基于柱前衍生化反相色谱分析的枸杞多糖产品的掺杂检测

为建立枸杞多糖产品的掺杂检测方法,采用多糖完全水解结合柱前PMP衍生化反相色谱分析的方法,研究发现正常枸杞多糖提取物与其掺杂样品中的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和氨基葡萄糖这4个标志性单糖组分的相对百分比具有显著性差异,据此特征可进行枸杞多糖产品的掺杂鉴别;应用酶解和醇沉的方法去除糊精或可溶性淀粉的干扰,再将枸杞多糖完全水解,并进行柱前PMP衍生化反相色谱分析,即可实现掺杂枸杞多糖提取物产品的确证检测及其枸杞多糖实际含量的准确测定。其测定方法加标平均回收率为89.8%,相对标准偏差为2.48%(n=5)。该测定方法比起现有的苯酚流酸法,不仅在样品前处理方法上可以完全排除糊精或可溶性淀粉的干扰,且消除了用葡萄糖作标品测定杂多糖含量的苯酚硫酸法固有的较大误差,因此本方法更为科学合理、准确可信。     

葛根提取物中麦芽糊精的中红外快速定量分析

中药提取物因生产工艺、储存条件的要求,需在生产过程中添加一定量的麦芽糊精。目前国内外还没有标准方法测定中药提取物中麦芽糊精的含量。本研究旨在建立一种快速检测葛根提取物混合粉末中辅料麦芽糊精含量的中红外快速测定方法,为企业有效把握提取物质量提供技术支持。以不同麦芽糊精含量的葛根提取物混合粉末样品88份为实验材料,采集已知麦芽糊精含量样品的中红外光谱,对谱图进行基线校正和归一化预处理,通过偏最小二乘回归方法建立定量模型。结果表明:所建定量模型预测效果良好,预测模型稳定性强、预测精度高,预测模型的决定系数R2为0.9819,预测标准差为3.205。采用中红外光谱检测技术可以快速定量葛根提取物中麦芽糊精的含量,有效地监督提取物市场以次充好的混乱现象,为市场监督部门提供技术支持。     

含淀粉/糊精的香菇制品中粗多糖含量测定

研究含淀粉/糊精的香菇制品中粗多糖含量测定方法。样品经乙醇沉淀→溶解沉淀物→α-淀粉酶水解→淀粉葡萄糖苷酶处理→乙醇沉淀,得到的粗多糖,加入苯酚、硫酸,在490 nm波长处用分光光度计测定粗多糖含量。含淀粉/糊精的香菇制品中粗多糖提取的最优工艺条件:α-淀粉酶酶解温度50℃、酶量2.0%(0.16 U/mL)、酶解时间30 min;淀粉葡萄糖苷酶酶解温度60℃、酶量40 U/mL、酶解时间30 min。在0～102.38μg/mL范围内,葡萄糖浓度与吸光度呈良好的线性关系,线性回归方程:y=0.011 5x+0.003 2, R²=0.999。精密度试验[6次平行测定吸光度,S_RSD=1.2%(<3%)]表明:检测方法精密度好。研究建立了含淀粉/糊精的香菇制品中粗多糖含量测定方法,可满足产品中含淀粉/糊精组分的香菇制品中粗多糖含量检测的需求。     

枸杞提取物中糖的组成分析

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-2-pyrazolin-5-one,PMP)衍生,通过高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对枸杞提取物样本中单糖组成进行分析,为枸杞提取物的质量分析提供依据。自制7份枸杞多糖提取物均含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、鼠李糖及半乳糖醛酸;2份市售枸杞提取物几乎只有葡萄糖,和糊精的分析结果基本一致。自制枸杞多糖的总糖含量在32.09%～43.72%之间,酸性糖含量在47.31%～57.38%之间;2份市售枸杞提取物多糖含量均大于90%,而酸性糖含量显著低于自制枸杞多糖。通过分析单糖组成、酸性糖含量能为市售枸杞提取物及相关食品和功能食品的质量控制提供依据。     

酶法测定黄芪含片中黄芪多糖的研究

建立排除黄芪片剂中辅料干扰多糖含量测定的方法。采用苯酚-硫酸比色法测定黄芪多糖含量,糖化酶水解麦芽糊精,80%乙醇溶液进行醇沉分离,考察反应温度、p H、酶与底物比例及反应时间对酶解反应的影响,验证糖化酶能否水解黄芪多糖。反应温度58℃、p H4.5、酶与底物比例1∶5、反应时间28 min时麦芽糊精完全水解,80%醇沉后在490 nm处测定无明显吸收。采用酶解法可以准确测定黄芪片剂中多糖的含量,测定结果与加入量无差异(P0.05)。糖化酶水解麦芽糊精,不水解黄芪多糖,对黄芪多糖含量的测定不存在干扰,可用于片剂中多糖含量测定。     

酶解法检测灵芝咖啡中粗多糖含量的研究

建立灵芝咖啡中粗多糖含量检测方法并对其工艺参数进行优化。通过对常规水提醇沉法、AOAC Roberts铜法及酶解法几种方法进行比较,确定酶解法适合灵芝咖啡中粗多糖含量的检测。以灵芝咖啡中粗多糖含量为指标,通过正交试验设计考察酶解时间、加酶量、酶解温度等试验因素对检测结果的影响。采用该法进行检测的最佳条件为:酶解时间为60 min,加酶量为1 m L,酶解温度为75℃。方法的精密度良好,其相对标准偏差为2.06%,且待测样品溶液在10 h内稳定,回收率为95.13%~103.33%,相对标准偏差为2.48%。采用酶解法可以较好地消除样品内淀粉、糊精等对粗多糖检测的干扰,方法稳定、可靠,可作为灵芝咖啡及其他含有淀粉、糊精的产品中粗多糖的检测方法。     

不同工艺黑木耳多糖的抗氧化与糖苷酶抑制作用研究

以黑木耳(Auricularia auricular-judae)子实体为试验对象,为探讨提取工艺对黑木耳多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及抗氧化作用的影响,文章分别采用水、纤维素酶以及碱液制备黑木耳多糖,在α-葡萄糖苷酶的最佳反应条件下检测黑木耳多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用;并对黑木耳多糖的羟基自由基清除率、金属螯合能力及秀丽隐杆线虫的双氧水抗性进行了研究。结果表明,不同提取工艺黑木耳提取物中多糖含量不同,其中碱提黑木耳提取物中糖含量高达50.35%±1.26%,水提黑木耳提取物中糖含量仅为1.65%±0.27%;不同工艺黑木耳提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率及其对体外抗氧化指标和线虫双氧水抗性的影响也有很大差异,其中碱与酶法提取的黑木耳提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率相近(39.24±1.17%与39.61±1.21%),水提取物抑制率仅为13.67±0.97%;酶提取物(2mg/m L)对羟自由基的清除能力及金属螯合力最强,与同浓度水提取物及碱提取物相比差异显著(P0.05);酶与碱提取物均具有明显增强线虫抗双氧水的能力,在双氧水的氧化刺激下,两种提取物均可以使线虫的存活率延长至与空白对照组一致。     

重组Bacillus subtilis产麦芽四糖淀粉酶的发酵优化及麦芽四糖制备

麦芽四糖淀粉酶可水解淀粉或麦芽糊精生成麦芽四糖,在食品领域有着广泛应用。为降低生产成本,对前期构建的生产麦芽四糖淀粉酶的重组枯草芽孢杆菌进行发酵优化。通过对培养基的氮源和碳源进行优化,以5%的接种量,在33℃、200 r/min条件下发酵48 h,发现以25 g/L豆粕粉和25 g/L工业蛋白胨为氮源,5 g/L甘油为碳源时,重组酶酶活力最高可达236 U/m L。利用发酵所得重组麦芽四糖淀粉酶制备麦芽四糖并进行酶反应条件优化,使用高效液相色谱检测产物含量。发现当酶转化反应温度为50℃,反应p H为7. 0,加酶量为30U/g底物,底物麦芽糊精的质量浓度为250 g/L时,反应12 h,麦芽四糖转化率可达73. 2%,为降低生产成本和工业制备麦芽四糖提供了理论依据。     

微胶囊化生姜、枸杞、栀子提取物的ACE抑制率、苦味及稳定性研究

本文通过粉碎、超声获得生姜、枸杞、栀子的混合醇提物,以麦芽糊精、变性淀粉、两者混合分别与明胶作为复合包埋壁材,利用喷雾干燥制成微胶囊,测定其包埋率、ACE（angiotensin-convertion enzyme）抑制率、吸湿性、总酚含量（TPC）、苦味程度,并利用红外光谱（FTIR）、扫描电镜（SEM）、热重分析仪（TGA）对微胶囊化颗粒的结构、热稳定性进行研究。结果表明,微胶囊的最佳壁材为麦芽糊精和变性淀粉质量比1:1混合,此时包埋率为75.24%（P<0.05）,红外光谱分析表明,提取物被壁材包埋成功并形成了淀粉/糊精-酚类-明胶聚合体。与未包埋及单一麦芽糊精、变性淀粉包埋相比,以麦芽糊精和变性淀粉质量比1:1混合作为壁材包埋后的微胶囊苦味显著（P<0.05）降低,吸湿性由未包埋时的52.83 g/(100 g)降为16.04 g/(100 g)。该微胶囊经胃肠消化后其中的酚类释放率为69.64%,ACE抑制率为49.64%（P<0.05）。由此可见,以麦芽糊精和变性淀粉质量比1:1混合作为壁材的微胶囊化药食同源提取物,能明显降低苦味并提高产品稳定性,在室温保存7 d后,ACE抑制率仍高达22.36%。     

淀粉酶酶解大米淀粉制备低DE值脂肪替代物

采用酶法制备低DE值脂肪替代物,比较高温α-淀粉酶,中温α-淀粉酶,β-淀粉酶和糖化酶酶解大米淀粉制备的脂肪替代物-麦芽糊精的性质.结果表明,高温α-淀粉酶最适合用于制备低DE值麦芽糊精,其最佳制备工艺参数为酶用量3mL,pH6.2,酶解温度95℃,酶解时间10min.该条件下样品的流变试验结果表明,DE值在3左右的麦芽糊精形成凝胶时相应的凝胶温度为73.6℃.     

红果参果化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

为了探究红果参果化学成分及其α-葡萄糖苷酶抑制活性。本实验以红果参果为材料,采用溶剂法制备红果参果乙醇提取物和粗多糖。采用紫外分光光度法测定其总黄酮、总花色苷、总多酚和多糖含量,进一步通过超高效液相色谱-飞行时间-串联质谱技术分析其化学成分。利用α-葡萄糖苷酶抑制模型考察粗多糖、乙醇提取物及其主要代表成分的体外α-葡萄糖苷酶抑制作用。结果表明,5个批次的红果参果粗多糖多糖含量为27.59%~37.59%;乙醇提取物的总黄酮含量为1.22%~1.77%,总花色苷为0.90%~1.14%,总多酚含量为13.11%~18.85%。红果参果乙醇提取物化学成分丰富多样,从中共鉴定出21个化合物,其中包含10个黄酮、3个有机酸、3个花色苷、3个酚酸、1个氨基酸和1个聚炔类成分。红果参果乙醇提取物、粗多糖和代表化合物木犀草素的α-葡萄糖苷酶的IC₅₀分别为7.52、37.43和8.03 μg/mL,明显高于阳性对照阿卡波糖（616.17 μg/mL）。本研究初步明确了红果参果的物质基础,并首次报道了红果参果具有潜在抗糖尿病活性,为红果参果的开发利用提供理论参考。     

枸杞多糖特性和单糖组成及木糖醇含量的分析

目的 多种分析方法联合分析枸杞多糖特性和单糖组成及木糖醇含量。方法 枸杞干果采用水提醇沉的方法提取枸杞多糖,计算提取率。建立凝胶渗透色谱-示差检测-多角度激光光散射法测定枸杞多糖分子量及分子量分布;再将提取的枸杞多糖经三氟乙酸水解为单糖,建立高效阴离子色谱-积分脉冲安培法测定水解后的阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、木糖、岩藻糖、核糖9种单糖和木糖醇。结果 采用本法检测宁夏地区的10批枸杞,枸杞多糖得率为1.86%～3.21%;10批枸杞多糖的重均相对分子量为9.12×10⁵～3.65×10⁶ Da,离子色谱法检测10批枸杞中单糖和木糖醇含量从高到低依次为阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、果糖、木糖醇及岩藻糖。结论 本文对枸杞多糖的重均分子量及单糖组成、含量进行初步研究,与现行质量标准中检测方法相比,控制指标更加全面、客观、准确,为建立枸杞多糖的质量控制方法提供技术参考。     

香蕉葡萄糖浆的制备

研究用香蕉提取淀粉来制备葡萄糖浆。香蕉淀粉在抗高温α-淀粉酶的水解下可得麦芽糊精。香蕉麦芽糊精在淀粉葡萄糖苷酶和支链淀粉酶的作用下,经60℃,24h糖化后可制得葡萄糖浆。结果表明:香蕉葡萄糖浆和一般商用葡萄糖浆的化学和物理特性基本相同,但前者的颜色更清晰,适宜于食品工业的应用。     

高效液相色谱示差检测法测定饮料中低分子质量抗性麦芽糊精含量

目的 优化标准方法AOAC 2001.03和GB/T 22224-2008《食品中膳食纤维的测定 酶重量法和酶重量法-液相色谱法》的样品前处理过程,简单、高效、准确地测定饮料中添加的低分子质量抗性麦芽糊精的含量。方法 样品经一定比例稀释后,经色谱柱分离,示差折光检测器测定,内标法定量。结果 方法检出限和定量限分别为0.01 和0.03 g/L,3个添加水平的平均加标回收率为93.2%~96.9%,日内相对标准偏差<1.66%, 日间相对标准偏差 <1.81%。同时考察了市场上常见的添加低分子质量抗性麦芽糊精的茶饮料,碳酸饮料和包装饮用水,测定结果和标签宣称值基本相符,且加标回收率为95.9%~102.3%。结论 本方法样品前处理简单、快速,适用于饮料中添加的低分子质量抗性麦芽糊精含量的测定。     

流苏子多糖的提取分离、理化性质及体外α葡萄糖苷酶抑制活性

采用水提醇沉法从流苏子中提取多糖,Sevage法除蛋白,利用DEAE-52纤维和Sephadex G-100凝胶柱色谱进行分离纯化,得到多糖CRp-1,采用化学和仪器分析方法研究了多糖的总糖和蛋白质含量、单糖组成、官能团特征、空间构像等理化性质,并通过体外实验研究CRp-1对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果显示,从流苏子中分离的多糖CRp-1为白色粉末,溶于水,不溶于有机溶剂;总糖含量为97.12%,蛋白质含量为1.65%,不含单糖和多酚,不属于淀粉多糖;主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为1:5.381:1.146:10.804:6.953:11.908,相对分子质量分别为223200 g/mol;紫外和红外光谱显示具有多糖的特征吸收峰,且含有吡喃糖苷。CRp-1具有三股螺旋结构,且表面为三维多孔结构,并带有一定的圆形颗粒。体外α-葡萄糖苷酶抑制活性实验表明,CRp-1具有一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性,具有浓度依赖性。     

环糊精葡萄糖基转移酶生产α-熊果苷的反应条件优化及分子改造

选择4种环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)分别为来源于Paenibacillus macerans的α-CGTase,Bacillus circulans 251的β-CGTase,Bacillus stearothermophilus NO_2和Anaerobranca gottschalkii的α/β-CGTase,研究不同种类的CGTase生产α-熊果苷的情况。以麦芽糊精为供体,对苯二酚(Hydroquinone HQ)为受体,通过CGTase和淀粉葡萄糖苷酶的两步酶法反应催化合成α-熊果苷。分别优化不同类型的酶合成α-熊果苷的条件,发现Anaerobranca gottschalkii来源的CGTase在如下最优条件下获得的HQ摩尔转化率最高,为25%:以葡萄糖当量(DE)值为9%~13%的50 g/L麦芽糊精作为供体,8 g/L HQ为受体,缓冲液pH 6.0,在40℃下反应24 h,沸水浴灭活后,加入糖化酶处理,高效液相色谱检测产物。为了进一步提高CGTase对底物的转化率,利用定点突变技术对A.gottschalkii CGTase进行分子改造,得到1个突变体Y299A,在最优的反应条件下突变体的HQ转化率可达40%。     

低DE值麦芽糊精组成与凝胶性质研究

通过凝胶过滤色谱研究了不同DE值麦芽糊精分子量分布情况和分支化度,并在此基础上通过流变仪和质构仪测定凝胶温度和凝胶强度,研究了麦芽糊精的组成对其凝胶性质的影响.结果表明;随着DE值的增大,样品中高分子量聚合物的含量降低.使得样品的凝胶温度和凝胶强度呈现下降的趋势.同时也表明DE值在5左右的麦芽糊精由于其在常温下具有较好的凝胶性质,可以作为脂肪替代品应用于低脂食品中.     

糖醇乙酯法测定谷物中非淀粉多糖的含量

将稻子、小麦麸皮磨细后,用80%乙醇萃取游离糖,剩余物在醋酸缓冲液(pH5.0)条件下分别用α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶酶解,除掉淀粉。非淀粉多糖用酸水解为各单糖,采用糖醇乙酯衍生物制备方法,用OV-1701石英毛细管色谱柱,可分离得到非淀粉多糖(NSP)各组成单糖。并以肌醇和自然界中不存在的阿洛糖作内标物,提高了定性定量分析的准确性,测定出稻子、小麦麸皮中可溶性非淀粉多糖各组成单糖的含量。     

马铃薯麦芽糊精的组分分析与性能研究

高效液相色谱(HPLC)与凝胶过滤色谱(GPC)相结合,测定不同DE值的马铃薯麦芽糊精的糖分组成、分子质量分布和分支化度。同时运用差示扫描量热仪(DSC)和粘度快速分析仪(RVA),研究了不同DE值的马铃薯麦芽糊精溶液在老化程度及表观粘度性质方面的异同,为指导具有不同性质麦芽糊精的生产与应用提供理论分析依据。     

耐热型α-葡萄糖苷酶对糖化过程中可发酵性糖产量的影响

α—葡萄糖苷酶是麦芽中能够降解淀粉的四种糖化酶之一。由于在生产过程中淀粉转化为可发酵性糖的最适作用温度为65～73℃。这些酶类的热稳定性是非常重要的，α—葡萄糖苷酶暴露于此温度下10分钟左右，其活性将是30℃时酶活性的5％，甚至更少。我们设想存在一种耐热性更强的α—葡萄糖苷酶，能够提高高温糖化过程中可发酵性糖的产量。为了证实这种假设，我们将非变异重组α—葡萄糖苷酶(对照)和经过变异获得的具有更强耐热性的重组α—葡萄糖苷酶，在实验室糖化中比较实际发酵度以及麦芽糖糊精的含量。加耐热性α—葡萄糖苷酶的糖化过程，其葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖及实际发酵度均有显著增长。因此，我们能够断定，由于糖化过程中耐热性α—葡萄糖苷酶的存在，产生了更多的可发酵性糖，而不需要通过增加投料量，便能够使糖化效率得以提高。