明日叶可培养内生真菌分离鉴定及功能性筛选

为揭示明日叶内生真菌的多样性及筛选可利用菌株,利用选择性平板分离培养技术,对明日叶茎、叶、花和果实器官中可培养内生真菌进行分离,结合ITS序列和系统发育树分析菌株多样性,并筛选产黄酮和抑菌功能菌株。明日叶中共分离出34株可培养内生真菌,可划分为1门、4纲、8目、10科、10属、22种,优势属为Cladosporium(32.4%)。以纲为类群单位,果实器官的5属8种12株系统发育可分为4个类群,茎的5属10种11株分为3个类群,叶的5属8种9株分为2个类群,花的1属2种2株分为1个类群。果实中的优势菌为Alternaria alternata,茎的为Cladosporium tenuissimum,叶的为Colletotrichum karsti,花的为Aspergillus sp.。对产黄酮和抑菌功能的筛选发现,9株产黄酮,15株对至少1种病原细菌有抑制效果,26株对至少1种真菌指示菌显示抑制作用,其中菌株MRY-1效能最佳,最优培养基条件为初始pH 7、时间7 d、温度26℃、转速120 r/min、装液量60 mL/150 mL。因此,明日叶不同器官中分离的内生真菌具有遗传多样性...     

小豆内生真菌的筛选鉴定及其产玉米赤霉烯酮的可能性探究

玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)是目前全球范围污染谷物最广泛的霉菌毒素之一,对人体和动物健康都会产生极大威胁,目前从市售小豆检测到ZEN。【目的】筛选暴露ZEN的小豆内生真菌,结合经典方法和分子生物学方法鉴定所筛选内生真菌,并探索菌株潜在的ZEN产生风险。【方法】以暴露ZEN的小豆为样本,将分离纯化后的内生真菌进行经典形态观察;同时扩增真菌核糖体保守序列ITS1、ITS4,镰刀菌特异基因序列FU1、FU2确定小豆中镰刀菌种属,同时通过ZEN玉米赤霉烯酮产毒控制基因pks13进行PCR扩增,分析菌株ZEN合成的潜在风险。【结果】鉴别出3株镰刀菌,其中2株初步鉴定为砖红镰刀菌(Fusarium lateritium)、1株为花腐镰刀菌(Fusarium napiforme),未检测出ZEN合成关键基因;1株玛利节菱孢霉(Arthrinium marii),分子检测具有产ZEN玉米赤霉烯酮毒素的可能性。将以上4株菌分别回接至ZEN的产毒培养基,LC-MS/MS法未检测出ZEN毒素。【结论】暴露ZEN的小豆具有内生镰刀菌,存在可能产ZEN的内生节菱孢霉;回接培养基未检测到ZEN,但不排除小豆产生ZEN的风险。     

薰衣草产酚酸内生真菌的分离及产物初步鉴定

利用人工种植的薰衣草及无锡本地采集的相同品种薰衣草,对其各组织内生真菌进行分离、纯化。分别分离得到18和23株内生真菌。对所筛选出的菌株进行固态发酵,并对其发酵培养产物进行提取。通过化学反应的方法从野外采集薰衣草内生真菌中筛选出一株产酚酸的菌株,并通过分子生物学方法对其进行初步鉴定,并对其固态发酵提取物进行初步研究。研究结果表明了薰衣草内生真菌的多样性,为通过微生物固态发酵产酚酸类物质提供理论和实验基础。     

GM稻米镰刀菌毒素安全性评估及内生真菌类群成因分析

本文旨在评估货架期转基因 (Genetically Modified,GM) 稻米镰刀菌毒素含量的安全性和内生真菌类群的多样性变异特征,探究内生镰刀菌产毒的可能成因。收集转基因水稻株系及各自的对照亲本品种,利用ELISA法检测稻米及其内生镰刀菌株毒素含量;采用ITS高通量测序技术检测稻米内生真菌群落。结果：(1) 4个稻米样本中均检出了低剂量镰刀菌毒素,其中ZEN、DON和T-2三种毒素的含量在0.4 μg/kg~25.8 μg/kg之间,且GM稻米与亲本间均无显著差异（P>0.05）;仅在GM稻米样本FT16中检出了含量为10.0 μg/kg的FB1。(2) 16株内生镰刀菌株均能产生ZEN,其中9株还能合成T-2毒素。(3) 4个稻米样本共检出9个内生真菌门和68个真菌属,其中优势真菌均为子囊菌门,镰刀菌属(Fusarium) 和弯孢菌属(Curvularia)。两个GM稻米样本内生真菌α多样性指数均与其亲本无显著差异（P>0.05）。GM稻米属水平的内生真菌标志物种均比其相应亲本显著减少。结论：货架期内的稻米样本检出的镰刀菌毒素含量远低于国家标准,不构成食品安全风险。GM稻米内生真菌类群多样性指数与其亲本实质等同,标志菌属变异处于安全范围内。低剂量镰刀毒素普遍存在和内生镰刀真菌产毒风险值得警惕。     

产纤维素酶荷叶内生真菌的筛选与鉴定

利用次氯酸钠和乙醇消毒法对荷叶内生真菌进行分离。采用羧甲基纤维素钠培养基筛选产纤维素酶的菌株。结果得到2株产纤维素酶的荷叶内生真菌,分别命名为HY3和HY4。菌株HY3和HY4的内切葡聚糖酶酶活力分别为44.46 U/m L和28.23 U/m L、外切葡聚糖酶酶活力分别为5.80 U/m L和7.82 U/m L、滤纸酶活力分别为12.04 U/m L和13.52 U/m L。依据菌落形态和ITS序列分析鉴定HY3为Rhodosporidiobolus sp.,HY4为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。     

一株丹参种子内生真菌ZJZD-3的分离鉴定及其生物活性

目的:从丹参种子中分离纯化内生菌,筛选具有抑菌、抗氧化、抗凝血活性的菌株进行分子鉴定。方法:采用平板分离法从丹参种子中分离内生菌;采用平板对峙法和滤纸片法筛选具有抑菌效果的内生菌,采用DPPH法测定内生菌抗氧化活性,兔耳缘静脉取血测定内生菌抗凝血活性。结果:从白花丹参种子中分离出11株内生真菌和2株内生细菌,从紫花丹参种子中分离出9株内生真菌和9株内生细菌。其中,一株内生真菌ZJZD-3发酵液对丹参病原菌4和6均有抑制作用,抑制率分别为70.1%和59.6%;内生真菌ZJZD-3具有很好的抗氧化能力,其0.5 mg/mL乙醇粗提液对DPPH清除率为91.44%;内生真菌ZJZD-3对于内源性、外源性凝血途径都具有一定的延长作用,并且内源性凝血途径最为明显,对家兔凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活性部分凝血酶时间(APTT)的延长率分别为48.48%、12.38%和34.44%。该菌株经鉴定为篮状菌属(Talaromyces sp.)。结论:内生真菌ZJZD-3具有很好的抗丹参病原菌、抗氧化和抗凝血能力,为丹参药效成分的工业化开发以及丹参的绿色规模化栽培提供新的途径和方法。     

两面针、川芎、生首乌内生真菌的分离纯化及抑菌性研究

<正>采用组织块法从两面针(Zanthorμlum nitidum(Roxb.)DC)、川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)生首乌(Fallopia multiflora)组织中分别分离得到7、11、6株内生真菌,以大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎球菌(Diplococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、地衣杆菌为供试菌种,对所有两面针、川芎生首乌内生真菌进行抑菌性试验,结果显示,两面针3株内生真菌至少对1株测试病原菌有抑制作用,2株内生     

丹参内生真菌产生淀粉酶菌株的筛选鉴定及酶学性质分析

目的:从丹参内生真菌中筛选耐热性强的酸性生淀粉酶菌株,并对其酶学性质进行初步研究。方法:以50株丹参内生真菌作为筛选对象,通过淀粉固体培养基初筛、液体发酵复筛,筛选产生淀粉酶活力较高的菌株;通过形态学观察和ITS序列分析对产酶菌株进行鉴定。结果:从50株丹参内生真菌中,筛选出5株产生淀粉酶活力较高的菌株,其中菌株ZDH2-2-1-1为产淀粉酶活性最强的菌株,酶活力达到117.63 U/m L,经鉴定为互隔链格孢(Alternaria alternata)。该淀粉酶最适p H为4.0,最适反应温度为55℃,具有较好的热稳定性和p H稳定性,对生淀粉具有广谱的降解能力。通过薄层层析发现,ZDH2-2-1-1所产淀粉酶的酶解产物为葡萄糖。结论:丹参内生真菌能产生高活性的耐热性酸性生淀粉酶,在生淀粉深加工中具有极大的开发潜力。     

不同种植地糙米萌芽过程中可培养内生真菌菌群的变化研究

糙米萌芽处理可能导致内生真菌菌群变化甚至产毒真菌的增加,从而影响发芽糙米的食用安全。研究萌芽过程中糙米内生真菌菌群的变化对保障其食用安全具有重要意义。以海南省和浙江省富阳市两地种植收获的粳稻品种日本晴种子为材料,脱壳种子即糙米经表面消毒后采用组织培养法分离内生真菌,结合形态学和分子生物学方法对菌株进行分类鉴定,比较分析了不同种植地原糙米的内生真菌菌群差异及萌芽过程中不同处理方式对糙米内生真菌的群落结构的影响。结果表明：本试验从海南省和浙江省富阳市两地的糙米萌芽过程中共获得63株内生真菌,经ITS序列鉴定后归为3个纲,6个目,7个科,20个属,其中镰刀菌属(Fusarium)为两地共有的优势菌属,链格孢属(Alternaria)为海南组特有优势菌株,Dendryphiella和附球菌属(Epicoccum)为富阳组特有的优势菌株。浙江省富阳市收获的糙米内生真菌的多样性和丰度均比海南省收获的糙米样品高。浙江省富阳市糙米经浸泡、萌发、干燥后,内生真菌的多样性较原糙米降低,但总分离率增加,尤其是固有优势菌属Fusarium的分离率比原糙米组分别增加10.75%、14.00%、16.33%;消毒...     

金莲花内生真菌的分离与初步鉴定

从内蒙古采集新鲜的金莲花植株,在确定了该植株内生菌分离的最佳表面消毒方法后,对其根部、茎部和叶部的内生真菌进行分离。通过分析菌落表面形态,从中分离得到6株内生真菌,其中叶中4株,茎中1株,根中1株,并用乳酸酚棉兰液染色镜检观察,经形态学鉴定均为子囊菌亚门(Ascomycotina),青霉属(Pinicielium)。     

罗汉果内生真菌的分离及其发酵产物的抗氧化活性研究

为探究罗汉果内生真菌发酵产物的化学成分及其抗氧化活性,从罗汉果内生真菌中筛选8株菌株的代谢产物进行化学成分试验,用DPPH·清除法和·OH清除法测定发酵产物的体外抗氧化活性。结果表明,8株罗汉果内生真菌发酵产物通过化学成分定性试验,推测可能含有蛋白质、多糖、有机酸、黄酮和醌类等物质。在供试液质量浓度为1 mg/mL时,其中菌株F5发酵液对DPPH·的清除率大小顺序为乙酸乙酯萃取相（96.83%）＞VC（95.77%）＞氯仿相（95.24%）;菌株F5发酵液对·OH的清除率大小顺序为VC（99.36%）＞原液（73.56%）＞水相（61.98%）,表明罗汉果内生真菌发酵产物具有较强的抗氧化作用,并且抗氧化的成分极性较大。     

转化白藜芦醇苷虎杖内生真菌的分离和鉴定

为提高虎杖中白藜芦醇得率,采用虎杖内生真菌直接发酵虎杖转化白藜芦醇苷为白藜芦醇,通过从虎杖根、茎中初筛得到6株内生真菌,复筛以虎杖煮提液为底物发酵,采用高效液相色谱法定量检测发酵液中白藜芦醇苷和白藜芦醇含量。结果表明：6株内生真菌均具有转化白藜芦醇苷为白藜芦醇能力,其中分离于茎内的J1转化率最高为25.6%。J1经形态学观察及ITS-5.8S rDNA序列分析,鉴定为草酸青霉Penicillium oxalicum,Genbank登录号为HQ732137。     

苍耳内生真菌的分离鉴定及抗菌活性研究

从植物苍耳中分离内生真菌,选出8株进行抑菌活性测定,有6株对番茄早疫病菌抑制率大于50%。菌株SC008对5种植物病原菌的抑制率均大于50%。对内生真菌SC008进行形态学观察及ITS序列鉴定,初步判定菌株SC008归属于黑孢霉属(Nigrospora Zim.)。碳氮源实验表明,SC008在以乳糖和蔗糖为碳源及以酵母提取物和牛肉膏为氮源的培养基上生长良好。     

虎杖内生菌转化虎杖苷和转化产物抗氧化活性研究

研究虎杖内生真菌对虎杖苷转化及转化产物抗氧化活性。采用薄层层析法筛选转化虎杖苷的内生真菌;通过形态学特征和ITS-5.8S r DNA基因序列分析对内生真菌进行鉴定;利用大孔吸附树脂、制备薄层色谱和高效液相色谱分离纯化生物转化产物;以VC、BHT、虎杖苷及5种虎杖苷衍生物为对照,对转化产物清除DPPH·自由基和OH·自由基的生物活性进行比较研究。经筛选发现其中l株内生真菌J3能转化虎杖苷形成转化产物。内生真菌J3 ITS-5.8S r DNA序列全长573bp,Gen Bank登录号KM 434883,确定为烟曲霉Aspergillus fumigatus。转化产物A-2在体外具有清除DPPH·自由基和OH·自由基的能力,且清除OH·自由基的能力高于底物虎杖苷,A-1在体外无清除DPPH·自由基和OH·自由基的能力。虎杖内生真菌Aspergillus fumigatus能对虎杖苷进行生物转化,形成具抗氧化活性的物质。     

女贞内生真菌清除自由基活性成分的分离纯化

采用组织块分离法对女贞的内生真菌进行分离,对分离到的菌株进行清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DPPH）自由基活性研究,并对活性较强菌株代谢产物中的清除自由基成分进行分离纯化。从女贞的叶片、茎、根、枝条等组织共分离出101 株内生真菌,研究发现NZ-18菌株清除自由基活性最强,并采用液相色谱法对NZ-18发酵液中清除自由基活性成分进行制备。分离到一种活性较强的化合物1,经高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）法和薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）法纯度验证,发现该化合物为纯品化合物经活性验证发现化合物1在样品质量浓度为0.5 mg/mL时对0.2 mg/mL的DPPH自由基清除率为94.88%。结果表明,女贞内生真菌中存在大量的清除自由基活性菌株。     

The Potency of Endophytic Fungal Isolates Collected from Local Aromatic Rice as Indole Acetic Acid (IAA) Producer

Endophytic fungi are fungi that live in plant tissues without causing disease symptoms and abnormalities in plants. This study aims to obtain endophytic fungal isolates from local aromatic rice and screening of their ability to produce the IAA hormone as a plant growth promoter. Totally 16 endophytic fungal isolates were isolated from aromatic rice tissue of Pulu Mandoti. Ten isolates obtained from stem, three isolates from the root and three isolates from leaf tissue. The ability of endophytic fungal isolates in producing hormones IAA varied from 0.635 to 2.651 mgl^-1. Similarly, the ability to dissolve phosphate also varied from 0.005 – 3.719 mgl^-1, and there is only 1 isolates that caused abnormal growth in rice seedlings.     

海鞘中产油脂共附生真菌的筛选及脂肪酸组成成分分析

从20株海鞘共附生真菌中筛选产油脂菌。采用苏丹混合溶液染色法初筛,摇瓶复筛,酸热法提取油脂油脂,气相色谱-质谱联用法（GC-MS）测定其脂肪酸组成,形态学观察结合分子生物学鉴定产油脂真菌。结果表明：经初筛和复筛得到3株油脂含量均达20.00%以上的菌株,分别为菌株P2-18、P1-17和P2-4,脂肪酸组成分析不饱和脂肪酸分别占其脂肪酸组成的93.90%、55.80%和65.00%。其中γ-C18:3(γ)亚麻酸、C16:1棕榈一稀酸和C18:1油酸含量最多。P2-4含23.2%的γ-C18:3(γ)亚麻酸,约占其不饱和脂肪酸的24.50%。3株真菌经形态学鉴定,结合分子生物学ITS区序列鉴定,菌株P2-4为桔青霉（Penicillium citrinum）,P1-17为青霉属（Penicillium sp. 12 BRO-2013）,P2-18为土曲霉（Aspergillus terreus）。因此,该海鞘共附生真菌具备开发微生物功能性油脂的潜力,具有良好的开发应用前景,值得进一步研究。     

野生牛肝菌内生真菌分离鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从黄皮疣柄牛肝菌、小美牛肝菌、双色牛肝菌的子实体中,分离纯化获得4株内生真菌,经菌落、菌丝、孢子形态学观察及rDNA ITS分子生物学鉴定,结果显示:菌株LCTG-12为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)、LCCK-6为克鲁伊假丝酵母(Candida kruisii)、BSHC-18为黄瘤孢菌(Hypomyces chrysospermus)、BBFO-10为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。对4株内生真菌生物学特性进行研究,其中盖姆斯木霉菌丝生长速度较快,在CPDA培养基上,25 ℃培养5 d菌丝长满平板;液态培养时,该菌株在25 ℃、摇床转速160 r/min、pH5.5、8 d,可获得菌丝干基生物量4.13 g/L。平板对峙实验结果:盖姆斯木霉LCTG-12对黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10菌丝生长均有拮抗作用,并且,黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10两者之间也具有拮抗作用,表明牛肝菌内生真菌中盖姆斯木霉对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防腐提供优良的菌株。