对国产抗-HBs放免试剂的确证

用北京生物制品研究所出品之抗-HBs放免试剂检测抗-HBs,有时比Abbott同类试剂(Ausab)检出率高。为确证其是否真实,对11份二者检出不一致的血清用血源HBsAg及基因重组HBsAg作中和试验。均能中和。以正常人血清免疫小鼠所获抗血清则与该试剂未出现非特异反应。证明此试剂具有较高灵敏度与特异性。这与中国药品生物制品检定所检定该试剂灵敏度较高(一般为0.5～2.mIU/ml,Ausab一般为1～5mIU/ml)是一致的。     

HIV抗体快速诊断试剂与酶联免疫诊断试剂灵敏度比较

目的比较HIV抗体快速诊断试剂与抗体酶联免疫诊断试剂检测不同样品灵敏度的差异。方法 用HIV抗体诊断试剂和HIV抗体酶联免疫诊断试剂分别检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品、HIV不同亚型样品以及HIV高危人群样品。结果检测HIV抗体酶联免疫试剂国家参考品中,20份阳性样品只检出10份阳性,5份最低检出限样品只检出1份阳性。与酶联免疫试剂相比,对B亚型样品的检测,其灵敏度低2-8倍;对AE重组样品,其灵敏度低100倍;对BC重组样品,其灵敏度低2-10倍。在HIV高危人群样品中,与酶联免疫诊断试剂阳性符合率为88.2％,阴性符合率为97.3％。结论快速诊断试剂的灵敏度明显低于酶联免疫诊断试剂,因此,其应用范围不能等同于酶联免疫诊断试剂。     

化学发光免疫分析法检测人血清孕酮

目的研究用化学发光免疫分析法(CLIA)检测人血清孕酮(PROG)。方法采用竞争抑制法,用高亲和力的多克隆抗体包被,碱性磷酸酶标记孕酮,金刚烷增敏化学发光体系作为酶底物来检测PROG。并考察试剂的灵敏度、精密性、准确性、特异性和测定范围。将试剂盒置4℃存放14个月,检测质控血清的PROG含量,考察试剂的稳定性。并与进口试剂进行比较。结果CLIA法检测PROG灵敏度达0.1ng/ml;特异度99.5%;测定范围在0.1～200ng/ml之间;用PROG浓度分别为高、中、低的质控血清测定精密性,批内和批间变异系数均小于10%,回收率在91.7%～108.4%之间;与雌二醇、雌三醇和雌酮的交叉反应率低于0.1%,与睾酮和可的松无交叉反应;试剂在4℃存放14个月,质控血清的测定值均在规定范围内;与进口全自动化学发光试剂BeckmanAccessTM相比有较好的相关性。二者测定结果的符合率为99.2%。结论化学发光法灵敏度高,特异性好,稳定性强,检测范围宽,有很好的准确性和精密性,是现有放射免疫法的理想替代方法。     

应用化学发光免疫分析法检测人血清催乳素

目的 应用化学发光免疫分析法(CLIA)检测人血清催乳素(Prolactin,PRL)。方法 采用双抗体夹心法。碱性磷酸酶标记抗体,金刚烷胺增敏化学发光体系作为酶底物。结果 最低检测限低于5.0 μIU/ml,定量范围在10～4 000 μIU/ml之间的样本;PRL浓度为100、500和2000 μIU/ml时,批内变异为3％～5％(n=20),批间变异为5％～8％(n=20),回收率在91％～109％之间。与LH、TSH、HCG和FSH无交叉反应;稳定性良好,在1年的效期内(4℃保存)其整体变化幅度<20％。本试剂与进口的全自动化学发光试剂Beckmen Access比较有较好的相关性。结论 本试剂灵敏度高,特异性强,稳定性好,检测范围宽,有很好的准确性和重复性,且使用方便,无污染,是放免试剂的理想替代试剂,适应于临床应用。     

不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒抗体检测试剂性能评估

目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的65份[HCV抗体阴性参考品30份(编号N1~30)、阳性参考品30份(编号P1~30)、最低检出限参考品4份(编号L1~4)和重复性参考品1份]血浆样本进行检测,通过分析HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项性能要求,评估不同化学发光免疫分析方法的HCV抗体试剂性能。结果 9种试剂检测阴、阳性参考品符合率均为96.7%(29/30)~100%(30/30),仅有3种试剂检测参考品符合率均为100%(30/30);最低检出限均检出L1、L2、L3阳性,检出L4阴性;重复性检测S/CO值的变异系数(CV)在1.6%~11.1%之间,化学发光免疫分析的双抗原夹心法比间接法试剂对同一阳性样本检测的S/CO值高;相同项目同一试剂的稳定性试验与常温条件下检测结果基本一致,对每种试剂检测3个批号的批间精密度,S/CO值的CV在2.3%~12.5%之间。结论 9种试剂对HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项指标验证显示,不同化学发光免疫分析法的HCV抗体检测试剂性能基本一致。     

以IU为单位的乙型肝炎病毒核心抗体国家参考品的建立

目的建立以IU为单位的乙型肝炎病毒核心抗体(hepatitis B core antibody,HBcAb)国家参考品。方法从我国多个省份血液中心和采浆站收集血清、血浆样品300份,应用5家国产和2家进口HBcAb诊断试剂初步筛选,并采用WHO国际HBcAb标准品进行标定,同时验证初步筛选获得的参考品的稳定性及适用性。结果建立了HBcAb国家参考品,包括阴性参考品15份、阳性参考品15份、灵敏度参考品1份、精密性参考品1份。其中灵敏度参考品经WHO国际HBcAb标准品标化后定量为5 IU/ml,19家发光试剂和酶联免疫试剂的最低检出限均值分别为0.67及0.53 IU/ml。参考品经4℃、常温、37℃保存及反复冻融后与置-20℃保存的参考品在阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、最低检出限及精密性等方面的结果均一致。5家国产试剂检测阴性参考品符合率均为15/15,阳性参考品符合率均为15/15,其中3家试剂的最低检测限高于1.0 IU/ml,精密性CV均20%。结论成功建立了以IU为单位的HBcAb国家参考品,且具有良好的稳定性及适用性,为提高HBcAb诊断试剂的质量奠定了基础。     

检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制

目的　检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制。方法　将用于生产的 10批牛血清混合后 ,免疫家兔制备抗血清 ,以纯化抗牛血清兔IgG作为包被抗体、HRP 酶标抗体作为指标抗体 ,采用ELISA双抗体夹心法进行线性范围、精密度、准确度、特异性评价等一系列检测。结果　兔抗牛免疫血清双扩效价可达 1∶16 ,免疫血清、纯化抗体和酶标抗体均含有抗牛血清白蛋白及牛IgG等多种蛋白成分的抗体 ;检测疫苗中残余牛血清含量最佳线性范围为 0 78～ 2 5ng/ml,精密度 (回收率为 80 %～ 112 . 5 % ,CV为 2 . 5 %～ 9 0 % )和准确度 (回收率为 96 . 7%～112 . 5 % ,CV为 1. 4 %～ 9 .4 % )良好 ,检测限度为 1 5ng/ml,检测限量为 3ng/ml;与正常马、兔、豚鼠血清以及不同病毒性疫苗基质液均无交叉反应 ,可定量检测不同病毒性疫苗中的残余牛血清。结论　所制备的ELISA试剂特异性强 ,灵敏度高 ,重复性好 ,适用于常规疫苗中残余牛血清的检测。     

发光试剂与酶联免疫试剂检测丙型肝炎抗体的临床评价

目的对丙型肝炎抗体的酶联免疫试剂和化学发光试剂进行临床考核和比较。方法用国外进口注册的抗HCV酶联免疫试剂和化学发光试剂检测丙型肝炎试剂国家参考品和283份可疑丙肝感染者血样,对不一致样品再用HCV RI-BA和HCVRNAPCR试剂进行确证。结果两种试剂均可达到国家标准,酶联免疫试剂特异性较好,化学发光试剂灵敏度较高。结论两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测。     

前列腺特异抗原光激发化学发光免疫检测方法的建立

目的建立前列腺特异抗原(Prostate specific antigen,PSA)光激发化学发光免疫(Light induced chemilumines-cent immunoassay,LICA)定量检测方法。方法用PSA多克隆抗体包被受体微粒,PSA单克隆抗体标记生物素,两者与链霉亲和素包被的供体微粒共同组成检测试剂检测PSA,优化测定条件并对方法进行验证。分别采用本方法与Roche公司电化学发光免疫分析法对82份临床标本进行检测,并进行比较分析。结果本方法的分析灵敏度为0.31 ng/ml;批内变异系数为4.66%～6.75%,批间变异系数为5.68%～8.42%;回收率为95.1%～105.2%。两种方法具有较好的相关性,其R2为0.981 5。结论建立的均相化学发光免疫测定方法能够用于血清PSA的定量测定,且其性能指标符合临床要求。     

全国乙肝诊断试剂1996～1997年度抽检结果

目前,国内生产乙肝诊断试剂有55个厂家的264个生产文号。其中未纳入批批检定的抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc（试剂,根据生物制品管理规定和卫生部的要求,我所在1996年6月至1997年12月间对45个厂家4个品种的576批试剂及HBsAgEIA678批试剂进行第3个年度抽检。实际抽到40个厂家441批试剂,批总合格率为63％（276／441）;RIA方法测定HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb的合格率分别为90％（19／21）,62％（13／21）,92％（11／12）,80％（12／15）,6％（l／18）。EIA法测定抗一HBs,HBeAg,抗一HBe,抗一HBc的合格…     

人催乳素化学发光免疫分析试剂盒的制备及验证

目的制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证。方法采用2株不同结合位点的抗hPRL单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证。结果试剂盒最佳定量范围在5～100ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.9999,灵敏度为0.49ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%。试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1500ng/ml。与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.9537和0.9486。结论已成功制备灵敏、特异的hPRLCLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测。     

新型脂质体吸附乙肝疫苗的稳定性及其抗病毒作用

目的 研究新型脂质体及其与乙肝疫苗结合物的稳定性以及结合物抗病毒作用。方法 通过外观观察、粒径检测及诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平考察稳定性;免疫HBV转基因小鼠,检测其血清中HBsAg和抗-HBs的滴度。结果 4℃存放1年,脂质体有少量沉淀产生,粒径变大;而脂质体与乙肝疫苗结合物全部沉淀,粒径变大,但均易摇匀,无结块;结合物4℃存放1年,诱导BALB/c小鼠产生特异性抗体IgG1和IgG2a的水平没有下降;HBV转基因小鼠于免疫后2、3、4个月,体内的HBsAg的A值较免疫前有显著下降。抗-HBs在初次免疫2个月后的阳转率为100％。结论 脂质体吸附乙肝疫苗稳定性好,且有一定的抗病毒作用。     

EIA乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)诊断试剂的研制

<正> 采集乙肝表面抗原携带者血浆,经(NH_4)_2SO_4沉淀、KBr浮升离心、蔗糖沉降法离心纯化HBsAg,胃酶消化、超过滤,获不含正常人血清蛋白成分的HB-sAg。SDS-PAGE纯度>90％,-20℃保存,待用于包被和标记用的HBsAg。用RIA法筛选HBsAg、抗-HBs及抗-HBc三项全阴的3～5份血清混合作为阴性对照。用RIA法测定抗-HBs阳性的血清调整约为50min/ml,作为阳性对照。检测程序为pH9.6碳酸盐     

乙肝疫苗接种中的无应答者与乙肝病毒感染的关系分析

在乙肝疫苗接种人群中,可有0～10％为不产生抗-HBs的无应答者,一般认为与个体的遗传免疫状态有关。作者认为还有可能与潜在HBV感染有关,为此,我们对无应答者采用PCR进行了HBVDNA检测。无应答者共28人,年龄11～60岁,曾按0、1、6免疫程序接种过3针乙肝疫苗（每针10μg）,接种前血清筛选HBsAg为阴性,全程免疫后一个月采血检测抗-HBs仍为阴性。在进行PCR检测之前,首先采用固相放射免疫法对HBsAg和抗Hfis无应答者进行复检（试剂盒为微山县防疫站自备,经与Abb。ti试剂盒对比,符合率为92％～96％）,结果100％符合。28名无应…     

单抗制品中CHO细胞宿主蛋白残留双抗夹心ELISA检测方法的建立

目的建立单抗制品中CHO细胞宿主蛋白(host cell protein,HCP)残留双抗夹心ELISA检测方法。方法确定双抗夹心ELISA方法的最佳工作条件,并对该方法的精密度和准确度进行验证,确定线性范围及最低检出限;用建立的方法与市售试剂盒分别检测低、中、高浓度HCP标准品及抗TNF-α单抗原液、抗VEGF单抗纯化工艺样品中的HCP。结果建立的双抗夹心ELISA法最佳抗体包被浓度为1.5μg/ml,酶标抗体浓度为1μg/ml,160 r/min,37℃孵育2.5 h;TMB 37℃孵育15 min;以630 nm为参比波长,450 nm为测定波长。该方法的线性范围为3.125~100 ng/ml,最低检测限为3.125 ng/ml;试验内变异系数(CV)和试验间CV均小于15%,回收率为85.3%~115.1%。与商品化试剂盒检测结果基本一致,可用于检测纯化工艺样品。结论已成功建立单抗制品中CHO细胞HCP残留双抗夹心ELISA检测方法,该方法可代替市售试剂盒用于CHO细胞HCP残留检测,可使检测成本降低30倍。     

乙型肝炎疫苗和卡介苗同时或分别接种的抗-HBs持久性

对乙肝疫苗和卡介苗同时或分别接种的抗-HBs的持久性进行了研究。同时接种组(1组)和分别接种组(2、3A、3B组)的抗-HBs阴转率和GMT均无显著差异,提示乙肝疫苗和卡介苗可以同时接种。抗-HBs的持久性与全程免疫后抗-HBs的峰值呈正相关,峰值<100 mIU/ml者,3年后有43.48％抗体转阴。建议全程后抗-HBs<100 mIU/ml者,3年后宜加强一针。     

2.5sNGF酶联免疫检测试剂盒的研制

用成年雄性小鼠颌下腺提纯的 2 5sNGF免疫家兔得到兔抗NGF抗体 ,研制出 2 5sNGFELISA试剂盒。经检测本试剂盒灵敏度达到 1ng ml,在 0 84～ 6 7ng ml范围内线性良好 (r >0 99)。对人、小鼠、大鼠血浆无非特异反应 ,在大鼠血浆中NGF样品回收率在 91%～ 10 7%之间 ,变异系数小于 10 % (n =4)。对NGF参比品进行 6次标定 ,平均值为 13 4± 1 13ng 支 ,板间CV为 8 43% (n =6 ) ,板内CV值均小于 6 % (n =4,3次 )。表明本试剂盒可用于小鼠 2 5sNGF制品的定量检测和药代动力学研究。     

人β-hCG化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清hCG浓度的双抗体夹心化学发光免疫分析方法。方法采用2种高特异性的抗β-hCG单克隆抗体,以一种包被微孔板制成固相抗体,另一种标记碱性磷酸酶,以金刚烷衍生物为底物,采用双抗体夹心法检测人血清hCG浓度,并与进口试剂进行比较。结果以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板,酶结合物以1∶10000稀释,在室温条件下检测,可测范围为5~540mIU/ml,灵敏度为0.143mIU/ml,批内、批间平均变异系数分别为5.28%和7.05%,平均回收率为98.77%,范围为92.3%~108.6%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率均小于0.01%。与国外同类试剂有良好的相关性。结论该方法有较高的灵敏度、精密性和准确性。     

戊型肝炎病毒IgG抗体国家参考品的建立

目的制备戊型肝炎病毒IgG抗体国家参考品。方法从我国多省血液中心、采浆站收集血清、血浆样品300份,应用国内外5家HEV IgG抗体诊断试剂进行筛选,制备HEV IgG国家参考品,并对参考品的稳定性及适用性进行检测。结果制备了HEV IgG国家参考品,其中阴性参考品30份;阳性参考品10份;灵敏度参考品1份,依据HEV IgG国际标准品进行标化,定量为3 U/ml;精密性参考品1份。参考品经4℃及室温放置10 d,37℃放置7 d,以及反复冻融3次后,测定结果与-20℃放置参考品检测结果一致,稳定性良好。5个厂家试剂对参考品的检测结果显示该参考品具有较好的适用性。结论制备了戊型肝炎病毒IgG抗体国家参考品,为提高诊断试剂的质量奠定了基础。     

检测疫苗中小牛血清残存量ELISA试剂盒的研制

目的　建立一种简便、灵敏、特异、准确的疫苗中小牛血清残存量检测方法。方法　采用ELISA双抗体“夹心法” ,即固相载体上包被特异性抗小牛血清抗体 ,加入待测样品 ,反应后再加入酶标记抗小牛血清抗体 ,经显色后测定。结果　固相载体最适包被抗体的量为 1μg/孔 ,反应体系的pH为6 .8～ 7.2 ,两步反应的最佳时间各为 1h ,最适温度为 37℃。检测的最适抗原 (小牛血清 )范围为 2 0～ 10 0ng/ml,该试剂盒的灵敏度为 3ng/ml ,变异系数CV(n =2 8孔 /次 )平均为 5 .7%。经检测 6批疫苗的结果与放免结果相符合。结论　该法特异性强 ,灵敏度高 ,为疫苗中小牛血清残存量的检测提供了一种新方法