壳聚糖在药液纯化中的应用研究

壳聚糖由于无毒无味、可生物降解、不会造成二次污染而在药液纯化中得到广泛的应用.综述了近几年壳聚糖在药液纯化中的应用及研究状况.包括壳聚糖对药液中指标性成分及多糖的影响、对重金属离子的吸附以及在分离纯化酶方面的应用研究.为进一步开发利用壳聚糖提供参考.     

金属螯合亲和层析在纯化重组类人胶原蛋白中的应用

研究了应用金属螯合亲和层析法纯化重组类人胶原蛋白的条件。分别考察了不同金属离子、平衡缓冲液pH值及两种洗脱方法对纯化结果的影响。结果表明,用锌离子螯合介质,pH7.5磷酸盐缓冲液平衡,上样后用100mmol·L-1氯化铵洗脱纯化效果最佳。纯化后重组类人胶原蛋白的纯度达98%,回收率为85.4%,纯化倍数为3.4。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与N端序列分析结果均证明所得纯品为重组类人胶原蛋白。     

壳聚糖微珠亲和层析介质的制备及其初步应用

目的制备壳聚糖(CTS)微珠亲和层析介质,并进行初步应用。方法采用多种化学方法对CTS的表面基团进行改造,使其活化。用此改性CTS进行羊抗人IgG及小牛血清纤维连接蛋白(FN)的纯化。结果此改性的CTS微珠粒径在40￣160μm之间,每克可溶胀至4ml。活化的CTS对人丙种球蛋白的吸附量为15￣25mg/gCTS,对明胶的吸附量为5.8￣6.5mg/gCTS。采用此方法纯化的羊抗人IgG及FN与Sepharose4B法纯化效果一致。结论已制备的壳聚糖微珠亲和层析介质,其性质稳定且价格较低,是一种可以广泛应用的亲和层析介质。     

锌离子螯合亲和层析分离纯化谷胱甘肽的研究

以谷胱甘肽的酵母抽提液为原料,用自制的以壳聚糖小球为载体、Zn2 为配基的金属螯合亲和层析柱分离纯化谷胱甘肽(GSH).用含0.5 mol·L-1NH4Cl的pH值4.2、0.02 mol·L-1的磷酸盐缓冲溶液洗脱,然后经浓缩、冷冻干燥处理,即得到分离纯化的GSH.结果表明,上柱谷胱甘肽抽提液浓度为 132.30 mg·(100 mL)-1、上柱pH值为7.0时,谷胱甘肽回收率为68.61%;洗脱液中氯化铵浓度为0.5 mol·L-1、洗脱pH值为6.0时,谷胱甘肽洗脱回收率达到44.47%.     

仙人掌超氧化物歧化酶的纯化及其部分性质研究

10 0 0g仙人掌茎经匀浆、硫酸铵分级沉淀、SephadexG - 75凝胶层析和DEAE - 5 2离子交换层析 3个步骤 ,将仙人掌SOD纯化到SDS -PAGE均一纯 ,得白色粉状SOD 0 8985g ,比活 910U/mg,活力回收 4 3 1% ,纯化倍数 76。该酶相对分子质量 37 1kD ,H2 O2 和KCN的抑制实验结果表明为Cu、Zn -SOD。该酶的最大紫外吸收在 2 75nm处。 5 0℃保温 15 0min ,SOD的活性不变 ,在pH =5 0～ 9 0时SOD有较好的稳定性     

仙人掌超氧化物歧化酶的分离纯化及鉴定

介绍了分离纯化仙人掌SOD的工艺方法。鉴定用该法提取的SOD为Cu ,Zn -SOD。     

猪血红细胞超氧化物歧化酶的纯化研究

对猪血中超氧化物歧化酶(SOD)的纯化工艺进行了研究。首先将红细胞中加入Triton X-100溶液,用冻融的方法使细胞膜破裂溶血。然后依次用有机溶剂乙醇-氯仿去除血红蛋白、磷酸盐萃取、丙酮沉淀和热处理的方法进行初步纯化得到粗酶液,最后上DEAE Sephadex A-50层析柱,经PAGE电泳检测,得到的SOD达到电泳纯,酶的比活力为5863 U.mg-1,回收率达到61%。     

高效液相色谱法纯化超氧化物歧化酶的新工艺

建立了丙酮沉淀-高效液相色谱法制取高纯度超氧化物歧化酶(SOD)的新工艺.利用此法制得电泳级的SOD,总活性回收率为86.0%,纯化倍数提高52倍.小规模的生产实验表明该法具有工艺简单、成本低、效率高、生产周期短等优点.     

牛血超氧化物歧化酶的纯化

比较了几种初步纯化超氧化物歧化酶方法,并进行了优化组合。研究了用软基质阴离子交换柱（ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ）和凝胶柱（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ）分离纯化ＳＯＤ的工艺条件。利用建立的方法纯化了来自牛血的超氧化物歧化酶,整个工艺过程总活性回收率为６５％。比活为５４２３ｕ／ｍｇ,纯化倍数提高至６１．６倍。     

超氧化物歧化酶人工细胞（AC—SOD）在化妆品中的应用研究

本研究了超氧化物歧化酶人工细胞（Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ简称ＡＣ－ＳＯＤ）作为活性添加剂在化妆品中的应用，考察了均质乳化条件、膏体配方的选择组合对ＡＣ－ＳＯＤ稳定性的影响。结果表明，ＡＣ－ＳＯＤ是一种稳定的ＳＯＤ制剂，在化妆品中可以充分保存其活性，常温下在保质期内活力损失很小，可以充分发挥其皮肤保健之功效。     

超氧化物歧化酶的固定化及其酶学性质

目的制备固定化超氧化物歧化酶(SOD),并分析其酶学性质。方法以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,制备固定化超氧化物歧化酶。以邻苯三酚自氧化法分别测定溶液酶与固定化酶的活力,并计算回收率。对固定化酶的温度和pH稳定性、半衰期、重复使用的回收率及米氏常数(Km)进行测定。结果固定化超氧化物歧化酶活力为333U/g,酶活回收率为86.32%,半衰期为43.8d;固定化酶室温保存5d后,相对酶活力仍保持在80%以上,最适反应温度为45℃,使用一次后回收率为70.12%,重复使用两次后回收率为51.72%;固定化酶与溶液酶在pH6时活性最强,Km分别为0.18mmol/L和0.16mmol/L。结论该固定化酶较溶液酶的稳定性得到提高,便于贮存,在食品、药品、日用品等领域有良好的应用前景。     

石榴叶超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

利用有机溶剂分级沉淀法从石榴叶中分离出超氧化歧化酶(SOD),研究了分离纯化的最佳工艺条件,并对其性质进行了探讨。结果表明,当石榴叶(g)与磷酸缓冲液(mL)之比为1∶2,磷酸缓冲液pH值为7.6,提取时间为1.5 h。氯仿-乙醇混合物量为提取液的0.25倍,丙酮量为粗酶液的1倍时,分离效果最佳。温度0~60℃,pH 4~9范围内酶的活性稳定。过氧化氢和乙醇-氯仿试验表明,该酶属Cu.Zn-SOD。研究结果为SOD提供了新的酶源。     

超氧化物歧化酶的固定及其活性检测

目的探讨超氧化物歧化酶(SOD)的固定及固定化SOD活性的检测方法。方法以淀粉为载体,对SOD进行固定,采用改进的邻苯三酚测活法(以Vc为终止剂),并结合过滤或离心的方法去除沉淀,测定固定化SOD的活性。比较过滤法与离心法,及过滤法与经典邻苯三酚法测定酶活性的差异,并检测过滤法的线性、精密性和准确性。结果过滤法检测SOD活性的精密性较离心法高,与经典邻苯三酚法检测结果差异无统计学意义,在SOD浓度为6~60μg/ml范围内,SOD活性值与浓度线性关系良好(r=0.999 5),精密性及准确性良好。固定化SOD的比活性为1 730.07 U/g,酶活回收率为53.3%。结论以淀粉为载体固定化SOD效果好,经改进的邻苯三酚法可用于固定化SOD的活性测定。     

超氧化物歧化酶缓释片的制备及体外释放度检测

目的制备超氧化物歧化酶缓释片,并研究其体外释放。方法采用邻苯三酚自氧化法检测超氧化物歧化酶的释放度,并进行影响因素研究。结果超氧化物歧化酶缓释片体外释放曲线符合一级动力学方程,骨架材料的种类、用量、粒度及压片压力对药物释放有明显影响。结论制备的超氧化物歧化酶缓释片具有明显缓释作用。     

稳态荧光光谱法分析超氧化物岐化酶溶液的稳定性

目的考察超氧化物岐化酶(SOD)溶液在不同影响因素下的活性及构象变化。方法通过邻苯三酚自氧化速率法测定SOD溶液的活性,利用稳态荧光光谱法分析在不同影响因素(pH值、超声、变性剂盐酸胍)下SOD三、四级结构的变化与荧光光谱特征变化的关系。结果溶液pH值降低,SOD稳定性增加;在pH2.2～pH7.0的范围内,pH值与SOD比活力呈线性相关;随着pH值的降低,普通荧光最大发射波长由336nm蓝移至325nm。超声次数的增加使同步光谱谱带蓝移,SOD活性下降。随着盐酸胍浓度的升高,SOD活性逐渐下降;在盐酸胍浓度达2.1mol/L时,SOD最大荧光发射峰蓝移至312nm;经盐酸胍变性后,酶的荧光强度比天然态酶有所增加。结论采用稳态荧光光谱法可分析SOD溶液的稳定性。     

海藻糖对重组人铜锌SOD酶的保护作用

目的　考察不同工艺处理过程中不同糖类对rhCuZn SOD活性的影响。方法　酶液与不同保护介质均匀混合后 ,研究冷藏、反复冻融、真空干燥、冷冻干燥和保存等工艺过程前后酶活性的变化。结果　与其他糖类相比 ,海藻糖具有最好的抗冷冻、抗脱水能力。保护作用与工艺过程具有一定的相关性。海藻糖的最适添加量为 5 %～ 10 % (w/v)。结论　为设计最佳的生物活性保护体系提供依据。     

细胞外超氧化物歧化酶基因转移及活性调控的研究进展

超氧化物(O2.-)与许多病理过程有关,通过细胞外超氧化物歧化酶(ecSOD)基因转移除去细胞外的超氧化物,对于治疗因氧化应激反应过强而引发的血管疾病具有广阔的前景。最近的研究已揭示了ecSOD的表达调控以及肝素取代等方面的相关机制,为探讨ecSOD如何与其他因素协同作用,从而调节血管功能的机理提供了新的思路。本文对ecSOD基因转移及活性调控的最新研究进展作一综述。     

绿豆胚超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

采用盐析、有机溶剂沉淀及ＤＥＡＥ－ ５２ 柱层析的方法,提纯了绿豆胚超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 。纯酶总活力８００６ Ｕ,总蛋白量为７－３ ｍｇ,比活力为１０９６－８ Ｕ／ｍｇ 蛋白,纯化６４５－２ 倍,活性回收率为４４－２％ 。对其理化性质分析表明：该酶的最大紫外吸收峰为２６０ ｎｍ ,为Ｃｕ、Ｚｎ ＳＯＤ,由２ 个亚基组成,亚基相对分子质量为１５０００。