草鱼鱼鳞胶原蛋白提取及活性肽制备研究

以草鱼鱼鳞为原材料,探讨其胶原蛋白酸-酶组合提取工艺,并进一步研究相应抗氧化活性肽和血管紧张素转换酶抑制(ACEI)活性肽的制备方法。结果表明,草鱼鱼鳞胶原蛋白提取的最优工艺为:乙酸浓度0.3 mol/L、乙酸提取固液比1∶15(g/m L)条件下低温下提取24 h;离心后剩余残渣再按1∶10(g/m L)的比例浸入浓度为2%的胃蛋白酶溶液中低温下提取48 h;在该条件下鱼鳞胶原蛋白提取得率可达49.58%。以草鱼胶原蛋白粗提液为原料,制备抗氧化活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度12.5 mg/m L,按10∶1(体积比)的比例加入浓度为4%的木瓜蛋白酶,60℃下酶解75 min,所得酶解液对ABTS~+自由基的抑制率可达45.7%;制备ACEI活性肽的最优工艺为:控制胶原蛋白浓度20 mg/m L,pH值调节为4.0,每10 m L加入6 000 U的酸性蛋白酶,37℃酶解3 h,所得酶解液对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性可达98.8%。本研究结果,有望为水产品加工副产物的资源化利用提供参考。     

乳清蛋白抗氧化肽的制备及体外抗氧化活性研究

采用酶解法制备乳清蛋白抗氧化肽并研究其体外抗氧化活性。结果表明:以羟自由基清除率和多肽含量为指标,筛选出中性蛋白酶为最优酶;在单因素试验的基础上,通过响应面试验确定最佳酶解条件为pH 5. 50、酶解温度65℃、酶解时间1. 65 h、底物质量分数5%、加酶量5 000 U/g,此条件下乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基清除率为74. 54%;乳清蛋白抗氧化肽对羟自由基、ABTS+自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基都具有较好的清除能力,IC50值分别为2. 174、0. 709、2. 813mg/m L和4. 579 mg/m L。表明乳清蛋白抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性,具有一定的开发利用价值。     

六盘水苦荞麦活性肽的体外抗氧化活性的研究

以苦荞麦蛋白为原料,经过酶解制备出苦荞麦活性肽,并采用HPLC将提取的苦荞麦活性肽进行纯化分离,制备出3个不同的肽段(5.8、7.1、32 min 3个峰值的样品)。采用DPPH、ABTS、羟基自由基3种方法检测苦荞麦3个不同肽段的抗氧化效果。试验表明,分离出来的3个肽段都具有抗氧化能力。对DPPH自由基的清除作用中,3个活性肽浓度均为0.1 mg/m L时,清除率分别为48.42%、62.06%、56.87%;对OH自由基的清除作用中,3个活性肽浓度为0.1 mg/m L时,清除率分别为45.07%、63.29%、48.10%;在对ABTS~+自由基的清除作用中,3个活性肽浓度为0.1 mg/m L时,清除率分别为53.07%、69.32%、46.01%。结论:分离出来的3个肽段都具有较强的抗氧化能力,其中以7.1 min收集的样品2对DPPH自由基、羟基自由基、ABTS~+自由基的抗氧化作用最强,均达到60%以上。     

水飞蓟粕蛋白的酶解及其酶解物抗氧化活性研究

以水飞蓟粕为原料,研究其蛋白酶解工艺及酶解物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶用于制备水飞蓟粕蛋白抗氧化肽具有明显的优势。正交试验确定了制备水飞蓟粕蛋白抗氧化肽的最佳酶解条件为:底物质量分数2%,加酶量14 000 U/g,pH7.0,温度55℃,酶解时间120 min,该条件下制备的水飞蓟粕蛋白酶解物对羟自由基的清除率为88.57%。抗氧化试验显示,水飞蓟粕蛋白酶解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,IC50分别为0.402 g/L和6.659 g/L,水飞蓟粕蛋白酶解物同样也具有较强的还原能力。     

松仁肽的制备及抗氧化活性研究

以松子分离蛋白为原料,水解度为评价指标,通过单因素和响应面法优化松仁肽的酶解工艺,并以羟自由基清除能力和DPPH清除率评价松仁肽的抗氧化活性。试验结果表明,松仁肽制备的最佳工艺条件为酶解温度52℃、底物浓度3.2%,pH 9.1,酶解时间3 h、加酶量9 000 U/g。在此酶解条件下,水解度可达0.329 7。制备的松仁肽在浓度24 mg/mL时能清除全部羟自由基;在10 mg/mL时对DPPH的清除率达到75%。此时的松仁肽表现出一定的抗氧化活性。     

青鱼肉活性肽的制备及其抗肿瘤活性研究

以青鱼肉为原料,经二步酶解、凝胶色谱分离纯化制备抗氧化和抗肿瘤活性肽。首先以抗氧化活性和水解度为评价指标,采用单因素和正交试验优化青鱼肉活性肽的制备工艺;然后采用凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力和抗肿瘤活性。结果表明,二步酶解青鱼肉的最优酶解组合为碱性蛋白酶-复合蛋白酶,最佳制备工艺为:pH 8.00、酶解温度50℃、料液比2∶10(g∶mL)、酶添加量6000 U/g、酶解时间3 h,在此条件的二步酶解物清除DPPH自由基的半抑制浓度(half inhibiting concentration,IC 50)为9.52 mg/mL;经Sephadex G-15分离得到5个肽组分,其分子质量范围为130~1397 Da;抗氧化实验表明,组分IV具有最强的DPPH自由基清除能力,其IC ₅₀为3.17 mg/mL,为二步水解物的3倍。细胞增殖抑制实验发现,10 mg/mL组分IV对HepG 2细胞抑制率为92.54%,表明青鱼肉活性肽同时具有抗氧化和抗肿癌活性。     

三酶法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽及活性研究

为了探索制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的最佳工艺,在碱性蛋白酶和胰蛋白酶酶解的基础上,以酶解温度、酶解时间、酶解pH值和酶与底物质量比([E]/[S])为试验因素,以水解度和DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面分析法优化Orientase 20A酶的酶解条件。结果表明:最优工艺参数为:酶解温度为41.74℃、pH3.97、酶解时间为6h、[E]/[S]为1.5%,酶解液水解度和DPPH自由基清除率的预测值分别为9.42%和35.01%,验证值分别为9.57%和35.21%。响应面对酶解法制备罗非鱼鱼皮胶原蛋白抗氧化肽的酶解条件的优化是可行的,可以用于实际预测。抗氧化活性实验表明,酶解肽具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力,其IC50值分别为10.78mg/mL和8.26mg/mL。     

鱿鱼肌肉蛋白肽的制备工艺优化及其抗氧化活性

以鱿鱼肌肉为原料,先考察了酶解时间、温度和加酶量对鱿鱼蛋白肽清除羟自由基的影响,再采用BoxBehnken实验设计和响应面分析对鱿鱼肌肉酶解工艺条件进行优化。同时采用清除自由基和小鼠体内抗氧化活性对抗氧化肽的抗氧化活性进行了研究。结果表明:酶解时间、加酶量对羟自由基清除率影响最为显著(p0.01),最佳工艺条件为:酶解时间6 h,加酶量0.07 g/10 g,酶解温度55℃。在该条件下,羟自由基清除率的验证值为90.31%±0.54%。鱿鱼抗氧化肽对DPPH·、OH·和O-2·的EC50分别为8.8、16.5和10.3 mg/m L。鱿鱼抗氧化肽高低剂量组的小鼠体内SOD活性分别比空白组高19.2%和14.2%。抗氧化肽高低剂量组小鼠体内的GSH比空白组提高了23.4%和14%。鱿鱼抗氧化肽具有较强的抗氧化活性。     

鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性

以鳕鱼骨为原料,采用热水提取法提取胶原蛋白,并采用中性蛋白酶、复合蛋白酶、酸性蛋白酶和胃蛋白酶分别进行酶解制备鳕鱼骨胶原蛋白肽。以对.OH、DPPH.和O2-.自由基的清除率作为评价指标,比较4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明:4种蛋白酶制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基均有一定的清除能力,且其清除能力随样品质量浓度的增大而增强;4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基的清除能力各不相同,其中对.OH的清除能力最强且有较好的量-效关系;当多肽质量浓度在4～10 mg/mL时,4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽对DPPH.的清除能力优于对O2-.的清除能力。     

三文鱼皮胶原肽的制备及其抗氧化活性的研究

目的:以三文鱼皮为原料,采用中性蛋白酶制备胶原肽,研究其抗氧化活性。方法:在单因素试验的基础上,利用正交试验优化工艺条件;用凝胶渗透色谱法测定酶解液分子质量分布;测定胶原肽成品清除2,2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)自由基能力和还原力,评价其抗氧化活性。结果:最优酶解条件:酶量0.15%(以鱼皮计),鱼皮-水质量比1:3.0,酶解温度55℃,pH6.0,酶解时间6h。在此条件下,胶原肽的最高得率74.28%。酶解液中分子质量在180～1000Da之间的肽占88.08%。胶原肽成品具有较强的清除DPPH自由基能力,IC50为1.302mg/mL,同时也表现出较强的还原力,其中2.5mg/mL胶原肽的还原力是相同浓度BHT的0.69倍。结论:由本法所得胶原肽是以分子质量180～1000Da之间的寡肽(约2～8个氨基酸残基)为主的物质,具有较好的抗氧化活性。