重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂制备工艺的优化

目的优化重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂的制备工艺。方法以乳清蛋白为悬浮基质与重组干酪乳杆菌混匀,进行喷雾干燥,通过单因素试验确定乳清蛋白的添加量(10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%)及进风温度(60、80、100、120、140、160、180℃)、给气量(65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%)和进料速度(2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 mL/min)等喷雾干燥工艺参数;以活菌数和存活率为指标,通过正交试验进一步优化工艺参数。同时检测最适工艺制备的重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂的质量指标和贮藏稳定性。结果最适乳清蛋白添加量为20%,最适工艺参数:进风温度为120℃,给气量为75%,进料速度为10 mL/min。喷雾干燥制剂相关的质量指标均符合要求,在4℃真空条件下贮藏稳定性最好。结论优化了重组干酪乳杆菌喷雾干燥制剂的制备工艺,为其产业化生产奠定了基础。     

干酪乳杆菌发酵罗非鱼下脚料制备L-乳酸研究

本实验以罗非鱼(Oreochromis spp)下脚料的水抽提液为原料,研究干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)在不同氮源中的生长情况和产L-乳酸量,探讨罗非鱼水抽提液在干酪乳杆菌发酵L-乳酸中代替蛋白胨作为氮源的可能性。结果表明:干酪乳杆菌在水抽提液中的生长状况与在蛋白胨发酵液中相似,在42℃发酵14 h后,以水抽提液为氮源的发酵液中L-乳酸净产量为925.8 mg/100g,仅比在蛋白胨氮源的少12 mg/100g。     

重组干酪乳杆菌贮存期内质粒稳定性及活菌数的检测

目的检测产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)基因重组干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,L.casei)贮存过程中质粒的稳定性及活菌数的变化。方法将ETEC K88重组干酪乳杆菌(pLA-K88/L.casei)接种于MRS培养基,转种WPC培养基,收集菌液,置4、15、37℃贮存。通过抗生素MRS(+)和MRS(-)平板计数菌落数的方法及PCR法检测重组质粒在4℃贮存1、15、30、60、90和120 d的稳定性;Dot ELISA法检测菌液外源蛋白免疫学活性的变化;平板计数法检测4、15、37℃贮存1、2、3、7、15、30、60、90、120、210和240 d的活菌数。结果在4℃贮存120 d内,重组质粒稳定性良好,目的基因片段无缺失,外源蛋白活性稳定,乳清蛋白对工程菌的稳定性及外源蛋白的免疫原性均无影响;工程菌在4℃贮存效果最好,存活时间最长,第240 d活菌数仍保持在9×106cfu/ml以上,15和37℃贮存期仅为90和15 d。结论 ETEC基因重组干酪乳杆菌于4℃贮存条件下,质粒及外源基因表达稳定。     

灵芝发酵液的成分检测及美白与抗衰老功效评价

为开发灵芝发酵液在化妆品领域的应用,使用葡萄酒酵母发酵灵芝并测定发酵液中所含有的多糖、多酚、黄酮和多肽含量。通过DPPH自由基清除实验和羟自由基清除实验对灵芝发酵液的抗氧化能力进行检测,并测定其对成纤维细胞存活率的影响以评估其可能在抗衰老方面发挥的作用。最后通过体外酪氨酸酶实验和小鼠黑色素瘤细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制实验对灵芝发酵液的美白功效进行评价。结果表明,灵芝发酵液富含多糖,质量浓度为9.910 g/L,多酚、黄酮和多肽的质量浓度分别为0.054,0.045和2.931 g/L。体积分数分别为25.89%和42.18%的灵芝发酵液可清除50%的DPPH自由基和羟自由基;体积分数为0.05%~0.2%范围内的灵芝发酵液可有效促进成纤维细胞增殖;灵芝发酵液对酪氨酸酶活性抑制率高达73.22%,其通过抑制酪氨酸酶活性起到抑制黑色素合成的作用。因此灵芝发酵液具有一定的抗衰老和美白功效。     

透性化干酪乳杆菌细胞转化苯丙酮酸合成苯乳酸

苯乳酸是由乳酸菌属等微生物代谢合成的一种新型食品防腐剂。今利用透性化干酪乳杆菌(Lactobacillus casei B3)细胞转化苯丙酮酸,合成得到了苯乳酸,并通过单因素实验和正交实验,确定了适宜的转化条件,即:干酪乳杆菌在?20℃冷冻6 h后用于转化,苯丙酮酸浓度为8 g?L?1,葡萄糖浓度为14 g?L?1,菌浓度为100 g?L?1,p H值为8.0,温度为35℃,转速为75 r?min?1,转化时间为4 h;优化条件下苯乳酸的收率达65.5%,转化液中苯乳酸浓度达到了5.3 g?L?1。     

德氏乳杆菌发酵生产乳酸工艺条件优化

本实验在选育高产菌株及优化培养基的基础上,通过探索德氏乳杆菌的发酵工艺提高其乳酸产量。用初始菌株在基础发酵培养基上进行乳酸（DL-乳酸）发酵,其中L-乳酸的产量为18.5 g/L,对葡萄糖的转化率为50.27%。对原始菌株进行了激光诱变,选育出一株高产菌株DBLB28,对其培养基进行了进一步优化。先用正交实验设计法选出了主要的影响因子,然后再利用响应面法对所选因子进行优化,最优的条件为：葡萄糖浓度68.6 g/L;牛肉膏浓度22.4 g/L;蛋白胨浓度3.2 g/L,从回归方程预计乳酸的最大产量为29.0 g/L。在以上优化条件下进行发酵实验,测得乳酸产量为29.4 g/L,与预计值吻合较好。     

反相高效液相色谱法分离测定生孢乳杆菌发酵液中的乳酸

采用反相高效液相色谱法测定了生孢乳杆菌发酵液中的乳酸.在EclipseXDB-C8,(4.6 mm i.d.×150 mm,5 μm)色谱柱上,以0.005 mol/L硫酸(pH值2.5)溶液作流动相,流速为1 mL/min,以示差折光检测器检测信号,峰面积(Y)与乳酸的质量浓度(X,g/L)的线性相关方程为Y=292.08x+4.6967,线性相关系数r为0.999 9,线性范围为0.75～9.0g/L,检测限为0.2μg(3倍信噪比).结果表明,实验方法简便、快速、可靠,精密度为0.22%(n=5),回收率99%以上.     

广藿香精油抗炎祛痘功效研究

采用气相色谱-质谱联用技术对广藿香精油成分进行分析。通过细胞毒性实验确定广藿香精油对人急性单核细胞(THP-1)的安全质量浓度。利用痤疮丙酸杆菌(P.acnes)刺激THP-1建立的特异性痤疮炎症细胞模型考察广藿香精油对炎症因子IL-1β的影响。通过荧光实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)初步探讨广藿香精油抗炎祛痘的作用机制。研究结果表明:广藿香精油在最大安全质量浓度12.5 mg/L时,对炎症细胞模型中P.acnes活性影响较小,对IL-1β的分泌具有明显的抑制作用(抑制率66.54%),可显著降低细胞内Toll样受体2(TLR2)mRNA的转录(抑制率73.73%),从而起到抑制炎症信号转导和继发性炎症介质生成的作用。     

桦树汁发酵前后成分分析及护肤功效评价

桦树（Betula Platyphylla）是树种为桦木属植物品种的俗名,为桦木科桦木属植物中最为常见的一种,我国桦树林占地面积近500万公顷,每公顷每年可产桦树汁约20～60吨。目前针对我国桦树汁资源开发利用的研究不断涌现,已应用在饮用品以及医药领域,也逐渐出现在美容护肤领域内,但关于桦树汁的护肤功效及作用机制研究目前极少。本课题以产自黑龙江伊春市的桦树汁及其发酵液作为研究对象,对桦树汁及发酵液进行理化特征及营养成分分析,评价了其安全性、眼刺激性,并对其自由基清除能力、非酶糖基化抑制能力进行检测。结果表明,桦树汁及发酵液中具有丰富的营养物质,且对人体皮肤安全、无眼刺激性,具有一定的抗氧化功效、较好的抗糖化功效,是一种具有开发价值的化妆品原料产品。     

戊糖乳杆菌发酵废甘油生产乳酸的条件优化在

对废甘油生产乳酸的发酵条件进行优化。得到乳酸发酵最佳条件：废甘油60 g/L,酵母粉2.8 g/L,蛋白胨4 g/L,硫酸铵5.82 g/L,乙酸钠6 g/L,磷酸氢二钾1.5 g/L,pH中和剂为氨水,控制pH值6.0,发酵温度34°C。在此条件下发酵70 h,乳酸产量达到51.43 g/L,不仅比优化前提高了约2%,而且减少了50%多的培养基费用,较大程度地减低培养基成本,为实现乳酸发酵产业化奠定基础。这是首次报道戊糖乳杆菌发酵废甘油生产乳酸。     

植物乳杆菌XL-02发酵产γ-氨基丁酸条件的优化

为提高γ-氨基丁酸(GABA)产量,对植物乳杆菌XL-02进行发酵条件的优化.首先,采用单因素方法对底物添加量、发酵温度、发酵时间、接种量和pH值等因素进行考察,在此基础上进行4因素3水平的响应面实验优化.结果表明:在L谷氨酸钠浓度为2.0 g/L,发酵温度30℃,接种量11％和pH值6.0的条件下,发酵60 h,γ-...     

银耳多糖的提取及其美容功效研究

利用热水浸提法从银耳干品中提取银耳多糖,通过四因素三水平正交试验得到了较佳提取条件:料水质量比1∶50、pH=9、90℃提取6 h。通过结晶紫法、体内测水合率和水分散失率法以及体外测水分散失率法证明银耳多糖具有较好的保湿能力和一定的抗氧化能力,可用于化妆品中。     

竹叶发酵液的美白、增强皮肤屏障和抗炎护肤功效研究

为研究竹叶发酵液(FBL)的护肤功效,选取角质形成细胞(HaCaT)和黑色素瘤细胞(B16)作为细胞模型,利用细胞计数试剂(CCK-8)评估竹叶发酵液的细胞毒性;并通过检测黑色素含量、十二烷基硫酸钠(SLS)损伤模型下丝聚蛋白和炎症因子的基因表达,分别考察FBL的美白、增强皮肤屏障和抗炎的护肤功效。结果表明,FBL对上述细胞均没有毒性,同时能够显著降低B16细胞内黑色素的含量(显著性p<0.001),并能促进丝聚蛋白的基因表达(p<0.001)、抑制肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的基因表达(p<0.001,p<0.01)。因此,FBL具有潜在的护肤功效。     

人参发酵液的活性物质分析及其功效研究

为开发人参发酵液在化妆品领域的应用,使用食用级黄酒酵母发酵人参并测定发酵液中多糖、蛋白质和人参皂苷的含量。通过DPPH自由基清除实验和羟自由基清除实验测定其抗氧化能力,并将其作用于成纤维细胞,采用MTT细胞毒性试验评估其对成纤维细胞的增殖作用。用荧光定量PCR检测12种炎症相关的基因在人参发酵液作用的永生化表皮细胞中的表达量,评估人参发酵液的抗炎症效果。结果表明,人参发酵液富含多糖,质量浓度为6.982 g/L,蛋白质和人参皂苷的质量浓度分别为1.039和0.045 g/L。体积分数为10.49%的人参发酵液可清除50%的DPPH自由基,19.62%的人参发酵液可清除50%的羟自由基;体积分数为0.01%的人参发酵液培养的成纤维细胞存活率甚至超过100%,可有效促进细胞增殖;人参发酵液能引发炎症反应,并在短时间内激活并募集白细胞到炎症部位发挥免疫功能。     

黄花菜发酵液的化妆品功效评价

使用植物乳杆菌和酿酒酵母菌发酵制得了两种黄花菜发酵液，考察了样品对HaCaT细胞存活率的影响，分析了其抗炎性功效、抗氧化功效、美白功效、安全性功效。结果表明，与水提液（空白对照）相比，两种发酵液的抗氧化能力更强。在细胞水平上，两种黄花菜发酵液均表现出对UVB诱导损伤细胞的修复作用，相对于经过UVB照射后的细胞模型组，细胞Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）、过氧化氢酶（CAT）活力均提高。两种黄花菜发酵液的酪氨酸酶活性抑制率远高于水提液，表现出良好的美白效果。通过HaCaT细胞中炎性因子IL-6、TNF-α和COX-2表达量可以看出，样品组中炎性因子的表达量显著低于模型组，说明黄花菜发酵液的抗炎性能力大于水提液。通过鸡胚绒毛尿囊膜实验（HET-CAM）可以得出，样品作用其前后均无出血现象，表明黄花菜发酵液无刺激性。     

发酵液中克拉维酸萃取条件的优化

目的优化发酵液中克拉维酸萃取条件。方法通过改变温度、p H、有机溶剂和油水比等因素,采用中心组合设计对对克拉维酸萃取条件进行优化。结果优化得到了丁醇和乙酸乙酯为萃取剂(1∶4)、油水比3.76、p H=2.0、8℃下分离纯化克拉维酸,萃取率为90.49%,溶胀率4.13%的结果。结论优化后的方法可以得到较高的萃取率和较低的溶胀率。     

产L-乳酸的鼠李糖乳杆菌发酵培养基的优化

采用Plackett-Burman试验设计优化了鼠李糖乳杆菌产L-乳酸的发酵培养基,筛选出对L-乳酸产量有显著性影响的因素,即葡萄糖、柠檬酸氢二铵、乙酸钠、酵母膏,对这四个显著性因素,用中心组合试验优化得到最佳发酵培养基。结果表明:当培养基组成为:葡萄糖138.8 g/L、柠檬酸氢二铵2.19 g/L、乙酸钠6 g/L、酵母膏为7.56 g/L、蛋白胨0.50 g/L时,L-乳酸的产量为104.40 g/L。     

三皮素对抗痤疮的功效研究

以倒捻子果皮﹑厚朴树皮﹑石榴果皮3种植物皮提取物组成的三皮素溶液为研究对象,通过多种方法对其抗脂质过氧化﹑控油﹑抑菌﹑抗炎的功效进行研究。结果显示,三皮素在质量分数为1%时,对脂质过氧化有显著的抑制效果。质量分数为0.1%的三皮素处理皮脂腺细胞24 h后,可显著下调胰岛素样受体(IGF1R)﹑过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)的mRNA表达水平来降低细胞内脂质合成。三皮素对痤疮丙酸杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为0.03%。在痤疮丙酸杆菌诱导的巨噬细胞炎症模型上,三皮素能剂量依赖性地抑制白介素6 (IL6)﹑前列腺素E2 (PGE2)和一氧化氮(NO)的表达。三皮素作为一种天然来源的活性原料,可针对痤疮发病机制中的各大因素来发挥其对抗痤疮的作用。     

无患子水提液的微生物发酵纯化及无患子乳酸杆菌发酵液抗痤疮功效

无患子（Sapindus mukorossi Gaertn）提取液常作为一种天然活性原料添加到洗护产品中,为推进无患子提取液在日化行业的应用,采用微生物发酵法对无患子水提液纯化,以耗糖量和皂苷纯度为指标,筛选出植物乳酸杆菌（Lactobacillus plantarum）作为发酵菌株,制得了无患子乳酸杆菌发酵液（SF）。从皮脂、炎症和致病菌的过度繁殖3个方面,研究了SF的抗痤疮功效。结果显示,质量浓度为20 μg/mL的SF对SZ95细胞脂质合成率降低了26.4%;对脂多糖（LPS）诱导的RAW 264.7细胞的一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和活性氧（ROS） 分别降低了52.3%、57.5%、56.2%和35.9% ;采用二倍稀释法测定了SF对痤疮丙酸杆菌、糠秕马拉色菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度（MIC）别为3.125、12.5和6.25 g/L;人体功效评价结果显示,受试者面部痤疮情况显著改善。     

植物乳杆菌凝集素的纯化及其体外抗HIV活性

目的纯化植物乳杆菌(L.plantarum PCL)凝集素,并检测其体外抗HIV活性。方法采用Sephadex G-25凝胶脱盐层析和HITrap Q Sepharose XL离子交换层析纯化L.plantarum PCL凝集素;测定纯化产物的兔红细胞凝集素活性、纯度及荧光光谱;采用MTT法检测其对C8166淋巴细胞的毒性作用,以光镜检查其对HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的抑制作用,并计算TI值。结果纯化的L.plantarum PCL凝集素经尿素-SDS-PAGE,可见相对分子质量约85000的单一条带;荧光光谱可见在380nm附近有一个发射强度较大的凝集素特征荧光发射峰;L.plantarum PCL凝集素对C8166细胞的IC50为2.239μg/ml,对HIV-1ⅢB诱导C8166细胞合胞体形成的EC50为0.079μg/ml,TI值为28.34。结论已成功纯化了L.plantarum PCL凝集素,并具有抗HIV活性。