

苦瓜提取物抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪沉积研究

研究表明苦瓜具有一定减肥效果,但其确切分子机理尚未阐明,因此本实验研究苦瓜正丁醇提取物抑制脂肪沉积活性及其作用机制。针对3T3-L1脂肪细胞,利用噻唑蓝法检测苦瓜正丁醇提取物对细胞活性影响;采用油红O染色检测苦瓜正丁醇提取物对细胞脂肪沉积的影响;利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测苦瓜提取物对脂肪沉积转录因子和脂肪酸代谢关键基因mRNA转录水平调控作用。结果表明：相对空白对照组,苦瓜提取物能明显减少3T3-L1细胞脂肪沉积,抑制转录因子C/EBPα、PPARγ和SREBP-1c的mRNA表达,对脂肪酸代谢基因GLUT4、ACC1、Fasn、AP2和LPL的mRNA表达抑制明显（P＜0.05）。总之,苦瓜正丁醇提取物对脂肪沉积具有一定抑制作用,可能通过下调脂肪沉积相关基因mRNA转录水平表达起作用。     

胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立

为建立胰岛素抵抗脂肪细胞模型,以3T3-L1前脂肪细胞为研究材料,通过3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、地塞米松和胰岛素联合诱导其分化为3T3-L1脂肪细胞,通过葡萄糖消耗实验研究胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的作用浓度和时间关系,发现10-7mmol/L胰岛素诱导处理48h是3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗的最适条件,该细胞模型的胰岛素抵抗状态可维持48h。通过高浓度胰岛素成功诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,具有建模周期短、重复性好、操作简便的优点,该细胞模型可以用于抗胰岛素抵抗天然产物的筛选研究。     

洋葱皮中黄酮化合物的超声提取与光谱分析

采用超声波法从洋葱皮中提取黄酮类化合物并探讨出最佳提取条件,建立了洋葱皮中黄酮化合物的光谱分析方法.实验结果表明:此光谱分析法的回收率为99.6%～102.1%,变异系数小于0.18%。     

笃斯越桔花青素提取物对3T3-L1前脂肪细胞生长抑制作用

目的：研究笃斯越橘花青素提取物对3T3-L1 前脂肪细胞生长抑制作用及其作用机理。方法：采用MTT法观察细胞生长抑制并确定半数抑制浓度(IC50),LDH(lactate dehydrogenase)法评价提取物引起的细胞膜损伤,流式细胞计法测定细胞周期,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学特征。结果：笃斯越橘花青素提取物能够有效地抑制3T3-L1 前脂肪细胞的生长且IC50 约为214μg/mL;LDH 实验表明细胞LDH 释放率在24、48、72h 分别为89.0%、85.2%、67.8%,72h 时相对24h 或48h 明显降低(P ＜ 0.05),提取物对3T3-L1 前脂肪细胞膜的通透性未见明显增加;笃斯越橘花青素提取物能够有效诱导细胞凋亡,同时在S 或G0/G1 期产生阻滞,但是对细胞的G2/M 期未见明显影响,荧光显微镜观察细胞出现典型凋亡特征。结论：笃斯越橘花青素提取物能有效抑制3T3-L1 前脂肪细胞生长的作用,具有开发为天然抗肥胖功能因子的潜在可能。     

芹菜素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化作用研究

目的：研究芹菜素(apigenin,AP)对3T3-L1 前脂肪细胞增殖及分化的影响。方法：采用3T3-L1 前脂肪细胞,利用MTT 比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞增殖的影响;采用传统的鸡尾酒诱导剂诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,利用油红O 染色检测,通过比色分析法检测不同质量浓度芹菜素对3T3-L1 前脂肪细胞分化的影响。结果：30、50μg/mL 芹菜素相对于空白组和阳性对照组能够显著抑制3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化,提示其可能具有预防肥胖的作用。     

比色法测定柑桔皮中总黄酮含量的研究

黄酮类化合物因具有多种生物活性而成为天然产物研究的热点。通过直接测定法、硝酸铝法、氯化铝法3种检测方法的比较,确定氯化铝法作为柑桔皮总黄酮的测定方法效果更好,其检测波长为275nm,以芦丁为标准品,在0．0077mg／mL-0．0385mg／mL范围内,其浓度与吸光度呈良好的线性关系,相关系数R^2=1,平均加样回收率为99．3％,RSD=1．84％（n=5）,稳定性、精密度和重现性均理想,经测定不脱脂超声处理过的柑桔皮中所得黄酮含量为3．09％。     

火龙果皮总黄酮提取与体外抗氧化作用研究

目的：为火龙果皮总黄酮（PPF）的开发利用提供理论依据。方法：采用乙醇为溶剂,通过单因素实验和正交实验建立火龙果皮总黄酮最佳提取工艺条件,从还原能力、对不同体系产生的活性氧自由基清除效果评价火龙果皮乙醇提取物的抗氧化活性。结果：火龙果皮中总黄酮提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度80%,料液比1∶30,温度80℃,时间0.5h。在最佳工艺提取条件下提取两次,火龙果皮总黄酮的提取率为10.9mg/g。体外抗氧化实验结果表明,火龙果皮总黄酮对超氧阴离子自由基和羟自由基具有较强的清除能力,对.OH〉O2-.,还原能力与VC相当,弱于BHT。结论：火龙果皮总黄酮具有较强的体外抗氧化活性,作为天然抗氧化剂具有一定的开发利用价值。     

多不饱和脂肪酸对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

本文利用MTS比色分析法、细胞形态学分析法及诱导分化法结合油红染色比色分析法研究了α-亚麻酸(alpha-linolenic acid,ALA)、亚油酸(linoleic acid,LA)对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响。MTS结果显示,在一定浓度范围内ALA、LA均能呈剂量依赖关系和时间依赖关系的抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,且ALA抑制增殖作用强于LA;细胞形态学分析结果显示,ALA、LA在高浓度时均显示出细胞毒性作用;倒置显微镜观察和油红染色检测结果显示,ALA、LA、ALA/LA混合脂肪酸(1:1,n/n)在12.5~200μmol/L浓度范围内均能浓度依赖式的抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,且ALA抑制分化作用强于LA,但当浓度100μmol/L时,ALA/LA混合脂肪酸(1:1,n/n)的抑制分化作用强于同浓度的ALA,当浓度为200μmol/L时,比较ALA/LA摩尔比为1:4、1:2、1:1的混合脂肪酸抑制分化效果发现,比值为1:1的略强但相互之间效果差异不明显。     

香蕉皮总黄酮对糖尿病及其并发症的影响

目的:研究香蕉皮总黄酮粗提物降血糖作用。方法:将实验大鼠分成正常对照组、模型对照组、药物组和低、中、高香蕉皮总黄酮剂量组,喂养4周。检测大鼠体质量、血糖、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的水平。结果:中、高剂量的香蕉皮总黄酮粗提物可显著降低四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠血糖、TC、TG和LDL-C含量（p<0.05）,升高大鼠体质量和HDL-C（p<0.05）。结论:一定剂量的香蕉皮总黄酮提取物具有降血糖作用,并且能改善由糖尿病引起脂代谢紊乱状况。      

陈皮总黄酮提取及抑菌活性初探

目的:确定陈皮总黄酮提取的最佳工艺条件,并初步测试其抑菌活性。方法:采用微波辅助乙醇法提取陈皮总黄酮,依据单因素实验建立BBD实验模型,用响应面优化提取工艺,并进行验证实验;黄酮提取液经HP-20型大孔树脂分离提纯后,采用滤纸片法测试其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果:经验证,陈皮总黄酮在乙醇体积浓度60%、微波功率619 W、微波时间3 min、提取温度62 ℃、料液比1:21 (g/mL)时的黄酮得率最高,为1.3468%±0.0142%,与预测值(1.3575%)的偏差仅为0.0107%,说明该模型方程与实际拟合良好。抑菌活性实验结果表明:陈皮黄酮对被测菌种均有一定的抑菌活性,其中对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果优于对照茶多酚。     

原料预处理对柠檬膳食纤维总黄酮的影响

以柠檬皮渣为原料,探讨不同原料预处理方法对柠檬膳食纤维总黄酮的影响,原料进行预处理后经冷冻干燥制备膳食纤维,然后进行总黄酮含量测定。实验测得经灭酶、漂洗、不灭酶不漂洗处理后柠檬皮渣中总黄酮保存率分别为：71.72%、83.79%、92.41%,从结果可知总黄酮不稳定,而温度是影响总黄酮稳定性的重要因素。