人源性rhG-CSF单链抗体基因的克隆和表达

从构建的噬菌体表面展示文库中，筛选出全新的人源抗重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）特异单链抗体（ScFv）的噬菌体克隆。ScFv被克隆到pCANTAB 5E载体上，以E. coli TG1为宿主，进行噬菌体表面呈现，以rhG-CSF为靶抗原进行免疫亲和富集筛选，经酶联免疫吸附试验（ELISA）鉴定，得到一株高亲和力克隆。DNA序列分析表明，该ScFv基因全长733 bp，其中重链可变区（VH）为366 bp，轻链可变区（VL）为322 bp。抗rhG-CSF的ScFv在E. coli HB2151中以可溶形式分泌表达，产物主要分布于周质中，占周质总蛋白的质量分数为20%～25%，经免疫印迹试验（Western-blot）分析显示该单链抗体黏均分子量为31 kD。     

携带Herceptin与MICA胞外结构域融合基因的重组腺病毒的构建及鉴定

通过构建能表达抗体Herceptin与MICA胞外结构域的融合蛋白的重组腺病毒,为进一步联合NK细胞的治疗研究奠定基础.采用Overlap-PCR的方法获得Herceptin与MICA胞外结构域的融合基因,并将融合基因连接到载体pDC339上.接着再利用酶切及PCR方法鉴定载体及重组病毒基因的正确性,并通过ELISA和Westem Blot检测融合蛋白的表达情况,最后经间接免疫荧光分析(IFA)检测融合蛋白的结合特性.构建的载体酶切后经电泳鉴定证实构建成功,重组病毒DNA的PCR显示病毒携带了Herceptin的轻链基因、重链基因及MICA胞外结构域的基因;ELISA和Western Blot证实重组腺病毒成功地表达出了目的融合蛋白;IFA实验表明融合蛋白能与SK-OV-3细胞表面的Her-2受体特异性地结合.最后成功地构建了能表达具有正常结合特性的抗体Herceptin与MICA胞外结构域的融合蛋白的重组腺病毒,为之后与NK细胞的联合治疗研究奠定基础.     

鼠源抗AFB1噬菌体单链抗体库的构建与鉴定

研究以AFB1-BSA免疫的小鼠脾脏细胞为试验材料,利用RT-PCR技术,克隆了抗AFB1抗体重链和轻链可变区基因VH和VL,利用连接肽（Gly4Ser）3将VH和VL链接成单链抗体基因scFv,通过噬菌体展示载体pCANTAB-5E携带将其电转化E.coli TG1,经氨苄青霉素平板筛选,构建了库容为2.13×10^9 cfu/μg DNA的噬菌体单链抗体库,抗体库的克隆阳性率达到100%,且多样性良好,为高活性抗AFB1单链抗体的筛选提供了材料基础。     

携带Herceptin-MICB融合蛋白基因的腺病毒载体的构建

为了构建携带Herceptin-MICB融合蛋白基因的腺病毒载体,筛选出能表达该融合蛋白的重组腺病毒,检测其表达融合蛋白的情况及抗肿瘤特征.首先,通过PCR将NKG2D的配体MICB的基因片段插入含有全长抗体Herceptin基因的5型腺病毒穿梭载体pDC339-Her中,获得载体pDC339-Her-MICB与腺病毒骨架载体pBHGlox△E1,3Cr重组,然后在293细胞内进行病毒包装得到非增殖型腺病毒Ad-Her-MICB,纯化后测病毒滴度.双抗体夹心ELISA和Western blot检测融合蛋白的表达情况;间接免疫荧光实验(IFA)检测融合蛋白的特异性.酶切后DNA电泳鉴定证实载体构建成功,重组病毒经PCR鉴定携带融合蛋白基因.融合蛋白的表达量为(623.25±38.62)ng/mL;Westhern blot显示:该融合蛋白与商品化的Herceptin抗体轻链重链比较,大小一致,浓度匹配;间接免疫荧光检测(IFA)显示了融合蛋白与HER-2过表达的卵巢癌细胞株SK-OV-3结合的特异性.结果表明:腺病毒Ad-Her-MICB携带Herceptin-NKG2D配体融合蛋白基因能在体外正常表达且与商品化的Herceptin生物学特性相似,为融合蛋白的抗肿瘤治疗奠定基础.     

CDld基因稳定转染Panc-1细胞系的建立

实验采用PCR法获得CD1d基因片段,将其插入慢病毒pReceiver-Lv201载体（带GFP荧光）中获得EX-S0249-LV201重组质粒,经转染试剂EndoFectin-Lenti转染到293T细胞中获得慢病毒LP-S0249-LV201,用包装获得的慢病毒感染胰腺癌Panc-1细胞,在不同时间段用倒置荧光显微镜观察绿色荧光,并用反转录酶聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法验证获得的表达细胞株.实验结果显示经RT-PCR和Western blotting检测证实慢病毒LP-S0249-LV201 转染至Panc-1细胞株后,该细胞株表达CD1d基因和蛋白,成功建立了稳定表达CD1d基因的Panc-1细胞系,为进一步研究CD1d基因在胰腺癌免疫基因治疗中的作用奠定基础.     

小麦热激蛋白基因sHSP16.9植物表达载体构建

以小麦中国春热激蛋白基因sHSP1 6.9为材料,用PCR扩增的方法于目的基因片段5和3上分别添加Xba Ⅰ和Kpn Ⅰ的酶切位点,然后与植物表达载体pCAMBIA Super-1300连接.用Xba Ⅰ和Kpn Ⅰ进行双酶切验证,确定已将热激蛋白基因sHSP16.9连接到植物表达载体上,表达载体pCAMBIA Super-1300-TasHSP16.9构建成功.为验证小麦热激蛋白基因sHSP16.9的功能及转基因植物表达奠定基础.     

藻胆蛋白ApcE缺失突变体的自催化重组研究

采用聚合酶链式反应（PCR）扩增出Anabaena．sp PCC7120别藻蓝蛋白ApcE（1-240）的一系列缺失突变体基因：apcE（14—240）、apcE（25—240）、apcE（63—240）、apcE（85—240）、apcE（121—240）、apcE（133—240）、apcE（187～240），在大肠杆菌中高效表达分别获得相对应的缺失突变体蛋白。对上述脱辅基蛋白与藻蓝胆素（PCB）的体外自催化重组进行了研究。结果表明：在含有4mol／L尿素的磷酸钾缓冲体系中，ApcE（25—240）脱辅基蛋白可与藻蓝胆素体外重组实现共价连接，获得的色素蛋白质具有最大吸收峰（λmax=656rim）和荧光发射峰（λmax=670nm），其余6个缺失突变体蛋白仅能与藻蓝胆素非共价连接，不能发生自催化重组。该结果为进一步研究连接多肽ApcE的结构和功能提供了信息，具有重要意义。     

携带oct4、klf4s、ox2、nanog4种转录因子的腺病毒载体的构建

构建并鉴定携带人oct4、klf4、sox2、nanog4个基因的腺病毒载体,重组出能同时表达这4种转录因子的腺病毒,为进一步诱导多能干细胞的研究提供新方法。使用口蹄疫病毒2A序列将人的oct4、klf4、sox2、nanog4个基因顺序连接,定向克隆至腺病毒载体pDC328上,并在nanog下游插入红色荧光蛋白dsRed2作为报告基因。利用酶切及PCR方法鉴定病毒载体的正确性;荧光显微镜下观察病毒感染HEK 293细胞24 h后红色荧光的表达,检测病毒功能;实时定量PCR检测细胞内4种基因的表达情况。结果表明,酶切后DNA电泳鉴定证实载体构建成功,重组后病毒PCR显示病毒携带oct4、klf4、sox2、nanog基因;荧光显微镜下观测到红色荧光的表达,实时定量PCR检测到细胞内4种基因的表达。本研究成功构建的腺病毒载体,能够介导以上4种转录因子在细胞内的同时表达,为进一步诱导多能干细胞的提供新方法。     

携带ocf 4、klf4、sox 2、,nanog 4种转录因子的腺病毒载体的构建

构建并鉴定携带人oct4、klf4、sox2、nanog 4个基因的腺病毒栽体,重组出能同时表达这4种转录因子的腺病毒.为进一步诱导多能干细胞的研究提供新方法.使用口蹄疫病毒2A序列将人的oct4、、sox2、nanog 4个基因顺序连接,定向克隆至腺病毒载体pDC328上,并在nanog下游插入红色荧光蛋白dsRed2作为报告基因.利用酶切及PCR方法鉴定病毒载体的正确性;荧光显微镜下观察病毒感染HEK 293细胞24 h后红色荧光的表达,检测病毒功能;实时定量PCR检测细胞内4种基因的表达情况.结果表明,酶切后DNA电泳鉴定证实栽体构建成功,重组后病毒PCR显示病毒携带oct4、klf4、sox2、nanog 基因;荧光显微镜下观测到红色荧光的表达,实时定量PCR检测到细胞内4种基因的表达.本研究成功构建的腺病毒载体,能够介导以上4种转录因子在细胞内的同时表达,为进一步诱导多能干细胞的提供新方法.     

昆虫杆状病毒表达egfp载体构建及鉴定

用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ将目的基因片段6His-11R-eGFP从载体pDC316-6His-11R-eGFP上酶切下来,并将该目的基因片段与供体载体pFastBacl连接构建供体质粒pFastBacl-6His-11R-eGFP;将其转化大肠杆菌(Escherichua coli)DH10Bac感受态细胞,经卡那霉素、四环素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBac-6His-11R-eGFP,PCR鉴定得到单一目的基因条带.将该病毒载体转染Sf9细胞,进行病毒包装,在倒置荧光显微镜下观察蛋白表达,并以荧光定量PCR方法测定病毒滴度.     

企业人力资源管理信息系统的设计与实现

针对现阶段企业经营管理机制发生了转变但原有人事管理落后的情况 ,应企业需求开发此人力资源管理信息系统 ,实现企业人力资源规划、开发、利用与管理 ,为企业决策提供一定的依据 ,提高企业的竞争力 .     

结合PCA和ICA的脑磁信号消噪研究

基于二阶统计特性的主分量分解(PCA)和基于高阶统计特性的独立成分分析(ICA)是盲源分离信号处理中两种最为典型的方法．针对多通道脑磁信号的消噪问题,提出一种基于PCA与ICA相结合的信号消噪新算法．首先通过对脑磁信号进行主分量分解来降低信号维数,去掉其中包含的冗余成分,使计算时间缩短到原来的10％;进而利用自适应最大熵独立成分分析算法对降维后的数据进行二次分解,提取出脑磁信号中含有的干扰分量,使信噪比从10dB提高到80dB,达到对信号进行消噪的目的．     

Synthesis and Characterization of Chitosan-based Biomateriais Modified with Different Active Groups and Their Relationship with Cytotoxicity

The cytotoxicity profile of three chitosan derivatives with different affinity to water was evaluated in vitro.The derivatives selected were carboxymethylated-chitosan(CMCH),linoleic acid modified- chitosan(LACH)and deoxycholic acid modified-chitosan(DACH),respectively,and the results of FTIR and NMR confirmed the successful modification.Cytotoxicity of these polymers was investigated via the red blood cell lysis assay and the MTT assay.The red blood cell lysis test showed that CH elicited a certain level of red blood cell toxicity,while CMCH,LACH and DACH all displayed low membrane damaging effects, with the hemolysis rates of 2.385%,1.560% and 4.404%,respectively,which comes well within permissible limit(5%).The MTT assay revealed that CH exhibited significant inhibitory effect on fibroblast proliferation at higher concentration,while its three derivatives showed no cytotoxicity.CMCH had stimulatory effects on fetal mouse fibroblast proliferation.Differences in cytotoxicity of CH and its derivatives may result from the specific chemical modifications leading to the alteration of molecular charge density and type of the cationic functionalities,structure and sequence,and conformational flexibility.     

Synthesis and Characterization of Chitosan-based Biomaterials Modified with Different Active Groups and Their Relationship with Cytotoxieity

The cytotoxicity profile of three chitosan derivatives with different affinity to water was evaluated in vitro. The derivatives selected were carboxymethylated-chitosan （CMCH）, linoleic acid modifiedchitosan （LACH） and deoxycholic acid modified-chitosan （DACH）, respectively, and the results of FTIR and NMR confirmed the successful modification. Cytotoxicity of these polymers was investigated via the red blood cell lysis assay and the MTT assay. The red blood cell lysis test showed that CH elicited a certain level of red blood cell toxicity, while CMCH, LACH and DACH all displayed low membrane damaging effects, with the hemolysis rates of 2.385%, 1.560% and 4.404%, respectively, which comes well within permissible limit （5%）. The MTT assay revealed that CH exhibited significant inhibitory effect on fibroblast proliferation at higher concentration, while its three derivatives showed no cytotoxicity. CMCH had stimulatory effects on fetal mouse fibroblast proliferation. Differences in cytotoxicity of CH and its derivatives may result from the specific chemical modifications leading to the alteration of molecular charge density and type of the cationic functionalities, structure and sequence, and conformational flexibility.     

青岛海滨大气PM_(2.5)与PM_(10)观测

2007年5～10月在黄海海滨青岛的观测表明大气PM_(2.5)和PM_(10)质量浓度呈同步变化,且变化范围较大.海陆风转换对海滨空气质量有重要影响:海风输送时空气较洁净,而陆风输送通常导致空气质量变差.PM_(2.5)、PM_(10)质量浓度与相对湿度(RH%)呈显著反相关,可能与RH%较高时多为海风输送有关.海风输送条件下较高的RH%和细粒子吸湿增长可能导致了此时PM_(2.5)对PM_(10)质量载荷的贡献率(64.7%)小于在海风/陆风混合输送和陆风输送条件下的贡献率(70.9%和77.5%).PM_(2.5)占PM_(10)质量载荷的72.3%,表明细粒子贡献显著.整个观测期PM_(10)未"达标"(PM_(10) 24 h均值 < 150 μg m~(-3),空气质量"良")的观测日仅占14 7%;但PM_(2.5)未达到美国EPA标准(PM_(2.5) 24 h均值 < 35 μg m~(-3)的观测日约为68.6%,表明大气细颗粒物PM_(2.5)的达标任务尚很艰巨.     

长沙市夏秋季VOCs特征及在臭氧生成中的作用研究

为了解我国中部地区VOCs污染特征及对臭氧(O₃)生成的影响,于2021年5—10月在湖南省长沙市主城区开展了VOCs在线监测,共计监测116种组分.测量结果显示：观测期间总VOCs平均体积分数为(23.09±9.97)×10^-9,VOCs月均浓度呈“U”型变化,7月最低,10月最高,而VOCs日变化呈典型双峰型,受人为源活动影响显著;长沙市VOCs化学组成以含氧挥发性有机物(OVOCs)为主,其次是烷烃和卤代烃,而对臭氧生成潜势(OFP)有较大贡献的主要是OVOCs和芳香烃,二者合计占比达到68.3%,其中丙醛、乙醛、间/对-二甲苯、乙烯和甲苯是关键活性物种.OBM(基于观测的模型)模拟结果显示：长沙市5月、8月和9月臭氧生成属于协同控制区,6—7月属于VOCs控制区,而10月处于NO_x控制区.人为源VOCs中削减高碳醛类、烯烃类、烷烃类对臭氧防控最为有效.     

合作、礼貌原则与口译

旨在从语用学角度对口译实践进行研究。Grice的合作原则和Leech的礼貌原则是语用学中的两个重要理论,共同对口译起指导作用。礼貌原则是对合作原则的补充。一般说来,译员应该在口译过程中遵循合作原则的四条准则,但必要时可以为遵守礼貌原则而违反合作原则。将这两个原则应用于口译实践,能够有效促进交际双方的成功合作。     

三甲基均三嗪的合成研究及八极分子三苯乙烯基均三嗪的制备

首先以乙腈、乙醇、无水氯化氢为起始原料合成乙酰亚胺乙酯，然后以冰乙酸为催化剂进行乙酰亚胺乙酯的三聚反应得到三甲基均三嗪，将三甲基三嗪与苯甲醛在浓硫酸中进行羟醛缩合反应，则合成了一种新的八极分子三苯乙烯基均三嗪(TSTA)。文中对其合成过程中的一些重要的反应条件的影响进行了研究。     

基于先进控制技术的DCS的设计与开发

本文采用先进控制技术是未经解耦的多变量预测控制的DMC算法，利用C语言开发出DMC控制程序。该控制系统对于实际生产中多变量、耦合的以及无法建立准确数学模型的复杂控制系统，和采用常规的PID控制方案，无法达到良好效果的控制具有良好的稳定性、鲁棒性和抗干扰性。