酿酒酵母中乙醇脱氢酶双水相萃取与DEAE-32层析纯化方法的比较

比较了双水相萃取和DEAE-离子交换层析对纯化酿酒酵母中的乙醇脱氢酶的效果.实验结果表明,经(NH4)2SO4分级沉淀和DEAE-32阴离子交换层析后,ADH的纯化倍率为4.47倍,回收率为32.15%.经(NH4)2SO4分级沉淀和双水相萃取的酶液,ADH的纯化倍率为10.69倍,回收率为53.36%.双水相萃取方法简单,纯化倍率和回收率优于(NH4)2SO4分级沉淀和DEAE-32阴离子交换层析,可用于乙醇脱氢酶的纯化.     

克氏原螯虾壳膜几丁质酶的分离纯化

本研究以克氏原螯虾虾壳为材料,探讨克氏原螯虾壳膜中几丁质酶的分离纯化方法。通过硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、苯基疏水层析和DEAE-32阴离子交换层析,获得比活力为44.93 U/mg、纯化倍数约16.28倍的电泳纯的几丁质酶制品。结合SDS-PAGE和飞行质谱测出该酶分子量为37.7 kDa,为单亚基蛋白。本实验的分离纯化方法可行,为后续酶学性质的研究提供了基础。     

海参体壁中α-1,4淀粉酶的分离纯化及性质

通过采用匀浆、硫酸铵盐析、透析、DEAE-52阴离子交换层析、Sephacryl S-300凝胶层析等方法从海参体壁中分离纯化并得到了α-1,4淀粉酶。结果表明,该酶具有3条亚基链,分子质量约为420 k D;最适p H值为9.0,最适温度为80℃,90℃条件下保温30 min后仍有38%以上的相对酶活性,因此,该酶是一种具有较高热稳定性的碱性高温淀粉酶。K+、Fe3+和Mn2+对其有较强的抑制作用,Cu2+和Ca2+对其有较强的激活作用。     

鸭血浆胆碱酯酶的分离纯化和性质的研究

将鸭血浆用0．2mol／L pH7．2磷酸盐缓冲溶液等体积稀释后，以硫酸铵为盐析剂进行二次盐析、再经DEAE-52离了交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析对胆碱酯酶进行分离纯化，可获得电泳纯的胆碱酯酶，纯化倍数为278．5倍，酶活回收为17．8％。实验表明，该酶的最适温度为37℃，最适pH为7．8，有过量底物抑制现象。     

从废弃啤酒酵母提取乙醛脱氢酶的研究

利用高压匀浆法破碎、硫酸铵分级盐析、DEAE-Sephadex A-50阴离子交换层析以及Sephadex G-150凝胶过滤层析对废弃啤酒酵母细胞线粒体中乙醛脱氢酶(ALDH)进行了提取研究。结果表明,经过纯化后的ALDH酶液,纯化倍数为29.6,产率为6.7%。酶的亚基分子量经检测为55kDa。     

乳酸菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

本文采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤方法分离纯化乳酸菌中β-葡萄糖苷酶.经SDS-PAGE测定其相对分子量约为60kD.该酶以对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷为底物时,最适pH值和最适温度分别为6.0和40℃.在45℃以下,pH值在4.5～7.0之间酶活力相对稳定.Hg^2＋和Ag^＋对该酶活力有明显的抑制作用.     

胞外单宁酶纯化及酶学性质的研究

采用黑曲霉B0201固态生料发酵生产胞外单宁酶,经过硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素层析、葡聚糖G-150凝胶柱层析纯化,得到电泳纯的单宁酶,纯化倍数达到18.44。对该酶的性质研究表明:单宁酶的相对分子质量大小约为58800,该酶的最适反应温度是40℃,最适反应pH值是5.0;以PG为底物,米氏常数Km为1.08mmol/L,Vmax为104.1μmol/(L.min)。     

黏质沙雷氏菌胞外几丁质酶的纯化及特性

黏质沙雷氏菌几丁质酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-琼脂糖凝胶阴离子交换层析和苯基-琼脂糖凝胶疏水层析,得到电泳纯的几丁质酶和几丁质结合蛋白CBP21。该几丁质酶和CBP21分子质量分别约为58 ku和21 ku,CBP21对该几丁质酶水解几丁质增效明显。几丁质酶反应最适温度为50℃,最适pH约为6.5～7.0。该酶在55℃以下、pH 4.5～8.0范围内稳定。酶的Km值为0.22 mg/mL,Vm为1.26μmol/(min.mg)。金属离子K+、Sn2+、Mn2+对酶有一定激活作用,而Pb2+、Hg2+和Cu2+则强烈抑制其活性。该几丁质酶的糖基含量约为3.3%。EDTA和2-ME可分别提高酶活力65%和105%。H2O2强烈抑制酶活力,提示其活性中心可能存在硫氢基。     

醋酸菌中乙醛脱氢酶的分离纯化及酶学性质

以实验室筛选得到的醋酸菌(Acetobacter pomorum)为实验菌株发酵产酶,通过细胞破壁,采用(NH₄)₂SO₄沉淀、透析、DEAE-Sepharose 离子交换层析及 Superdex G-75凝胶过滤层析分离纯化得到乙醛脱氢酶的酶液,并考察其酶学性质。该酶分子质量为221.60 kDa,单个亚基分子质量约为54.41 kDa,为四聚体结构;纯酶液比活力20.25 U/mg,纯化倍数为10.16倍,乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)的回收率为6.53%。酶学性质研究表明,ALDH促进乙醛分解的最适温度为50 ℃,40~50 ℃相对酶活力稳定性好;该酶的最适pH为7.0,当pH在5.5~7.5内酶活力表现稳定;金属离子对酶活性的影响实验表明,Na+、K+、Zn2+、Ba2+对该酶酶有不同程度抑制作用,而Mg2+、Ca2+、Al3+、Li+、Cu2+具有促进作用;ALDH的最适底物为乙醛,相对偏好直链醛类。ALDH活性较大,为后期表达和深入研究其生物学功能提供理论和数据支持。     

黑曲霉菊粉酶的分离纯化与酶学特性

黑曲霉（Asperginusniger）105发酵液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到菊粉酶组分,纯化倍数为7．73倍,活力回收率为4．39％。该菊粉酶的最适pH值为6．0,最适温度为50℃,Cu^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋、Fe^2＋对该酶有很强的抑制作用。菊粉酶活力与蔗糖酶活力之比为16．5,表现为内切酶活性。以菊粉为底物时,米氏常数（Kin）为0．1999 mmol／L,最大反应速度（Vmax）为117．32μmol／（mg·min）。