黄酒酿造过程中优势细菌产生物胺的检测与评价

采用显色培养基法、脱羧酶序列特异PCR技术和HPLC分析脱羧酶液体培养基生物胺含量变化3种方法检测和评价来自黄酒酿造过程的41株细菌产生物胺的情况。研究表明,3种方法检测结果大致相同,互补使用能够准确分析细菌产生物胺的情况;41株细菌中,53.7%以上都能产酪胺,31.7%以上产腐胺,24.3%以上产组胺;14株短乳杆菌均携带酪氨酸脱羧酶基因,其中11株菌的酪胺产量超过50.00 mg/L,且多数菌能代谢产生多种生物胺,因此推断其对黄酒中生物胺含量影响最大;细菌代谢是否产生物胺及产生物胺的能力无种属特异性,但有菌株特异性。     

黄酒酿造过程中产生物胺菌株的筛选及其特性研究

从工业化黄酒酿造环境中筛选具有产生物胺能力的微生物,通过显色反应对菌株的产胺能力进行定性分析,用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行定量分析,获得12株产生物胺的阳性菌株。其中2株菌产生物胺含量较高,经16S r DNA序列分析,菌株AR281为短乳杆菌,菌株AR193为棒状乳杆菌。37℃时,菌株AR281总生物胺的产生量最高为154.76 mg/L;菌株AR193总生物胺的产生量最高为173.78 mg/L。本文研究了发酵温度和发酵时间对其产生物胺能力的影响,为黄酒酿造过程中生物胺含量的控制提供了理论依据。     

乳酸菌强化技术降低黄酒浸米过程生物胺的积累

食品中适宜浓度的生物胺具有调节生理机能的作用,然而含量过高会产生不良反应。黄酒浸米过程可形成大量的生物胺,并随大米进入发酵过程,导致黄酒中生物胺浓度过高。为控制浸米环节生物胺的积累,本研究在解析浸米水微生物群落结构的基础上,将筛选的1株生长和产酸能力强且能够降解生物胺的植物乳杆菌14-2-1扩培后接种于浸米起始阶段,使浸米水中酸度增加速率明显提高,群落中植物乳杆菌的占比由传统工艺的0.95%升至79.52%,形成以植物乳杆菌为主的群落结构,同时生物胺质量浓度(2.44 mg/L)降低93.84%。基于浸米水微生物群落结构解析结果设计的乳酸菌强化技术,大幅降低了浸米工序中生物胺的质量浓度,为有效控制浸米过程中生物胺的积累,降低黄酒中生物胺的质量浓度提供一个新的方法。     

四川麸醋醋醅中优良醋酸菌的筛选及其产酸特性

从四川麸醋醋醅中筛选获得5株高产酸菌株(C9-4、C12-4、A30-16、A12-7和A30-14-2),对其进行形态学、生理生化鉴定及16S r DNA分子鉴定,结果显示,5株菌均为巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurianus)。其产酸特性表明,菌株C9-4、A30-16和A30-14-2能耐受9%(v/v)乙醇;5株菌均能耐受4%(v/v)底酸;补加酒精实验表明,菌株C9-4的连续产酸能力最强;菌株C9-4、A30-16、A30-14-2在40℃时仍能产酸;相同条件下,菌株C9-4、A30-16、A30-14-2产酸速率优于菌株C12-4和A12-7。5株醋酸菌产酸总量从高到低依次为:A30-16C12-4C9-4A30-14-2A12-7。     

生食大眼金枪鱼中生物胺产生菌的分离与鉴定

为了探究大眼金枪鱼(Thunnus obesus)生鱼片中生物胺产生菌的产胺特性,从市售大眼金枪鱼生鱼片中分离出9株生物胺产生菌的单菌落并确定其生长曲线,采用高效液相色谱法分析了菌株发酵液中生物胺的浓度。结果表明,9株菌株为嗜温菌,适宜环境下均可产生色胺、腐胺和尸胺。筛选出3株生物胺产量较高的菌株,通过单菌落接种于TSB培养基培养,3 d累积产生生物胺的质量浓度分别为40. 4、41. 3和50. 3 mg/L。将产胺量较高的菌株进行VITEK 2和16S r DNA鉴定,3株菌株分别为溶酪巨型球菌(Macrococcus caseolyticus),产碱普罗威登斯菌(Providencia alcalifaciens)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。该研究结果为进一步研究如何抑制大眼金枪鱼中生物胺的产生提供了理论依据,也为大眼金枪鱼的保藏研究奠定了理论基础。     

云南建水酸浆豆腐中乳酸菌的生长特性

为了筛选出优良的乳酸菌进行发酵制作酸浆,对分离自云南建水豆腐酸浆中的五株乳酸菌(SYG01、SYG02、SYG03、SYG04、SYG05)的生长曲线、产酸能力、耐酸能力和耐渗透压能力进行了比较。生长曲线实验表明在相同培养时间内,菌株SYG02繁殖能力最强,其次是菌株SYG03,而菌株SYG05、SYG04、SYG01的生长速率明显较慢;在产酸方面SYG02产酸能力最强,速度最快,SYG03、SYG05和SYG04次之,SYG01最弱。在耐酸方面,在pH4.0的环境下5株菌生长良好,在pH3.0的酸性环境下5株菌虽然能够存活,但活菌数的数量级仅在102~104 CFU/mL,其中菌株SYG02和SYG03比其它三株菌株表现出较好的耐酸能力。在耐渗透压方面,SYG02在8%(w/V)的NaCl中依然表现出较强的耐受性,活菌数的数量级达到107 CFU/mL,其余4株菌在NaCl含量大于6%(w/V)时生长受到明显抑制。并以发酵黄浆水的pH及产酸量为指标对菌株的产酸能力进行比较,发现混合菌株的产酸能力高于单菌株,其中菌株SYG02和菌株SYG03组合发酵的效果最好,在发酵72 h后黄浆水的pH为3.52,产酸量达到6.46 g/L。从而得出菌株SYG02具有良好的生长、产酸和耐渗透压能力,具有良好的应用潜力,对酸浆豆腐的工业化生产有重要的意义。     

分离自腊鱼的乳酸菌生长及产酸特性

采用Gompertz模型拟合从腊鱼中分离的5株乳酸菌的生长和产酸曲线,分析其生长和产酸特性。结果表明：Gompertz模型对乳酸菌的生长和产酸曲线的拟合精度很高;在生长模型和产酸模型中,5株乳酸菌生长的早期适应性相似,其中乳酸片球菌和食品乳杆菌的生长速率(0.32h-1)和产酸速率(0.32h-1)高于其他菌株;在生长模型中两者平衡菌数最高(分别为2.48和2.49);在产酸模型中两者平衡pH值最低(都为3.76);乳酸菌培养液的pH值与总菌数OD600nm值显著线性负相关。     

除膻菌株的功能性分析

将4株具有除膻效果的霉菌进行功能性分析、包括脂肪酶活力测定试验、生长曲线的测定、产H2S和产生物胺测定试验、抑菌试验、耐盐性和耐亚硝酸盐性试验、拮抗试验与复配试验。结果表明,菌株THZ1、TZH3、TZH4和4QT3的脂肪酶活力分别为4.35、2.34、3.62、2.63 U/mL。4株菌均不产H2S,菌株4QT3产生物胺,其余3株菌不产生物胺。菌株TZH3和TZH4的抑菌能力、耐盐性和耐亚硝酸盐性较好。最终选择TZH3和TZH4进行拮抗试验及复配试验。结果显示,菌株TZH3和THZ4不具有拮抗作用,当TZH3和TZH4的复配体积比为1∶1时,生长情况较优。     

自然发酵肉制品中乳酸菌的筛选

为获得适合肉制品发酵的优良乳酸菌菌株,对来源于自然发酵肉制品中的25株乳酸菌进行筛选,其中19株在6 g/100 mL NaCl和150 mg/kg NaNO_2液体培养基中生长较好,结合其他发酵特性实验,13株乳酸菌符合肉制品发酵剂标准,挑选其中3株进行产酸能力、生长曲线及不同温度条件下生长情况的研究。结果表明:3株菌均具有较强的增殖及产酸能力;培养12 h时菌株即进入稳定生长期,培养24 h时培养基pH值降到4左右;在肉制品的发酵温度范围内能较好地生长。经形态学和16S rRNA序列分析,3株菌均为弯曲乳杆菌,它们均可作为潜在的开发肉制品发酵剂的出发菌株。     

贵州镇远道菜中生物胺降解菌的筛选及鉴定

为保障传统镇远道菜的食品安全,从不同发酵阶段的道菜中分离筛选生物胺降解菌.鉴于产胺菌对传统发酵食品风味和品质的贡献,采用双层显色平板培养技术从样品中分离出32株具有产生物胺性能的菌株,再以不同种类的生物胺作为外源氮源利用高效液相色谱法分析各菌株的生物胺降解率,从中筛选出具有较高生物胺降解性能的菌株LS1-002-014...     

黄酒发酵液中产生物胺乳酸菌的分离鉴定与评价

从黄酒发酵液中分离得到6株乳酸菌,16S rDNA序列分析和生理生化鉴定结果表明:菌株R1、R4、R5、R8、R20为Lactobacillus rossiae,菌株R2为Lactobacillus casei。采用平板检测法对6株乳酸菌产生物胺能力进行了评价,结果显示只有乳酸菌R1具有产生物胺的能力。利用HPLC检测对平板检测结果进行了验证,结果表明乳酸菌R1能产598.61 mg/L的腐胺,其他菌株不具有产生物胺的能力。平板检测与HPLC检测结果相一致,表明平板检测可作为一种有效、操作简单、费用低的定性评价乳酸菌产生物胺能力的手段。     

发酵型饮料酒中生物胺含量的调查与分析

利用反相高效液相色谱技术,以丹磺酰氯柱前衍生,分析了我国市场中32个啤酒样品、32个葡萄酒样品和12个黄酒样品中生物胺的含量。结果表明,我国啤酒、葡萄酒样品中含有较低的生物胺物质,平均含量分别为4.787 mg/L和11.240 mg/L,黄酒中生物胺含量较高,达到了78.304 mg/L。3种饮料酒含量较多的单体生物胺均为腐胺和酪胺,我国葡萄酒中的组胺含量低于国际现有组胺标准的最低限量要求。不同企业生产的啤酒样品和不同原产地的葡萄酒样品中组胺含量存在显著差异,黄酒样品中生物胺含量为18.603～140.010 mg/L,样品间差异很大。     

Biogenic amine production by Oenococcus oeni during malolactic fermentation of wines obtained using different strains of Saccharomyces cerevisiae

Twenty-six wild Oenococcus oeni strains were investigated for their ability to form biogenic amines during malolactic fermentation in synthetic medium and in wine. Eight strains produced histamine and tyramine in screening broth at concentrations of 2.6-5.6 mg/L and 1.2-5.3 mg/L, respectively. Based on their ability to form biogenic amines, five strains were selected to inoculate three wines obtained by the fermentation of three different Saccharomyces cerevisiae strains (A, B, and C). All bacterial strains could perform malolactic fermentation for short periods in wine C, whereas only one strain performed complete malolactic fermentation in wines A and B. Two O. oeni strains (261 and 351) produced histamine and tyramine in wine C. Time-course analysis of these compounds showed that for both strains, histamine and tyramine production began at day 10 and finished on day 25, after the end of malolactic fermentation. These results indicate that the ability of O. oeni to produce histamine and tyramine is dependent on the bacterial strain and on the wine composition, which in turn depends on the yeast strain used for fermentation, and on the length of bacteria-yeast contact time after the completion of malolactic fermentation.     

孝感米酒中乳酸菌的分离及其对黄酒品质的影响

目的:探明孝感米酒中乳酸菌的种类及其对黄酒品质的影响。方法:采用传统可培养方法使用MRS培养基、厌氧工作站,对孝感米酒中乳酸菌进行分离,并接入黄酒对黄酒发酵过程进行干预,进而通过分析黄酒有机酸与滋味等理化特征来评价乳酸菌的发酵特性。结果:从孝感米酒中分离到9株乳酸菌,基于16S rDNA基因对乳酸菌分离株进行了系统发育分析,结果显示它们属于魏斯氏菌属(Weissella)、片球菌属(Pediococcus),种水平上分为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、融合魏斯氏菌(Weissella confusa)、食窦魏斯氏菌(Weissell acibaria)。将这9株菌应用于黄酒发酵制作,在菌株融合魏斯氏菌MJ3-1与MJ4-1、戊糖片球菌MJ6-1、食窦魏斯氏菌MJ8-1干预下,黄酒中乳酸含量显著增加(p<0.05),苹果酸含量显著减少(p<0.05);同时黄酒的滋味中咸味和丰度有显著增加(p<0.05)。总体上来说,乳酸菌对黄酒滋味的影响由酸味、鲜味与丰度引起。结论:融合魏斯氏菌MJ4-1能增加黄酒乳酸,并降低苹果酸含量作用最强,适用于黄酒复合型发酵剂的研发。     

酿酒工艺对黄酒中生物胺的影响

采用高效液相色谱技术,针对黄酒酿造工艺,模拟实际生产,分析了微生物、工艺参数和冷热处理等对黄酒中生物胺含量的影响。结果表明,酵母Y可使生物胺总量降低,霉菌M可使生物胺总量增加,细菌除戊糖片球菌L04使生物胺总量降低外,其他细菌均可使生物胺总量增加;在培养温度32 ℃,培养时间3 d,pH值为3.5,酒精体积分数15%的条件下,生物胺总量为60.19 mg/L;煎酒使生物胺含量增加,冷冻过滤技术因有效降低酪胺含量使生物胺总量大幅降低。     

黄酒中生物胺的形成及其影响因素

采用高效液相色谱技术,分析了黄酒酿造原料、发酵剂和不同年份酒中的生物胺含量,并对传统工艺和机械化生产过程中生物胺含量的变化进行了跟踪分析,剖析了影响生物胺含量的因素。结果表明,腐胺和酪胺是黄酒中的主要生物胺,糯米原料和曲中生物胺含量很低,检出的3种脂肪族生物胺(腐胺、尸胺和精胺)总量不超过6.01mg/kg;7种酒母中生物胺总含量差异极显著(P<0.01),总量变化范围为16.43～87.72 mg/L;酒母中生物胺总量与总酸呈正相关,与酒精度和感官品质呈显著性负相关;机械化工艺和传统工艺发酵过程中生物胺均呈先升后降的变化趋势,但传统工艺比机械化工艺生物胺含量高;发酵过程中氨基酸逐渐增多,与生物胺含量变化无相关性;发酵醪中细菌总数在前期急剧增加到最大值,之后逐渐降低,变化趋势与生物胺含量变化相同;陈酿时间对传统工艺生物胺含量影响明显,随着时间延长,生物胺含量降低,但陈酿时间对机械化工艺无明显影响。本实验检测的黄酒发酵醪及年份酒中生物胺总量范围为0.14～175.15 mg/L,不存在安全问题。     

Potential of wine-associated lactic acid bacteria to degrade biogenic amines

Some lactic acid bacteria (LAB) isolated from fermented foods have been proven to degrade biogenic amines through the production of amine oxidase enzymes. Since little is known about this in relation to wine micro-organisms, this work examined the ability of LAB strains (n = 85) isolated from wines and other related enological sources, as well as commercial malolactic starter cultures (n = 3) and type strains (n = 2), to degrade histamine, tyramine and putrescine. The biogenic amine-degrading ability of the strains was evaluated by RP-HPLC in culture media and wine malolactic fermentation laboratory experiments. Although at different extent, 25% of the LAB isolates were able to degrade histamine, 18% tyramine and 18% putrescine, whereas none of the commercial malolactic starter cultures or type strains were able to degrade any of the tested amines. The greatest biogenic amine-degrading ability was exhibited by 9 strains belonging to the Lactobacillus and Pediococcus groups, and most of them were able to simultaneously degrade at least two of the three studied biogenic amines. Further experiments with one of the strains that showed high biogenic amine-degrading ability (L. casei IFI-CA 52) revealed that cell-free extracts maintained this ability in comparison to the cell suspensions at pH 4.6, indicating that amine-degrading enzymes were effectively extracted from the cells and their action was optimal in the degradation of biogenic amines. In addition, it was confirmed that wine components such as ethanol (12%) and polyphenols (75 mg/L), and wine additives such as SO₂ (30 mg/L), reduced the histamine-degrading ability of L. casei IFI-CA 52 at pH 4.6 by 80%, 85% and 11%, respectively, in cell suspensions, whereas the reduction was 91%, 67% and 50%, respectively, in cell-free extracts. In spite of this adverse influence of the wine matrix, our results proved the potential of wine-associated LAB as a promising strategy to reduce biogenic amines in wine.     

黄酒中生物胺的检测方法改进

本研究在国标GB/T 5009.208-2008基础上简化了样品前处理条件和步骤,改进了检测黄酒中生物胺的方法。经方法学验证,8种生物胺得到了较好分离,标准品线性关系良好,相对标准偏差(RSD)值均＜2%,回收率均在92.0%～106.0%,方法具有良好的重复性和回收率。与国标生物胺的检测方法相比,本检测方法操作简单、快速,并且检测结果可靠。     

饮料酒中生物胺的检测方法

生物胺是一类低分子量的、广泛地存在于食品中的、具有生物活性的有机化合物,含量在一定范围内时是对人体有益的生物活性物质,若超过其限值将会给人体带来严重的影响,因此,有效地检测食品中的生物胺对保护人们的健康尤为重要。饮料酒中生物胺主要来自于发酵过程,因此国内外生物胺的检测多集中于啤酒、葡萄酒、黄酒等发酵酒。随着现代检测分析技术的发展,低检出限、高灵敏度、高准确度的检测方法不断涌现,实现了从过去常量组分检测到现在的痕量乃至超痕量组分检测的跨越。本文综述了啤酒、葡萄酒、黄酒中生物胺的检测方法 ,以期为今后生物胺的检测提供便利。     

黄酒酵母HO基因的敲除及其对黄酒发酵的影响

为对黄酒酵母菌株的遗传学进行研究,对黄酒酵母利用基因敲除技术敲除HO基因,通过Mcclary产孢培养基于25?℃条件下培养5～7?d,得到a和α两种不同配型且配型不会发生转变的黄酒酵母单倍体菌株,通过群体杂交,成功获得了全敲除HO基因的二倍体酿酒酵母菌株黄酒酵母11-1-HOΔ,用于黄酒发酵实验。结果表明：通过基因工程手段敲除HO基因对黄酒发酵无显著影响,可用于工业生产中,且黄酒酵母11-1-HOΔ具有代表性,获得的单倍体是进一步研究黄酒酵母遗传基础和代谢机制的重要材料。