基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法溯源分析云南省肉制品中金黄色葡萄球菌

目的 利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术对云南省肉制品中金黄色葡萄球菌进行溯源。方法 通过MALDI-TOF MS, 主成分分析及聚类分析等方法, 对来源于云南省肉制品的88株金黄色葡萄球菌, 包括耐苯唑西林或敏感金黄色葡萄球菌株(MRSA/MSSA)的进行溯源研究。结果 86株金黄色葡萄球菌可鉴定到种的水平, 2株可鉴定到属的水平。用MALDI-TOF MS鉴定金黄色葡萄球菌与生化和血清学方法的分型高度相关, 聚类分析表明, 88株菌株在距离水平为500的情况下被划分为4个类型, 其中5型同数据库中来自欧美的9株标准菌株亲缘关系最近。88株金黄色葡萄球菌中来源相同地区的菌株MALDI-TOF MS肽指纹图谱相似性较好, 相同类别来源或地区来源的金黄色葡萄球菌菌体蛋白表达更为相似, MRSA和MSSA菌株MALDI-TOF MS肽指纹图谱未观察到显著差异。结论 MALDI-TOF MS是一种快速、高敏感、高通量、高精度的金黄色葡萄球菌鉴定技术, 具有良好的可追溯性。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定食品中金黄色葡萄球菌

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对食源性金黄色葡萄球菌的鉴定效果。方法应用MALDI-TOF MS对210株食源性金黄色葡萄球菌进行鉴定,与传统的生化鉴定结果进行比较,并用SPSS19.0软件分析鉴定结果。结果 MALDI-TOF MS将210株金黄色葡萄球菌鉴定到种、属水平分别为98.10%和1.43%,与VITEK 2鉴定方法无差异(P0.05)。结论 MALDI-TOF MS具有简便、快速、准确等优点,适用于对食源性金黄色葡萄球菌进行高通量、低成本的快速鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱定性分析啤酒中糖类条件的优化

通过选择不同基质(2,5-二羟基苯甲酸、super DHB、2,4,6-三羟基苯乙酮)和设置不同啤酒样品稀释倍数(从原液到1 000倍稀释),优化了MALDI TOF MS定性分析啤酒中糖类的试验条件。研究结果显示,3种基质中,2,4,6-三羟基苯乙酮应用于MALDI TOF MS对啤酒中糖类表征的能力优于另外两种基质。当以2,4,6-三羟基苯乙酮为基质,啤酒样品稀释10倍时,MALDI TOF MS可达良好的定性分析效果。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测副溶血性弧菌

目的 建立基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)检测副溶血性弧菌的方法。方法 从样品预处理方法、分析菌量、培养基、培养时间方面分析各因素对MALDI-TOF-MS方法重复性、鉴定结果准确性的影响。将从市售420份水产品中分离并用全自动微生物鉴定及药敏分析系统生化鉴定为副溶血性弧菌的123株菌株,用MALDI-TOF-MS对其进行鉴定,对比2种方法的鉴定结果。结果 采用混合溶液法进行预处理,3%NaCl营养琼脂培养基, 36℃培养24 h,分析菌量为8 mg,用MALDI-TOF-MS进行分析所得到的特征峰多、峰型稳定、杂峰少,质谱图的准确性和重复性高、与生化鉴定匹配性好。分离得到的123株副溶血性弧菌鉴定分值大于2.000的达98.4%。结论 MALDI-TOF-MS作为一种快速、准确、高效的检测方法,可用于食品中副溶血性弧菌快速检测。     

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法的3种中药材中污染菌的快速鉴定

目的 运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix assisted laser analytical ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对9批中药材中相关污染菌进行快速鉴定,考察其微生物污染情况.方法 参照2015年版《中国药典》...     

免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测定牛奶、鸡蛋中的沙门氏菌

目的 建立免疫富集联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)检测牛奶、鸡蛋中沙门氏菌的方法.方法 沙门氏菌经免疫磁珠特异性富集后采用MALDI...     

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱的 溶藻弧菌鉴定研究

目的建立快速检测和鉴定溶藻弧菌的方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF-MS)和SARAMIS分析软件,对来自水产品中的溶藻弧菌进行了检测和鉴定。方法将从样品中分离得到的可疑菌落于37℃纯化培养24、48、72 h后,分别用微生物API生化鉴定系统和MALDI-TOF-MS方法进行分析鉴定,并对MALDI-TOF-MS鉴定方法的稳定性、准确性和重复性进行初步探讨。结果不同的培养时间,24、48和72 h对MALDI-TOF-MS检测的蛋白质谱图影响较小,鉴定值分别为94.10%,93.90%,92.70%;同时用微生物API-20E生化鉴定试剂盒进行辅助分析鉴定,培养24 h后,鉴定值为97.7%,T值为0.47,但培养72 h后,鉴定值为52.4%,T值为0.15。同一样品点样2次,得到的6张图谱显示出峰位置基本一致。用标准菌株大肠埃希菌ATCC 8739和溶藻弧菌ATCC 17749纯化培养24 h后,鉴定值分别为99.90%和97.60%。结论与传统的生化鉴定方法相比,MALDI-TOF-MS和SARAMIS软件分析方法具有较高的稳定性、重复性和准确性,可以快速、准确地鉴定溶藻弧菌,可用于水产品中溶藻弧菌的高通量、低成本的快速检测鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在李斯特菌检测和鉴定中的应用

为建立食品中各种李斯特菌的快速检测和鉴定方法,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对单增李斯特菌、绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌、威尔斯李斯特菌和格氏李斯特菌5种李斯特菌进行检测,并与传统的生化鉴定方法(VITEK 2)和聚合酶链式反应(PCR)方法检测结果进行比较;用不同培养基和不同培养时间培养的单增李斯特菌对该方法进行检测,还对60份人工感染5种李斯特菌的食品样品分别进行MALDI-TOF-MS、PCR以及传统生化方法的检测和鉴定。结果表明：MALDI-TOF-MS能够快速、可靠地区分上述5种李斯特菌,而且具有很好的稳定性和重复性,在检测时间、重复性和准确性方面的总体表现优于传统生化鉴定方法。MALDI-TOF-MS技术适用于对李斯特菌等食源性病原菌进行高通量、低成本的快速鉴定。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在食源性致病菌鉴定中的应用

;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)具有高效、准确、检测速度快等优点。作为近年来发展的新型食源性致病菌鉴定技术,MALDI-TOF MS为食品病原微生物靶标性监测和食品安全事件应急检验提供了一种高效的鉴别技术参考。本文检索了近年来国内外MALDI-TOF MS技术在食源性致病菌检测中的相关研究,综述基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测原理及具体案例,在此基础上分别从参考菌株数据库建设、标准化程序规范等方面对MALDI-TOF MS在食源性致病菌检测领域的研究方向进行展望,以期为后续食品安全检测及快速监管提供技术支持。     

水产品中溶藻弧菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱快速鉴定方法建立

目的建立水产品中溶藻弧菌的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的快速鉴定方法。方法以溶藻弧菌标准菌株(CICC 10889)为研究对象,采集不同样品处理方法 (直接涂抹法和甲酸提取法)、激光强度和菌株传代次数的MALDI-TOF MS图谱并加以分析比较,探讨上述因素对方法准确性的影响。将溶藻弧菌标准菌株(CICC 10889)的MALDI-TOF MS图谱主产物(MSP)添加到数据库中,使用36株分离菌株及8株与溶藻弧菌近缘的弧菌标准菌株验证数据库的补充对鉴定结果可信度的影响。结果甲酸提取法处理所得图谱特征峰多、基线平滑、信噪比高,图谱质量优于直接涂抹法;激光强度对MALDI-TOF MS图谱有影响,过高或过低均会导致图谱质量的下降;标准菌株补充数据库后可提高鉴定可信度,分离株的鉴定分值均达到2.300以上;传代次数对鉴定结果没有影响。结论 MALDI-TOF MS方法可将溶藻弧菌准确鉴定到种水平。该方法准确、可靠,可用于溶藻弧菌的快速鉴定。     

基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱结合化学计量学技术筛查原奶掺假研究

目的 利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱 (Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF) 结合化学计量学方法快速筛查鲜奶掺假。方法 样品经0.1%三氟乙酸水溶液稀释50倍,与10 mg/mL芥子酸溶液等体积混合,取2 μL混合液点靶板,待样品干燥后载入MALDI-TOF,MALDI-TOF在线性模式下采集数据。通过主成分分析 (Principal Component Analysis, PCA)分析不同来源的数据,建立鲜奶蛋白质信息数据库。通过检测掺假样品并与数据库进行比较,评估检测方法性能。结果 确定了MALDI-TOF蛋白质图谱可做为鲜奶的指纹图谱。建立了一个涉及2个产地和季节的鲜奶蛋白质信息数据库。方法能够检测含有0.3% (w/w) 猪皮明胶、大豆分离蛋白或乳清蛋白的掺假样品。方法操做简单快速,从进样到获得结果,一个样品仅需几分钟。结论 MALDI-TOF结合化学计量学方法能够快速检测在0.3% (w/w) 浓度下含有猪皮明胶、大豆分离蛋白或乳清蛋白的鲜奶掺假。     

基质辅助激光解吸飞行时间质谱技术快速检测水产品中5种致病菌

目的 建立水产品中5种常见致病菌的自动化快速高分辨检测手段,提高水产品致病微生物检测的效率和准确性。方法 设计引物对霍乱弧菌、副溶血性弧菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌的特异基因owpW、tlh、invA、femA、prfA进行多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增;设计特异探针以PCR产物为模板进行单碱基延伸,延伸产物在基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)上进行检测。基因owpW、tlh、invA、femA、prfA的探针分子量分别为4848、5435、5890、6560、7096Da,单基因延伸后探针的分子量分别为5119 Da(加A)、5697 Da(加T)、6137 Da(加C)、6822 Da(加T)、7383 Da(加G)。最终确定的体系方法通过重现性试验、特异性试验、灵敏度试验、人工污染水产样本检测试验进行验证。结果 以混合5种菌DNA的样本为模板做核酸质谱检测,对应的5个探针可以同时延伸,延伸效率大于80%,在以干扰菌为模板的样本中不会检出上述5种菌,检出沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌的灵敏度分别可达到150、350、160、130、180CFU/mL。结论 此方法展现出良好的重现性、特异性和灵敏度,可以满足一次反应同时检测水产品中上述5种微生物的需求。     

Short communication: Evaluation of MALDI-TOF mass spectrometry and a custom reference spectra expanded database for the identification of bovine-associated coagulase-negative staphylococci

This study evaluated MALDI-TOF mass spectrometry and a custom reference spectra expanded database for the identification of bovine-associated coagulase-negative staphylococci (CNS). A total of 861 CNS isolates were used in the study, covering 21 different CNS species. The majority of the isolates were previously identified by rpoB gene sequencing (n = 804) and the remainder were identified by sequencing of hsp60 (n = 56) and tuf (n = 1). The genotypic identification was considered the gold standard identification. Using a direct transfer protocol and the existing commercial database, MALDI-TOF mass spectrometry showed a typeability of 96.5% (831/861) and an accuracy of 99.2% (824/831). Using a custom reference spectra expanded database, which included an additional 13 in-house created reference spectra, isolates were identified by MALDI-TOF mass spectrometry with 99.2% (854/861) typeability and 99.4% (849/854) accuracy. Overall, MALDI-TOF mass spectrometry using the direct transfer method was shown to be a highly reliable tool for the identification of bovine-associated CNS.     

基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法快速鉴定餐饮食品中的空肠弯曲菌

目的 建立基质辅助激光解析电离-飞行质谱法(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)快速鉴定餐饮食品中空肠弯曲菌的方法.方法 从餐饮样品中分离的疑似空肠弯曲菌经不同配比的基质液处理...     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法分析天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌

目的探索基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)在牦牛酸奶中德氏乳杆菌检测中的应用。方法采用MALDI-TOF MS对分离自天然牦牛酸奶中的德氏乳杆菌进行分析研究。针对10株分离自牦牛酸奶经16S rDNA鉴定的德氏乳杆菌进行质谱分析,根据乳酸菌的特异性特征,设计6种微生物破碎方法和5种微生物蛋白质抽提方法进行正交组合实验,在同一质谱条件下采用加权计算及均方根误差分析的获得变异较低稳定性高的处理方法。在最佳处理组合下采用SARAMIS Premium对德氏乳杆菌进行相关分析。结果实验结果表明在液氮、超声、甲酸处理下德氏乳杆菌在基质解析电离中可产生稳定且丰富的蛋白质峰组,且相关分析较离散,但实验结果可为菌种差异性分析提供理论帮助。结论 MALDI-TOFMS对天然牦牛酸奶中德氏乳杆菌特征性分析具有较强应用价值。     

聚合酶链式反应和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法鉴定克罗诺杆菌

目的 采用聚合酶链式反应(PCR)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术快速鉴定克罗诺杆菌的方法,实现对该菌显色培养基上生长的可疑菌落高通量、低成本初筛。方法 通过内转录间隔区(its)基因设计针对克罗诺杆菌的属特异性引物,以7株参考菌株为对照,对2013年国家食品安全污染物监测网上报、初步鉴定为克罗诺杆菌的214株菌株进行复核鉴定。同时随机挑选其中84株菌,采用MALDI-TOF-MS技术和VITEK革兰阴性细菌鉴定卡鉴定。结果 7株参考菌株的PCR结果与对应大小一致,214株待测菌株PCR结果均为阳性。84株菌MALDI-TOF-MS和VITEK鉴定的结果均为克罗诺杆菌,符合率为100%。结论 PCR和MALDI-TOF-MS技术具有高通量、低成本、耗时短等优势,可以实现大量可疑菌落的初筛,为我国克罗诺杆菌的监测和防控提供技术支持。     

鉴定乳制品中厌氧芽胞杆菌的3种方法比较

鉴定乳制品中的革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌。方法 采用生化鉴定、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定和16S rDNA测序三种方法,对乳制品中5株革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌进行鉴定。结果 生化方法鉴定出3株菌,而飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序法对5株菌都给出了鉴定结果。3种方法仅对其中1株菌的鉴定结果一致;飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序的鉴定结果一致性程度高,共有4株菌的鉴定结果一致;而生化方法的鉴定结果与这两种方法差异较大。结论 飞行时间质谱鉴定和16S rDNA测序可作为生化方法的补充,用于革兰氏阳性厌氧芽胞杆菌的快速鉴定。