烟草根黑腐病抗性位点RBRR1的InDel分子标记开发与分析

  背景和目的  RBRR1是通过远缘杂交与回交导入栽培烟草的一个单显性广谱型根黑腐病抗病位点,为了开发基于该位点的简单高效稳定且成本低的紧密连锁分子标记。  方法  在已有酶切扩增多态性序列（Cleaved amplified polymorphism sequences, CAPS）标记相关序列基础上,利用云晒1号基因组与抗、感根黑腐病材料重测序信息,基于其序列插入/缺失（Insertion/Deletion, InDel）多态性设计抗病相关分子标记,并开展遗传效应和遗传变异分析。  结果  筛选到4对具有良好多态性的引物,在目标单株的分子标记辅助选择中具备便捷、高效且呈共显性的特点。遗传效应分析表明,通过分子标记辅助选择导入RBRR1位点能够极显著提高栽培烟草根黑腐病抗性。遗传变异分析结果显示,在烟草核心种质资源中仅有白肋烟TN90和SoTa2携带有RBRR1抗病基因,并发现4对引物在普通烟草自然群体中呈现2种基因型。  结论  RBRR1抗病位点在我国尚未进行广泛利用,具有较高的利用价值;而开发的4个InDel标记可用于该抗性位点的分子标记辅助选择育种和后续抗病基因的精细定位与克隆。      

谷子分子标记研究与应用

谷子是我国传统粮食作物,具有抗旱、耐瘠薄、营养价值高等优点,谷子的种质资源分析及育种研究非常重要,随着分子生物学的发展,分子标记技术的出现为谷子的遗传研究及育种开辟了新的思路和手段。分子标记包括DNA分子标记和蛋白质分子标记,其中DNA分子标记常被用于构建遗传连锁图谱、基因定位及QTL分析、遗传多样性研究、系谱分析与品种鉴定和比较基因组研究等,本文分别介绍了谷子常用的DNA分子标记和蛋白质分子标记及其特点,并综述了其在谷子上的研究应用情况,简要分析和展望了分子标记在谷子上的未来发展。     

用Z蛋白、大麦二聚α-淀粉酶抑制因子-1(BDAI-1)和酵母硫氧还蛋白预测啤酒泡沫稳定性的新方法

泡沫稳定性是啤酒的重要特征。之前用双向电泳(2-DE)对啤酒蛋白质进行分析,结果揭示了大麦二聚α-淀粉酶抑制因子-1(BDAI-1)和NIBEM-T分析仪分析的啤酒泡沫稳定性之间存在关系。为建立基于不同大麦品种和不同麦芽溶解情况下啤酒泡沫稳定性测定的新方法,采用多元线性回归分析,定量测定了啤酒的主要蛋白质在2-DE凝胶上斑点的亮度,并将其作为解释变量。本研究所用的25个自酿啤酒样品,是用不同溶解度的麦芽(共3个品种,A、B和C)酿造的,用显著水平为5%时BADI-1斑点的亮度预测每个啤酒样品的泡沫稳定性(r=0.421)。另外,在泡沫稳定性不同的日本商品啤酒的2-DE凝胶上,观察到了另两种主要的蛋白质斑点(b0和b5)。用这三种斑点亮度作为解释变量,对泡沫稳定性进行多元回归分析计算。结果表明,本实验酿造的25种啤酒样品中,泡沫稳定性的72.1%可用一个新多元回归方程来计算,其中,b0和BDAI-1的斑点作为正解释变量,而将b5的斑点作为负解释变量。为验证多元回归方程和解释变量的有效性,实际分析了啤酒样品的泡沫稳定性。结果发现,10种日本商品啤酒样品中泡沫稳定性的85.1%可用b0和BDAI-1的斑点作为正解释变量,以b5的斑点作为负解释变量。经质谱分析和数据库检索可知,b0和b5的斑点分别被鉴定为大麦Z蛋白和酵母硫氧还蛋白。这些结果确证了BADI-1和Z蛋白是泡沫稳定的积极因子,而酵母硫氧还蛋白可能是泡沫稳定的消极因子。     

甜菜TR1位点多态性分析及细胞质育性鉴定

本研究针对8个甜菜材料的细胞质育性进行分子鉴定。利用数目可变串联重复序列（Variable Number of Tandem Repeats,VNTR）分子标记技术,分别对8个甜菜材料的线粒体DNA中TR1位点VNTR片段多态性进行分析。分析显示8个甜菜群体线粒体TR1位点VNTR重复序列分别为6拷贝,4拷贝,13拷贝。标记分析结果表明田间选育的8个甜菜群体的细胞质分别属于不育型,保持型,普通育性恢复型三种细胞质类型。并且发现1个保持系细胞质群体中混有恢复系细胞质单株和细胞质不育型单株,1个不育系群体中混有普通授粉系单株,1个正常花粉材料群体为不育型细胞质。该分子标记鉴定结果为这些材料的育性进一步决选提供了分子依据,淘汰田间选育过程中混杂的单株,弥补田间表型育性鉴定结果的不足。     

麦芽溶解度对啤酒泡沫稳定性酌影响及其与大麦二聚α-淀粉酶抑制剂(BDAI-I)的关系

啤酒泡沫稳定性是评价啤酒质量的一个重要指标.本文旨在通过双向凝胶电泳来研究啤酒中的发泡蛋白而阐明麦芽溶解度(蛋白质、淀粉等的降解)与啤酒泡沫稳定性的关系.研究发现用大麦品种B、C制成的麦芽生产的啤酒,其泡沫稳定性随着大麦溶解度的提高而下降;而用大麦品种A麦芽所酿的啤酒,其泡沫稳定性却保持不变.为了研究大麦品种A所制得啤酒具有良好泡沫稳定性的原因,采用双向凝胶电泳分析了啤酒中的全蛋白、盐析蛋白和泡沫蛋白质.结果表明:在A样品中,随着溶解度的升高,某特定区域的蛋白质点在这三部分蛋白中的含量均没有改变;然而,B和C样品中的这种蛋白质点都在减少.进一步采用基质辅助激光解吸离子化飞行时间一质谱方法(MALDI-TOF-MS)确定的肽质量指纹图谱(PMF)对这些蛋白质点进行鉴定,结果显示,这些蛋白质点均为大麦二聚α-淀粉酶抑制剂(BDAI-I).上述结果表明BDAI-I对啤酒泡沫的稳定性有重要的贡献.     

啤酒中泡沫活性Z4蛋白质提取参数及与泡持性的关系研究

啤酒泡沫是消费者在接受啤酒时首先考虑的因素之一,也是啤酒的一项重要的感观指标.泡沫活性蛋白质是啤酒泡沫中最重要的组成部分,其中Z4蛋白质约占啤酒泡沫蛋白质Z的70%.主要研究了Z4蛋白质的提取条件,确定了Z4蛋白质的提取参数,为研究泡沫活性Z4蛋白质提供了理论依据.同时,还对泡持性与Z4蛋白质的关系进行了探讨.     

DNA分子标记技术及其在啤酒大麦品种鉴定中的应用

简单对比了常用的大麦品种鉴定方法以及归纳DNA分子标记技术的分类,进一步通过综述几种常用DNA分子标记技术的原理、优缺点及其在大麦品种及纯度鉴定上的应用情况,以期为DNA分子标记在啤酒大麦品种及纯度鉴定研究提供参考。     

啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化研究

泡沫蛋白质是啤酒泡沫的骨架,其含量和性质很大程度上决定了啤酒泡沫的质量.蛋白质Z和脂转移蛋白(LTP)是啤酒泡沫蛋白质中的关键组分,实验究考察了啤酒酿造过程中泡沫蛋白质的变化过程.结果显示:在糖化过程中,分子量为53ku及20～40ku的蛋白质被分解,蛋白质Z及LTP的含量没有太大变化;麦汁煮沸过程中蛋白质含量逐渐减少,蛋白质Z、LTP1和LTP2分别减少了11％、32％及26％;主酵过程中,蛋白质Z、LTP1和LTP2的降幅较大,分别为12％、59％和31％;后酵过程中,蛋白质Z和LTP1的含量基本不变,LTP2的含量逐渐降低,到后酵结束,LTP2的降低幅度达22％.     

采用100%大麦酿造啤酒和采用100%麦芽酿造啤酒在质量上的区别

通过采用外源Ondeapro~R酿造酶,用100%大麦啤酒和采用100%大麦芽为原料酿造的啤酒进行质量上的对比,包括泡沫的形成能力、胶体稳定性和可过滤性能,风味上的区别,蛋白质含量和组分。通过对大麦、麦芽、满锅麦汁、冷麦汁、未过滤啤酒和过滤啤酒的质量特征进行评估。检测酿造过程大麦蛋白质含量和组分的变化,然后评价Ondeapro~R酶制剂对于蛋白质含量和组分变化所起的作用。所有的分析方法都基于EBC、ASBC或者MEBAK。采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳来分析蛋白质组分的变化。研究结果表明,在酿造过程中添加适量的Ondeapro~R酶制剂后可以满足正常酿制啤酒的需要。采用100%大麦酿造啤酒,可以保证整个酿造工艺顺利执行(包括可能影响最大的麦汁过滤和啤酒过滤),直至到最终产品中,我们可以发现其风味符合清爽啤酒的要求,尽管我们从蛋白质含量的区别上判定其实在风味上应当有所区别。     

啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备鉴定（二）

目的：实验在前期研究的基础上,研究了啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,对单抗特性进行鉴定,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的鉴定与定量。方法：制备啤酒泡沫活性蛋白Z4蛋白的单克隆抗体,并测定单克隆抗体效价、单抗亚类鉴定及确定单抗识别位点,最后通用Western Blot免疫吸附法确定单克隆抗体的交叉反应性。结果：所得两株Z4蛋白质的单克隆抗体效价可达10^6以上,其均属于IgG1亚类,但具有不同的抗原识别表位,并且对泡沫活性蛋白均具有较好的反应特异性,与浑浊蛋白、LTP1和Z7无交叉反应。为快速鉴定啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质研究提供了基础。     

一株酿酒酵母的特征区域序列扩增标记

以23株不同来源的酿酒酵母为研究对象,分别提取基因组DNA,试用50条随机引物对其进行随机扩增多态性DNA分析,筛选到两条具有菌株鉴别能力的随机引物。P09可以从2.412,ST—01,SK—26,ZD—01四株酿酒酵母基因组DNA中扩增出长度为433bp的Sc—433片断Sc—433;P46可以从2.1882,ST—01,NJ—02三株酿酒酵母基因组DNA中扩增出长度为665bp的Sc—665片断,其中仅有目的菌株ST—01能稳定的扩增出这2个标记。把这2个片断分别克隆到pUCmT质粒载体中,经过酶切鉴定后测序,根据序列设计特异性引物,把RAPD标记转化为特征区域序列扩增标记,为酿酒酵母菌株的分子鉴别提供了新的借鉴。     

啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（一）

目的研制啤酒泡沫活性蛋白质中Z4蛋白质的单克隆抗体制备（mAb）,用于啤酒生产中泡沫活性蛋白质的准确高效测定。方法Z4蛋白质与弗氏佐剂乳化后免疫BALB／C小鼠,采用间接ELISA法筛选阳性克隆株。按照传统杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果成功地获得两株Z4蛋白质的单克隆抗体,为其啤酒泡沫蛋白质中Z4蛋白质基础研究及其鉴定奠定了基础。     

啤酒主要组分在泡沫中的富集及其对泡持性的影响

为了探究啤酒中影响泡沫稳定性的主要组分在泡沫生成液中的富集情况,对14种市售啤酒的泡沫生成液、残液、原液进行了分离和收集,并对其中蛋白质、总糖、总多酚的含量以及啤酒的泡持性进行了检测。结果显示,蛋白质在啤酒泡沫中有非常明显的富集,泡沫生成液中蛋白质质量浓度比啤酒残液中高27~74μg/mL,比啤酒原液中高16~58μg/mL,而糖类和多酚则没有明显的富集。将3种组分的含量分别与啤酒泡持性进行相关性分析和偏相关性分析,结果表明:(1)蛋白质含量与泡持值之间始终存在很强的正相关,是维持泡沫稳定性的重要因素;(2)糖类能够通过提高啤酒体系黏度、与蛋白质进行共价结合等方式从侧面对啤酒泡持有积极作用;(3)多酚可能与蛋白质交联进而提高泡沫稳定性,但其影响相对较小。     

四种大麦间泡沫蛋白质含量差异的比较

本实验建立了从麦芽中提取泡沫蛋白的便捷方法,并利用考马斯亮蓝法(Bradford 法)和SDS-PAGE 电泳技术进行定量分析,直观地检测和比较了四种大麦和麦芽中泡沫蛋白质的含量、组分和各组分的相对含量及其变化情况,可为评估大麦和麦芽质量以及预测啤酒泡沫的品质提供借鉴。     

新的啤酒蛋白质组图谱的构建及在啤酒质量控制方面的应用

本研究通过凝胶双向电泳(2-DE)对啤酒中的蛋白质组进行分析,进一步通过质谱技术结合数据库检索方法对凝胶上的主要蛋白点进行鉴定归类,构建出了一个全面的啤酒蛋白质组图谱。结果显示,检测到的199个蛋白质点中有85个能被成功鉴定,此85个蛋白点可归为12类蛋白质。为了证明不同的大麦品种和麦芽溶解度对啤酒蛋白质组成和啤酒品质特征的影响,本文研究了11个啤酒样品,它们由蛋白质溶解度不同的8个品种的大麦麦芽酿造而成。通过2-DE分析啤酒蛋白质组并进行对比,发现大麦品种和麦芽溶解度均会影响啤酒中几种蛋白质的浓度,而啤酒中蛋白质的浓度与啤酒的品质特性,如泡沫稳定性有关。此外,观察到源于酵母的蛋白质也可能影响啤酒的品质。啤酒蛋白质组图谱的应用可为啤酒品质相关蛋白质的检测和研究提供一个强有力的平台。     

啤酒泡沫蛋白质的二级结构特点及其质谱鉴定

泡沫蛋白质对啤酒泡沫性能有重要影响。采用圆二色光谱技术研究啤酒泡沫蛋白质和麦芽蛋白质的二级结构构象特点,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D SDS-PAGE)与液质(LC-MS/MS)联用对啤酒泡沫蛋白质进行分离与鉴定。结果显示,麦芽蛋白质以α-螺旋结构为主,而啤酒泡沫蛋白质以β-折叠和无规则卷曲为主,并未表现出典型的α-螺旋双负峰特征,这种结构有利于泡沫蛋白质的疏水性,从而有利于啤酒泡沫的稳定性。经质谱检测,啤酒泡沫蛋白质中共鉴定出11种蛋白质,包括蛋白质Z4、LTP1、BDAI-1及部分酶抑制剂和少量醇溶蛋白片段。     

啤酒泡沫的组成和泡持性的测定

前言啤酒泡沫是赋予啤酒特征的不可缺少的质量。为了使啤酒具有丰富的泡沫,必须使给啤酒带来爽快和香味统一的二氧化碳气适当地溶解在酒液中,并含有足够的来源于大麦的蛋白质和酒花苦味成份以及一定的啤酒粘度。啤酒泡沫的体积(起泡性)主要取决于二氧化碳气含量;泡沫挂杯情况(附着性)主要取决于啤酒的粘度;但就泡沫来说重要的因素是其稳定性(泡持性)。啤酒泡沫的稳定性则主要取决于存在的表面活性物质。     

啤酒胶体稳定性与泡沫质量

啤酒胶体稳定性与泡沫质量相互关联,又相互制约.啤酒中蛋白质组分极大影响着泡沫稳定性;而啤酒胶体稳定性很大程度上取决于啤酒中蛋白质组成及其络合物质.起泡蛋白、异葎草酮、二氧化碳是泡沫形成的三大要素;酒花加量、添加方法、煮沸强度对啤酒胶体稳定性及泡沫质量均有明显影响.为了提高啤酒胶体稳定性及泡沫质量的改善,在生产中应注意:①原料的选择,②掌握好生产工艺的控制要点.③采用单宁、蛋白酶、PVPP等稳定剂和还原剂处理,以改善啤酒胶体稳定性.(陶然)     

烟草RAPD反应体系优化及品种多态性标记研究

利用鲜烟叶材料对RAPD反应体系进行了优化,建立了一个适合烟草的比较稳定的RAPD反应体系,并对影响RAPD反应的主要因素进行了探讨.利用该稳定体系,对具有两对相对性状差异的两个烤烟品种进行了多态性标记研究,从500个引物中筛选到4个有多态性的引物,这4个引物扩出的多态性片段可作为鉴定两个品种的分子标记.初步分析认为,两个品种的多态性标记可能与香气性状和抗病性状连锁.     

影响啤酒泡沫稳定性的因素及控制措施

1 原料 1）大麦蛋白质含量低,不利泡沫的形成。宜选用蛋白质含量高、皮薄的大麦,蛋白质含量10％～12％。 2）酿造用水碱度太高,不利高分子蛋白质的获取,影响啤酒泡沫性能。控制糖化用水碱度≤2。 3）过分溶解的麦芽,高中分子氮相对减少,降低蛋白质作为天然泡沫稳定剂的作用。应根据不同的大麦品种和质量,调整制麦工艺,使麦芽溶解度适中。