CpG ODN2006对乙型肝炎疫苗免疫BALB/c小鼠抗体产生的影响

目的探讨合成含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpGODN2006)对乙型肝炎疫苗增强小鼠特异性抗体产生的效应。方法采用BALB/c小鼠,经后腿胫骨前肌注免疫2次,ELISA法检测血清中抗HBsIgG效价。结果疫苗+CpG组较疫苗组和空白对照组的抗HBsIgG效价明显增高,且维持时间长。结论CpGODN2006对小鼠抗HBsIgG的产生具有明显的增强作用。     

含CpG基序寡核苷酸对rHBsAg免疫小鼠脾脏组织及细胞增殖的影响

目的探讨合成含CpG基序的寡核苷酸(CpGODN)与重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)联合免疫对小鼠脾脏淋巴组织及细胞增殖的影响。方法经后腿胫骨前肌初次免疫BALB/c小鼠,2周后加强免疫1次;常规石蜡切片,H-E染色,观察脾脏组织学改变;3H-TdR掺入法检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果抗原+CpG组脾脏可见明显的组织学改变。加CpG与不加CpG的2组比较,淋巴细胞增殖反应显著增强。结论CpGODN能够有效刺激小鼠脾脏组织T细胞区淋巴细胞增生,生发中心明显增大,而且能够显著增强淋巴细胞增殖反应。     

CpG对狂犬病疫苗免疫效果的影响

目的　研究寡脱氧核苷酸 (简称CpG)对狂犬病疫苗免疫效果的影响。方法　用狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3 、狂犬病疫苗原液 +CpG、狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3 +CpG 3种配伍方式分别免疫地鼠 ,同时用狂犬病疫苗原液作对照 ;免疫途径分为腹腔、皮下和肌肉 ,全程免疫结束后 2周采血 ,进行小白鼠中和试验。同时用NIH法对不同配伍的疫苗进行效力检测。结果　 3种免疫途径以皮下和肌肉免疫效果较腹腔为好 ;3种配伍方式中以狂犬病疫苗原液 +Al(OH) 3+CpG的免疫效果最好 ;狂犬病疫苗原液 +CpG较狂犬病疫苗原液对照免疫效果好。结论　CpG对狂犬病疫苗免疫效果有明显的增强作用     

CpG ODN佐剂序列IMB-AC5联合乙型肝炎疫苗的免疫原性分析

目的评价Cp G ODN佐剂序列IMB-AC5联合乙型肝炎疫苗的免疫原性,以评估IMB-AC5佐剂的应用前景。方法利用市售的单铝佐剂乙型肝炎疫苗,根据相同配比加入3种Cp G ODN(IMB-AC5及Coley 7909和Dynavax 1018),作为实验组(V-AC5、V-7909和V-1018),并以乙型肝炎疫苗为对照组,分别免疫BALB/c小鼠,于免疫后2、4、6、8周,经尾静脉采血,第10周处死小鼠采集全血,分离血清,采用乙肝表面抗体试剂盒检测anti-HBs抗体水平,ELISA法检测Ig G1/2a亚型抗体比例;ELISPOT法检测小鼠脾细胞IFNγ表达水平。结果免疫后0~4周内,各组小鼠血清抗体水平均无明显变化,第6周开始呈明显上升趋势,至第8周后趋于平缓;各实验组抗体水平均明显高于对照组(P0.05),V-AC5显示出与V-7909同样良好的体液免疫效果,略优于V-1018。免疫后各实验组小鼠血清中Ig G2a/Ig G1比例明显高于对照组。各实验组小鼠脾细胞斑点数明显高于对照组(P0.05);V-AC5斑点数介于其他两个实验组之间。结论 IMB-AC5佐剂能显著活化B细胞产生抗体并具有刺激细胞免疫的效果,可增强疫苗的免疫原性。     

CpG寡聚脱氧核苷酸佐剂对狂犬病疫苗免疫效果的影响

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)对狂犬病疫苗(rabies vaccine,RV)免疫效果的影响。方法以市售狂犬病疫苗为抗原,分别以低、中、高剂量的CpG ODN(1.25、5、20μg/剂)及其与氢氧化铝[(Al(OH)_3]联合的复合物作为疫苗佐剂,按Essen程序经腿部肌肉免疫BALB/c小鼠。免疫前2 d及首次免疫后分别于第6、8、10、14、35和42天采血,分离血清,通过快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测血清中抗狂犬病病毒中和抗体效价;并经ELISPOT法分析首次免疫第6和14天小鼠脾细胞分泌IFNγ的情况。结果低、中剂量的CpG ODN及其与Al(OH)_3联合使用均可使小鼠在首次免疫后第8天产生具有保护水平的中和抗体,第10天阳转率均达100%;在首次免疫后第35及42天,小鼠产生抗狂犬病病毒中和抗体水平均明显升高(P0.05);在首次免疫后第6及14天,低、中剂量的CpG ODN可明显提高小鼠脾细胞的IFNγ分泌水平(P0.05)。结论 CpG ODN对RV具有免疫增效作用,可能成为一种新型的RV佐剂。     

乙型肝炎疫苗佐剂的研究进展

目前使用的乙型肝炎疫苗均为重组乙肝表面抗原(HBsAg)疫苗,疫苗中需添加免疫佐剂才能诱导机体产生有效的免疫应答。铝盐佐剂可显著增强HBsAg的体液免疫效果,但不能很好地诱导细胞免疫应答。研究发现,除铝佐剂之外,仍有多种物质具有免疫佐剂效应。本文就免疫刺激性佐剂、可生物降解的颗粒性佐剂、微生物来源的佐剂、植物来源的佐剂及其他类型的佐剂用于乙型肝炎疫苗的效果作一综述。     

氢氧化铝佐剂对重组乙型肝炎疫苗诱导的免疫相关细胞因子的影响

目的分析氢氧化铝佐剂对乙型肝炎表面抗原、重组乙型肝炎疫苗诱导的早期固有免疫反应和加强免疫后获得性免疫反应的影响。方法单针免疫,分为4组,每组15只:经BALB/c小鼠背部皮下注射重组乙型肝炎抗原(20μg/ml)、重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母,10μg/0.5 ml)、氢氧化铝佐剂(0.5 mg/ml),100μl/只,同时设生理盐水对照组,于免疫后3、24、48、96、168 h,收集处理外周全血及血清。加强免疫,分为2组,每组9只:相同方法免疫疫苗及抗原,1μg/(100μl·只),于初免后第14天,按照相同剂量加强免疫1次,于加强免疫后24、48、168 h,采集外周血分离血清。使用Luminex方法测定全血中相关因子的m RNA表达及血清中蛋白类细胞因子的分泌水平。结果单针免疫后24 h,3个免疫组多种细胞因子m RNA表达达到高峰,其中IRF7在铝佐剂和乙肝疫苗组中的表达显著高于乙肝抗原组(P0.05)。加强免疫后,乙肝疫苗组IL-5、IL-6和IL-12p70在24 h时分泌水平最高,之后逐渐下降;CXCL10、IFNγ和MIP-1α则随时间持续升高;乙肝抗原组中细胞因子分泌量及持续时间均低于乙肝疫苗组。结论氢氧化铝佐剂可单独或协同抗原,共同增强乙肝疫苗诱导的早期固有免疫反应,加强免疫后,铝佐剂促进多种细胞因子的分泌。     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠NK细胞表面分子表达及其活性的影响

目的探讨合成的含CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)与重组乙型肝炎病毒表面抗原(rHBsAg)联合免疫小鼠对NK细胞表面标志NK1.1表达情况及其细胞毒活性的影响。方法采用C57BL/6小鼠,经后腿胫骨前肌免疫2次,FACS检测脾细胞NK1.1表面分子的表达,生物活性法测定脾脏NK细胞的细胞毒活性。结果各实验组间NK细胞表面标志NK1.1的表达差异无显著意义;加CpG ODN各组与相应未加CpG ODN组比较对靶细胞的杀伤活性显著增强,且各组与对照组比较杀伤活性差异均具有显著意义。结论CpG ODN对免疫小鼠NK细胞表面分子NK1.1的表达无明显影响,而对其细胞毒活性具有明显的增强作用,显示CpG ODN具有潜在的免疫佐剂效应。     

不同浓度配比的CpG ODN和Al(OH)_3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性

目的比较不同浓度配比的CpG ODN和Al(OH)3佐剂乙型肝炎疫苗的免疫原性。方法按乙肝表面抗原浓度为20μg/ml,分别加入3个浓度的Al(OH)3(300、400、500μg/ml)和CpG ODN(125、250、500μg/ml)佐剂,按不同配比制备9组不同佐剂浓度的疫苗样品,以不加CpG ODN佐剂的疫苗作为对照。将各组疫苗样品分别按1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256共5个稀释度稀释后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,第5周检测血清中抗-HBs水平,计算抗体阳转率及半数有效量(ED50);将各组疫苗样品分别于第0和28天经左前胫肌肉免疫BALB/c小鼠,分别于第1次免疫后第2、4、6、8、10周检测体液免疫应答水平,第5周检测细胞免疫应答水平。结果不同浓度CpG ODN和Al(OH)3的9组疫苗样品免疫小鼠后,ED50均小于0.2,对照组疫苗的ED50为0.235。不同浓度CpG ODN和Al(OH)3的9组疫苗样品小鼠血清抗体滴度均高于对照组,且抗体产生时间略提前;Al(OH)3浓度为400和500μg/ml时,疫苗诱导小鼠产生的抗体滴度与CpG ODN佐剂浓度呈正相关。对照组诱导产生的IFNγ水平均较其他疫苗组低;随着A1(OH)3浓度的升高,同一CpG ODN浓度的疫苗样品诱导IFNγ的水平逐渐下降;相同A1(OH)3浓度下,低浓度CpG ODN组斑点形成细胞数(spot-forming cell,SFC)均值较高,而高浓度组SFC均值较低。结论 A1(OH)3和CpG ODN作为双佐剂系统协同乙型肝炎疫苗,不仅能增强体液免疫应答,还能诱导IFNγ的表达,激活Th1细胞免疫应答,比传统A1(OH)3单佐剂乙型肝炎疫苗更具优势,其中CpG ODN和Al(OH)3浓度均为500μg/ml的疫苗制剂免疫原性最佳。     

大肠杆菌DNA片段对HBsAg的免疫刺激作用

目的研究大肠杆菌DNA片段对HBsAg的免疫刺激作用。方法将大肠杆菌DNA片段,通过PCR补齐、加尾后,连于pGEMT载体,再进行PCR扩增后得到100～250bp的dsDNA片段,将扩增出的片段(100μg)与HBsAg混合免疫ICR小鼠。于免后8周检测其抗体水平,选择抗体水平最高的组进行重复实验,对其中最高的一组测序,并分析其序列特征。结果在235个DNA片段中,有的片段免疫刺激作用显著高于铝佐剂和CpGODN1826对照组。该DNA片段除含有1个符合免疫刺激模式的基序外,其余12个CpG二核苷酸均为非回文结构。结论大肠杆菌DNA中含CpGODN的片段对HBsAg具有免疫刺激作用。     

不同硫代修饰CpG ODN佐剂活性的比较

目的评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-Blue^TM hTLR9细胞上的活性。方法将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性对照(全硫代修饰的CpG7909)按照相同配比分别与rHBsAg混合,使CpG ODN和rHBsAg终浓度均为20μg/mL,同时设等剂量抗原对照组(rHBsAg)及空白对照组(生理盐水)。分别肌肉免疫BALB/c小鼠,每只100μL,于免疫后1、2、4周摘眼球采血后处死小鼠,分离血清,应用化学发光微粒子免疫分析技术检测乙型肝炎病毒表面抗体(antibody to hepatitis B virus surface antigen,Anti-HBs)水平;取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNCs),应用ELISPOT技术检测抗原特异性IFNγ、IL-2的分泌水平。体外应用HEK-Blue^TM hTLR9细胞,检测4种CpG ...     

乙肝病毒DNA疫苗诱导小鼠体液免疫应答

目的 通过ＤＮＡ疫苗诱生乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）特异性体液免疫应答。方法 将编码乙肝 病毒表面抗原的真核表达质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,并分别于第１ｗ、第３ｗ后加强免疫１次,同时设对照组注射质粒 ｐｃＤＮＡ３．１。第２次加强免疫３ｄ后采血检测血清中 ＨＢｓＡｇ和 ＨＢｓＡｂ。结果 实验组２ｗ时检测到ＨＢｓＡｂ,２个月后达 到高峰。对照组未检测到 ＨＢｓＡｂ。实验组和对照组始终均未检测到 ＨＢｓＡｇ。结论 乙肝病毒 ＤＮＡ疫苗能引起小 鼠特异性体液免疫应答。     

成人乙型肝炎疫苗多次免疫无应答者再接种甲乙型肝炎联合疫苗的免疫效果

目的探讨成人乙型肝炎疫苗免疫对策。方法对多次免疫后抗-HBs仍为阴性的228名研究对象接种甲乙型肝炎联合疫苗,按0、1、6个月20μg×3免疫程序进行免疫,于210d抽血,采用放射免疫法进行抗-HBs检测。结果228名乙型肝炎疫苗多次免疫无应答者,接种甲乙型肝炎联合疫苗后,抗-HBs阳性172名,阳转率75.44%,抗体几何平均滴度(GMT)为197.20m IU/ml。结论对成人乙型肝炎疫苗多次免疫无应答者,增加接种剂量或接种甲乙型肝炎联合疫苗,可提高抗-HBs阳转率。     

含IL-2基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫效果

目的构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载体多克隆位点处,再将乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)基因和IL-2基因分别连接在IRES基因的两侧,构建出乙肝病毒DNA疫苗pHII。将pHII转染COS-7细胞,进行瞬时表达。大量提取质粒后,按0、2、4周程序免疫BALB/c小鼠,以pVAX1质粒为阴性对照,pVAX/HBsAg质粒为阳性对照。第1针免疫1周后开始眼眶采血,检测血清中HBsAg和HBsAb含量。第1针免疫13周后处死小鼠,用流式细胞仪检测其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量。结果在转染pHII质粒的COS-7细胞上清液中检测到HBsAg和IL-2的表达。实验组和阳性对照组小鼠分别于第1针免疫2、4周后,在血清中检测出HBsAb,但阴性对照组未测出。以上3组均未检测出HBsAg。实验组与阳性对照组相比,产生抗体的时间提前2周,抗体阳转率提高2.5倍,产生抗体的量也提高了近3倍。实验组CD4+分子数量和CD4+/CD8+值均高于阳性对照组。结论乙肝病毒DNA疫苗pHII成功诱导出小鼠的免疫应答,其免疫效果明显优于不含分子佐剂的乙肝DNA疫苗。     

两种重组乙型肝炎疫苗免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性

目的比较5μg/剂重组乙型肝炎疫苗(酵母)和10μg/剂重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞)免疫儿童后的抗体应答和免疫持久性。方法1151和996名6￣12岁儿童分别按0,1,6月免疫程序接种14批酵母疫苗和5批CHO疫苗,于第1针免后3(T3)、7(T7)、12(T12)、24(T24)、36(T36)、60(T60)月检测抗-HBs应答,分别对接种10批酵母、5批CHO,4批酵母、4批CHO,2批酵母和2批CHO疫苗的儿童进行首针免疫后T24、T36和T60的随访,采用放免法(RIA)检测抗-HBs水平。结果首针免疫后12个月内,接种两种疫苗的儿童抗体阳转率和抗体滴度差异均无显著意义;T24、T36时,接种CHO疫苗的儿童抗体阳转率显著高于酵母疫苗。结论应提高酵母疫苗免疫儿童现用剂量。     

CpG-ODN对乙肝核酸疫苗及重组疫苗免疫效果的影响

目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpGODN)对乙肝核酸疫苗及重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响。方法核酸疫苗实验组用CpGODN与乙肝核酸疫苗联合免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射核酸疫苗,阴性对照组注射质粒pVAX1;重组疫苗分4个实验组,用CpGODN与不同剂量的重组疫苗配伍后分别免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射重组疫苗,阴性对照组注射生理盐水。应用ELISA检测小鼠血清中的抗HBs水平。结果CpG与乙肝核酸疫苗组抗体阳转率比阳性对照组提高3倍,抗体水平提高2倍。CpG与重组疫苗组的阳转率和阳转时间均高于或早于CpG与核酸疫苗实验组。加入CpGODN后,即使重组疫苗用量减少3倍,诱导抗体水平和阳转率均无明显改变。结论CpGODN可提高乙肝核酸疫苗和重组疫苗的免疫效果,并使抗体产生的时间提前。