免疫亲和柱净化-HPLC柱后光化学衍生荧光法测定花生饮料中的黄曲霉毒素B_1

建立了免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定花生饮料中黄曲霉毒素B1含量的方法。试样经乙腈-水溶液(体积比80∶20)提取,免疫亲和柱富集和净化后,采用Thermo Syncronis C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(体积比55∶45)为流动相,等度洗脱,荧光检测器检测(Ex:360nm,Em:440nm)。结果表明:黄曲霉毒素B1检出限为7.54×10~(-3)μg/kg;标准曲线的线性范围为0.1～20.0ng/mL(r=0.9999);3个不同水平的加标平均回收率为96.88%～98.82%,RSD值为0.85%～1.07%。10批试样中黄曲霉毒素B_1测定值为0～2.09μg/kg,均无过量残留。该方法具有操作简便、灵敏度高、重现性佳等特点,适用于花生饮料中黄曲霉毒素B_1的检测。     

免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法测定食用油中黄曲霉毒素B_1

样品经甲醇–水(7∶3,V/V)提取,提取液经过滤、稀释、免疫亲和柱净化,通过高效液相色谱柱后衍生法测定黄曲霉毒素B_1的含量。实验结果表明,黄曲霉毒素B_1在0.5~15.0 ng/m L范围内线性关系良好,相关系数为0.999。同一份样品加标后经三个不同品牌的免疫亲和柱纯化后,测定结果存在一定差异。不同样品中黄曲霉毒素B_1加标回收率在87.2%~95.8%之间,相对标准偏差(n=6)在2.12%~6.51%之间。     

免疫亲和柱净化-UPLC-MS/MS测定鱼虾肉中的3 种氨基糖苷类抗生素

将庆大霉素（gentamicin,GEN）、卡那霉素（kanamycin,KAN）和安普霉素（apramycin,APR）的抗体同时偶联到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上,制备成复合型免疫亲和柱（immunoaffinity column,IAC）。建立鱼虾肉中3 种氨基糖苷类抗生素的免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱分析方法。采用BEH Amide（100?mm×2.1?mm,1.7?μm）色谱柱分离,以0.05%甲酸溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,电喷雾正离子多反应模式监测。结果表明,所制备的IAC对GEN、KAN和APR的柱容量分别为1?127、1?368、925?ng/mL,洗脱液选用0.1%甲酸-甲醇溶液。GEN的线性范围为80.0～500?μg/L,KAN和APR的线性范围为20～500?μg/L,相关系数均大于0.995。鱼虾肉基质中3?种物质的平均回收率为71.7%～96.8%,相对标准偏差为4.2%～10.9%（n=6）,检出限和定量限分别为10～40?μg/kg和20～80?μg/kg。为水产品中氨基糖苷类药物残留监控提供一种有效的技术手段。     

LC/MS法测定粮油食品中黄曲霉毒素B_1

研究了液湘色谱-离子阱质谱技术检测粮油食品中AFB1。样品用80%甲醇溶液提取,经自制的净化柱,以甲醇-水为流动相,在C18柱上对样品中的黄曲霉毒素B1进行分离,采用质谱正离子模式对AFB1进行检测。方法的线性范围为0.139~1.39μg/L,线性相关系数为0.9998;S/N=3时,检出限为0.510μg/kg。试验证明,该方法具有操作方便、快速、结果准确、检测限低等特点。     

QuEChERS萃取-UPLC-MS/MS测定花生酱中黄曲霉毒素B1方法的研究

建立了QuEChERS萃取-UPLC-MS/MS测定花生酱中黄曲霉毒素B1的快速检测方法。样品首先经过1%甲酸-乙腈溶液提取,提取液采用QuEChERS净化试剂(250mg MgSO4+100mg HC-C18+50mg PSA)净化后上机,UPLC-MS/MS正离子源多反应模式检测,外标法定量。黄曲霉毒素B1在1.0~5.0ng/mL范围内呈良好线性关系,相关系数(R^2)>0.999,4个水平的添加目标分析物黄曲霉毒素B1的回收率在81.7%~93.5%范围内,相对标准偏差(RSD)为2.4%~5.6%,检出限为0.03μg/kg;该试验方法具有简单、高效、经济、准确、回收率高、精密度好的优点,适用于花生酱样品中黄曲霉毒素B1的快速检测。     

QuEChERS净化-UPLC-MS/MS测定小油坊土榨花生油中黄曲霉毒素B1方法的研究

建立了QuEChERs净化UPLC-MS/MS测定小油坊土榨花生油中黄曲霉毒素B_1实验室分析方法。样品经过1%甲酸酸化的乙腈溶液提取后,采用QuEChERs净化(300 mg MgSO_4+100 mg HC-C_(18)+50 mg PSA+0 mg多壁碳纳米管),UPLC-MS/MS多反应监测正离子模式测定,外标法定量。黄曲霉毒素B_1在2.88～23.04 ng/ml内呈线性关系,相关系数大于0.99,低、中、高三个浓度加标回收率在90.8%～92.5%,相对标准偏差(RSD)为2.5%～4.9%,方法检出限0.03μg/kg。该方法具有简单、快速、灵敏、准确、精密度好、回收高、检出限低等特点,适用于土榨花生油等复杂基质、高风险样品中黄曲霉毒素B_1项目的日常检测。     

免疫亲和柱-液相色谱法快速测定面粉中黄曲霉毒素B_1的条件优化

建立了免疫亲和柱-液相色谱法快速测定面粉中黄曲霉毒素B_1的方法。样品经甲醇-水(80:20,v/v)提取,经过滤、沉淀(乙酸锌和亚铁氰化钾),通过免疫亲和柱净化,三氟乙酸和正己烷为衍生剂进行衍生,采用C_(18)柱为分离柱,乙腈:水(50:50,v/v)为流动相进行高效液相色谱分离分析。实验结果表明,黄曲霉毒素B_1线性范围(1~10)ng/m L,R2=0.9991,RSD=3.4%,检出限为0.1μg/kg,实际样品的黄曲霉毒素B_1回收率为81%~95%。该方法具有灵敏度高、回收率高、重现性好等优点,可用于面粉中黄曲霉毒素B_1的快速测定。     

生物传感器法测定花生中黄曲霉毒素B_1

建立了生物传感器法测定花生中黄曲霉毒素B1含量的方法。黄曲霉毒素氧化酶经固定化后与过氧化氢电极构成电流型酶电极。花生经粉碎、过筛、提取、超声波萃取后利用电流型酶电极构成的生物传感器对黄曲霉毒素B1进行测定,与薄层色谱法、酶联免疫吸附法(ELISA法)有较好的一致性。黄曲霉毒素生物传感器测定时间为20 s,相对偏差2%,标样线性良好;进行加标回收试验,回收率为98%~106%。结果表明,该方法具有较高的灵敏度,操作简便,可用于花生中黄曲霉毒素的测定。     

免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法快速检测玉米粉中黄曲霉毒素B_1

本文建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱荧光法-陕速检测玉米粉中黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB1)的方法。样品经甲醇/水(4∶1.v/v)浸提,免疫亲和柱净化,高效液相色谱分离,光化学柱后衍生,荧光检测器测定。结果表明:AFB_1在2.5~150μg/L具有良好的线性关系,相关系数为R~2=0.9998,检测限为1.0μg/kg,平均回收率为84.0%~96.3%,RSD范围为0.7%~2.5%。该方法具有快速、准确和重复性好的优点,适用于大批次玉米及玉米粉制品中AFB1的检测。     

量子点标记荧光免疫法检测花生中黄曲霉毒素B_1

建立了基于量子点标记二抗的间接竞争荧光免疫吸附测定方法（indirect competitive fluorescence-linked immunosorbent assay,cFLISA）,并研究检测花生中黄曲霉毒素B1的可行性。采用谷胱甘肽为稳定剂,在水相中直接合成碲化镉（CdTe）量子点,并利用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）与兔抗鼠二抗进行共价偶联,以黄曲霉毒素B1的单克隆抗体建立cFLISA方法。结果表明,该方法的灵敏度和最低检测限值分别为0.023ng/mL和0.001ng/mL,与传统的有机染料FITC-二抗法比较,灵敏度提高了30倍,花生样品加标0.1、0.05和0.025ng/g,回收率范围在88%～116%之间,变异系数均小于10%。建立的cFLISA方法可以较好的检测花生中黄曲霉毒素B1,并为其它真菌毒素的检测提供参考。     

免疫亲和柱-液相色谱法测定麦麸中黄曲霉毒素含量

为测定麦麸中黄曲霉毒素含量,试验建立了免疫亲和柱-高效液相色谱法。通过对10批样品检测结果的分析,初步考察了麦麸在黄曲霉毒素污染方面的安全性问题。样品经提取后,用免疫亲和柱净化,采用Syncronis C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-水(体积比30︰13︰57)为流动相,采用柱后碘衍生化法,用荧光检测器检测,激发波长为360 nm,发射波长为450 nm。黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1分别在0.004～0.019μg·kg~(-1)(r=0.999 9),0.011～0.053μg·kg~(-1)(r=0.999 9),0.004～0.022μg·kg~(-1)(r=0.999 9)和0.010～0.051μg·kg~(-1)(r=0.999 9)范围内线性关系良好,AFB~4_1、AFB_2、AFG_1、AFG_2最低检出限分别为5.6×10~-,2.3×10~(-4),1.08×10~(-3)和4.3×10~(-4)μg·kg~(-1)。高中低不同浓度的黄曲霉毒素的加样回收率平均值分别为95.23,94.24和93.23μg·kg~(-1)。RSD(n=6)在0.54%～1.41%之间。10批样品中均检出黄曲霉毒素G_2,含量低于0.1μg·kg~(-1),有2批样品检出黄曲霉毒素G_2、B_2、B_1,黄曲霉毒素总量低于0.16μg·kg~(-1)。该方法经方法学验证,可用于麦麸中黄曲霉毒素检测。     

花生中黄曲霉毒素B_1提取方法的优化

主要研究了酶联免疫法检测花生中黄曲霉毒素B_1的提取条件,通过单因素试验分别研究料液比、甲醇体积分数、提取时间和超声波功率对黄曲霉毒素B_1提取效果的影响,通过正交试验法确定花生中黄曲霉毒素B_1的最佳提取条件。结果表明,各因素影响花生中提取黄曲霉毒素B_1含量的大小为:超声波功率甲醇体积分数提取的时间物料比。最佳提取条件为:料液比为1︰5 g/m L,甲醇体积分数60%,提取时间为11 min,超声波功率70 W。试验以为花生中黄曲霉毒素B1的检测提供简便、可靠、准确的分析方法。     

抗黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备

制备黄曲霉毒素M1污染样品的净化前处理免疫亲和柱.利用无血清培养基制备的高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、装柱后通过IC-ELSIA对免疫亲和柱的性能评价确立了最佳反应条件.免疫亲和柱的有效柱容量为500ng,经添加回收试验测定的平均回收率为92.46%0,变异系数2.3%...     

单克隆免疫亲和柱-高效液相色谱法测定牛乳中黄曲霉毒素M1

研究了单克隆免疫亲和柱－高效液相色谱法测定牛乳中黄曲霉毒素M1的方法。样品通过离心脱脂,脱脂乳用免疫亲和柱净化,SpherisorM C18色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。对添加不同含量水平的黄曲霉毒素M1 5次重复实验的平均回收率为80．4％－88．7％。变异系数（CV）为7．7％－8．9％。检测低限为0．05μg/kg。     

免疫亲和柱结合液相色谱串联质谱法测定蜂花粉中黄曲霉毒素

建立了一种测定蜂花粉中黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2)的液相色谱串联质谱方法。样品经V(乙腈)∶V(水)=60∶40提取,通过低温脂肪沉淀,免疫亲和柱净化,之后用甲醇洗脱4种毒素,氮吹后复溶,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定量分析。方法在3个浓度添加水平的回收率为74.3%⁹6.5%,精密度低于10.0%。相关系数(r2)均大于0.997。B1、B2、G1、G2的定量限分别为0.05,0.1,0.013,0.025μg/kg。测定30个实际样品,未检出4种毒素。     

花生酱中黄曲霉毒素B_1的免疫传感分析方法

建立一种新的测定花生酱中黄曲霉毒素B1含量的方法——免疫传感器分析法。基于间接竞争一步ELISA法,通过触摸免疫传感器彩色显示屏控制仪器完成空白实验、样品测定、结果分析操作,实现黄曲霉毒素B1的定量测定。该方法中免疫传感器不仅可对整个测定过程提供操作提示,而且还具有计时和自动分析计算功能,减少了人为误差,提高了测定的准确率。免疫传感分析法在1.0~100μg/L(R2=0.9997)范围内的线性良好,精确度为1.0%,样品加标回收率为93%~104%,其测定结果与高效液相色谱法测定结果具有很好的一致性。因此,该研究建立的免疫传感分析法可用于花生酱中黄曲霉毒素B1的检测。     

SPE-HPLC/FLD测定高粱中黄曲霉毒素B_1方法研究

研究利用新型的改性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱(Bond Elut Plexa)净化浓缩高粱中的黄曲霉毒素B1,可去除基质中大部分脂类、蛋白质和全部的高粱红色素。经高效液相色谱分析,此方法在5~100μg/L范围内具有良好的线性(R2=0.9996),较高的准确性(平均回收率为93.7%),较强的重复性(RSD%=4.96%),较低的检出限(0.57μg/L)和定量限(1.90μg/L)。该方法有效地降低了检测成本,简化了操作程序,为企业建立原料质量安全体系和真菌毒素检测方法提供了技术支撑。     

薄层色谱法测定黄曲霉毒素B_1探讨

<正> 在霉变粮油食品中,黄曲霉毒素污染较为普遍,尤其以黄曲霉毒素B_1(简写AFTB_1)污染最为广泛,毒性大、危害较深,所以我国已将AFTB_1列为粮油食品检验的常规项目,但由于AFTB_1标准液浓度高、操作危险,再加上目前国家标准检验方法——薄层色谱法干扰多、操作繁、实验费时、测定效果不佳,给粮油食品中AFTB_1的检验工作带来很大困难。近年来,多有用微柱色谱进行分析,该法虽快速和较安全,但定量比较时不如薄层色谱容易判断。我们参考有关资料,对目前薄层色谱标准方法进行了改进初探,并取得了初步的效果,现将改进试验情况报告如下: 1.材料与方法 1.1 试剂与仪器: 标准使用液:取浓度为1μg/ml的AFTB_1标准溶液1.0ml于5ml容量瓶中,加三氟醋酸1滴于容量瓶中的标准溶液处,     

抑制型表面等离子体共振免疫传感器再生循环检测花生中黄曲霉毒素B_1

针对花生中高毒污染物黄曲霉毒素B_1(AFB_1),开发一种可再生循环使用的抑制型表面等离子体共振(SPR)免疫传感器。方法 :用活化酯偶联制备AFB_1包被抗原(AFB_1-OVA),并通过EDC/NHS将其预先包被到表面等离子体共振芯片表面。依据免疫抑制原理,即目标物(AFB_1)与AFB_1-OVA共同竞争固定浓度的特异性抗体,以及不同浓度AFB_1所得到的SPR响应,计算抑制率并绘制曲线,可实现对食品中AFB_1的准确、灵敏分析。结果:检测过程抗体浓度为80 nmol/L;该抑制型SPR免疫传感器的检出限(IC15)为0.0049μg/L,灵敏度(IC50)达到0.025μg/L;对花生样品中AFB_1的检出限(IC15)和灵敏度(IC50)分别达到0.13μg/kg和0.74μg/kg。整个检测过程不超过5 min,同一芯片可重复使用60次以上。结论:所构建的SPR传感器操作简便,灵敏度高,检测耗时短,成本低,可以满足食品样品中高毒性AFB_1的快速、准确、低成本的分析要求。     

免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B1的含量

建立了免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B1含量的方法,并对样品的测定条件进行了优化。结果表明:植物油的称样量缩减为5.00 g,黄曲霉毒素B1测定结果与GB/T 18979—2003测定结果基本吻合;工作曲线在1~40 ng/mL质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999 9,方法检出限为0.3μg/kg;在空白样品中添加低、中、高3个不同添加量水平的黄曲霉毒素B1标准品,其回收率在90.5%~99.8%之间,相对标准偏差在6.3%~9.8%之间。采用光化学衍生,操作简单,无需衍生剂,避免了柱前衍生和柱后衍生受衍生剂浓度、温度、反应时间的影响,所建立的方法适用于植物油中黄曲霉毒素B1含量的测定。