高生物量富硒产朊假丝酵母菌株的选育

从5株优良的发酵酵母菌中筛选出耐硒和富硒能力较好的产朊假丝酵母,采用耐酸驯化和梯度浓度的耐硒驯化增加菌株的抗性。研究表明,产朊假丝酵母Ⅰ的富硒能力更好。在此基础上,经复合诱变、亚硒酸钠抗性平板初筛和摇瓶复筛,筛选出生物量和含硒量都较高的菌株D-5,再将突变株D-5进行紫外诱变,筛选出1株高生物量和高含硒量的菌株U-16,其菌株生物量为5.86 g/L,总硒量为1 575.40 μg/g,有机硒量为1 500.90 μg/g,其有机硒占胞内总硒比重的95.26%。与出发菌株相比,筛选菌株的生物量提高了67.90%,有机硒量增加了95.95%。     

高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1。对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株。通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT。采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化。借助于SAS软件,首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值。在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始pH值为4.52。结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26μg/g,硒总含量为10654.62μg/L,为出发菌株的1.62倍。     

高富硒酵母菌诱变选育研究

对36株不同来源的酵母菌进行了硒耐受性分析和比较,获得1株硒耐受性和富硒能力较强的热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)菌株1254。以该菌株为出发菌株,进行了亚硝基胍诱变和亚硒酸钠抗性筛选、紫外线诱变和乙硫氨酸抗性筛选等两轮突变和筛选,获得突变菌株1254-6-1,其生物量、总硒含量、有机硒的含量及转化率达到7.60 g/l、5 626.00μg/g、4 879.99μg/g、86.74%,分别为原始出发菌株的1.85倍、7.90倍、9.35倍、1.18倍;各种氨基酸的含量均高于出发菌株,其中蛋氨酸和胱氨酸的含量分别是出发株的135%和194.10%。     

高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1.对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株.通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT.采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化.借助于SAS软件,首先利用Plaekett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值.在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始PH值为4.52.结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26ug/g,硒总含量为10654.62ug/L,为出发菌株的1.62倍.     

硒浓度梯度驯化结合紫外诱变法选育富硒酵母菌研究

为获得高产富硒酵母,通过硒浓度梯度驯化啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205、戴氏酵母Sac.delbrueckii Fec209、热带假丝酵母Candida tropicalis Fec2011等3株酵母菌,结果显示啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205比其他2株酵母的耐硒性能更强。因此以啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205为原始菌株进行紫外诱变以提高其富硒能力。通过硒抗性筛选,挑取出6株生长快、菌落大的突变菌株单菌落。取发酵培养基中生物量大的3株酵母菌Sac.cerevisiae Y-3,Y-4,Y-1,接种于硒浓度为40μg/ml发酵培养基,结果显示选育出的3株诱变后的啤酒酵母Sac.cerevisiae Y-3,Y-4,Y-1的硒含量分别为932、832、915μg/g,其中最高的Y-3比原始菌株啤酒酵母Sac.cerevisiae Fec205的硒含量增长50.08%、生物量提高了50.97%。     

富硒酵母的选育及其发酵条件的优化试验

通过对一株耐硒酵母进行UV和60Co逐级诱变,获得一株产量高的突变株Y7,发酵液的硒总含量达19mg/L,是出发菌株的1.58倍,经多次传代试验,证明其稳定性良好。通过单因素、L16(37)正交试验对其发酵培养基和培养条件进行优化,试验表明富硒酵母发酵培养基的最佳配方是:蔗糖6%,牛肉膏1%,蛋白胨1%,K2HPO4 0.15%,亚硒酸钠35μg/L;最佳培养条件:初始pH为4.0,温度32℃,装液量60mL/250mL摇瓶,转速200r/min,10%(v/v)接种量,培养48h。富硒酵母的硒总含量达23mg/L以上,是出发菌株的1.92倍。     

高富硒酵母菌株的筛选及其富硒特性分析

以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）为出发菌株,NaN3为诱变剂、H2O2为选择压力进行菌株诱变筛选,以总硒及有机硒的含量与产率、硒磷酸合成酶（SPS）活性和蛋白硒含量为评价指标进行菌株富硒特性研究。结果表明,经10 mol/L NaN3处理40 min和2.50%H2O2筛分,从出发菌株中得到两株富硒水平高、富硒能力稳定的菌株HXS-01和HXS-02,经48 h摇瓶富硒培养后,菌株HXS-01和HXS-02总硒和有机硒含量及产率、SPS活性和蛋白硒含量分别比出发菌株高3.4～4.0倍、2.9～3.5倍、0.7～1.1倍和0.9～1.1倍,且以菌株HXS-02的富硒能力更高,其总硒含量和产率分别为2 303.97 μg/g和7 945.19 μg/L,有机硒占总硒的百分比超过97%。利用H2O2作为一种新的选择压力可以有效筛选出具有高SPS活性的富硒酵母菌株。     

海藻糖产生菌株的化学诱变选育

从土壤中分离纯化获得9株酵母菌株,并从中得到一株海藻糖产量较高酵母菌株,经初步菌种鉴定属瓶形酵母属。以其作为出发株,得出了以硫酸二乙酯(DES)诱变该株的致死率曲线,诱变剂用量为1%、诱变时间为50min时,该株的致死率达到75%。在该诱变条件下,采用三氯乙酸浸提酵母菌中的海藻糖,用硫酸蒽酮法在波长为620nm测定其海藻糖的含量。突变株经初筛和复筛,得到海藻糖高产菌株,其海藻糖含量较出发株高1.6倍,海藻样含量达到525μg/mL发酵液,干重比为19%,是目前报道海藻糖在酵母中干重比的1.2倍。     

富硒酵母菌株的选育

以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae L-11为出发菌株,通过DES多次诱变,Na2SeO3和乙硫氨酸抗性平板选择,得到一株高硒和高蛋氨酸含量的菌株L-11-7-2,其蛋氨酸含量达到1.37%,是L-11的169%.对L-11-7-2进行富硒培养,细胞内总硒和硒蛋氨酸分别为2452μg/g和1650μg/g,分别为出发株的280.2%和369.1%.     

常压室温等离子体诱变选育富硒纳豆芽孢杆菌

纳豆芽孢杆菌可以转化亚硒酸钠为有机硒。对一株纳豆芽孢杆菌的生长曲线进行测定,确定了亚硒酸钠适宜的添加时间和添加量。以纳豆芽孢杆菌BSN424为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,根据耐硒和富硒能力筛选,经连续传代培养后筛选出了富硒纳豆芽孢杆菌。结果表明,适宜加硒时间为培养后3 h,培养时间为24 h,培养基适宜硒质量浓度为6μg/mL,常压室温等离子体诱变系统功率为100 W,诱变时间为25 s。诱变后筛选得到一株具有较高富硒能力的诱变菌株BN-44,经摇瓶发酵后的富硒量为1136.43μg/g,相比出发菌株的742.12μg/g提高了53.13%。研究表明常压室温等离子体诱变育种能有效地对纳豆芽孢杆菌BSN424进行诱变,旨在为有机硒生物转化法中寻找益生菌富硒载体及其诱变育种提供一定依据。     

饲用硒酵母制备过程中硒梯度添加方法的研究

硒酵母制备过程中，当环境硒质量浓度大于10μg/ml时，可根据酵母生长的几个不同阶段采用硒梯度增加法。保持发酵初期培养基中硒浓度在较低水平，随着酵母生长繁殖加快，对数生长期来临，硒浓度再提高至实验确定的水平(25μg/ml)。这不仅能提高硒酵母产量15.2％，而且还能有效地避免红硒沉淀出现，使成品酵母有机硒含量达90％以上。     

高生物量富硒酵母的选育和培养条件的初步研究

对富硒酵母进行了选育并进行了条件优化，得到了摇瓶培养时富硒酵母的最适发酵条件：温度30℃，10％接种量，转速200r／min，发酵培养基最适初始硒浓度为25μg／ml，初始pH为4．0，发酵培养时间48h，经测定成品硒酵母生物量达到10g／L，硒含量超过1500μg／g，硒总含量超过15000μg／L，其中有机硒含量超过90％。     

富硒益生菌的筛选及其富硒条件的优化

为了获得能耐受较高亚硒酸钠质量浓度和具有富硒能力的益生菌菌株,对7株酵母菌和12株乳酸菌进行了筛选。结果表明,所有菌株均能在亚硒酸钠质量浓度为20~80μg/m L的平板上生长,乳酸菌YQRS菌株和酵母菌FJYJM3菌株具有较高的耐受性和富硒能力。对它们进行发酵条件的优化,表明YQRS菌株在亚硒酸钠添加量为15μg/m L、添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最好,菌体生物量为2.66 g/L,总硒含量能达到2 300.26μg/L。而FJYJM3菌株在亚硒酸钠添加量为20μg/m L,添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最显著,生物量能达到4.86 g/L,总硒含量能达到5 790.99μg/L。     

高产谷胱甘肽酵母菌的选育

从自然环境土壤样本中分离筛选出一株谷胱甘肽(GSH)产量为35.4mg/LGSH的酵母菌株Y51;经紫外线诱变、亚硝基胍诱变后,分别用乙硫氨酸、氯化锌和三氮锉三种抗性平板进行抗性筛选,得到一株GSH高产菌株Y51-21-15;对该菌株摇瓶发酵生产GSH的工艺条件进行优化后,菌株Y51-21-15产GSH量达158.4 mg/L,较出发菌株提高3.5倍。     

氯化锂诱变赤灵芝原生质体选育高锗菌株的研究

采用化学诱变剂氯化锂诱变赤灵芝原生质体,对高锗含量的菌株进行了筛选。结果表明:经0.3%氯化锂诱变后,致死率为72.8%。此时诱变菌株第4代锗含量达到最高,为174.88μg/g,比原发菌株提高了269.02%,第3代比第1、2代锗含量分别提高3.33%、0.80%,较原发菌株提高了281.30%,诱变菌株遗传稳定性良好。     

冬虫夏草原生质体诱变育种研究

以冬虫夏草原生质体为材料,经紫外诱变获得了性状优于出发菌株的突变株。实验结果表明:生物量最高的再生菌株为诱变30s的8号菌株,生物量达到1.3445g/100mL,比出发菌株生物量提高55.16%;胞内多糖产量最高的再生菌株为诱变30s的3号菌株,胞内多糖产量达到54.570mg/g,比出发菌株多糖产量提高52.9%;富硒能力较高的突变菌株是诱变30s的8号菌株,富硒量达到125.8μg/g,比出发菌株提高50.11%。由结果可知,原生质体诱变技术可以用于冬虫夏草的菌种选育。     

产ε-聚赖氨酸白色链霉菌复合诱变选育研究

白色链霉菌(Streptomyces albulus)出发菌株采用紫外诱变和硫酸二乙酯(DES)化学诱变进行复合诱变处理,处理液接种于甘氨酸和多聚赖氨酸抗性平板选育。通过优化甘氨酸和多聚赖氨酸剂量、紫外照射剂量和化学诱变剂DES剂量等诱变条件,并对诱变后的菌株进行初筛和复筛,最后得到一株较高产ε-多聚赖氨酸的菌株,ε-聚赖氨酸的产量达到0.73g/L的较高水平,是出发菌株的2.2倍。经5次传代发酵表明该菌株稳定。     

基于氯化锂复合紫外诱变:10-HDA高产菌株的筛选

实验通过氯化锂复合紫外线诱变手段,寻求10-HDA高产菌株,采用薄层分析法初筛,继续诱变摇瓶复筛,经高效液相色谱检测10-HDA含量,得到一株与出发菌株QYW001相比生物量、10-HDA的含量均有所提高的诱变株QYWT002,10-HDA的产量可达1.4312μg/mL。     

粘红酵母胡萝卜素高产菌株的诱变选育

以甘蔗糖蜜为碳源,摇瓶发酵初筛,从10株酵母茵中筛选得到一株生物量和胡萝卜紊含量均较高的菌株R3。利用紫外诱变,选育出一株正突变菌株R3-25,在同等发酵条件下,生物量达到11、34mg／L,胡萝卜素含量0.767mg／g,胡萝卜素产量为8.70mg／L,比出发菌株提高了1.90倍。该菌株连续10次传代,其产量性状无大变化,遗传性状稳定。     

富硒酵母的分离鉴定及富硒条件的优化

富硒酵母生产发酵食品是补充硒元素的有效方法,以实验室保存的酵母菌为材料,通过选择培养基平板稀释法,分离纯化得 到四株富硒酵母,经形态学和分子生物学鉴定,初步鉴定菌株Z4、Z5、Z7、Z9均为库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）。 通过对比四株菌 的生长曲线及富硒能力,发现Z5菌株生长状况最好,选取接种量、碳源（葡萄糖）和氮源（蛋白胨）添加量作为单一因素,通过单因素 试验和正交试验,探究各影响因素对菌株Z5富硒能力的影响。 结果表明,Z5菌株的最佳富硒发酵条件为接种量10%,葡萄糖2.4%,蛋 白胨1.8%。 在此最佳条件下,菌株Z5生物量为9.63 g/L,总硒含量可达到862 μg/g。