采样方法对冷鲜鸡表面细菌DNA提取及高通量测序结果的影响

目的:比较涂抹法和冲洗法对冷鲜鸡表面细菌DNA提取及高通量测序结果的影响。方法:将4只冷鲜鸡对半分开,分别采用涂抹法和冲洗法采集其表面微生物,提取基因组DNA,对细菌16S rRNA基因V3~V4区进行聚合酶链式反应扩增,通过Illumina Hiseq测序平台对扩增产物进行高通量测序,使用QIIME等软件对测序序列进行分析统计。结果:两种方法采集的样品在细菌基因组DNA提取、菌群丰富度、多样性及菌群结构等方面均无显著差异(P0.05)。高通量测序结果表明,冷鲜鸡表面细菌菌群主要分布于7个门,10个属。变形菌门为优势菌门,占70%以上;希瓦氏菌属、假单胞菌属、不动杆菌属、嗜冷杆菌属和环丝菌属为优势菌属,分别占10%~20%。结论:两种采样方法对冷鲜鸡表面细菌DNA提取及高通量测序没有明显影响,但冲洗法比涂抹法简单易行,且不易发生二次污染,因此更具有实用性。本实验同时也为冷鲜鸡表面细菌的研究提供了数据资料。     

英开发出简化的基因组测序新方法

据物理学家组织网12月12日(北京时间)报道,英国研究人员简化了基因组测序的标准流程,首次无需进行文库制备便完成了DNA(脱氧核糖核酸)单分子测序。新方法仅需很少量的DNA就能获得序列数据,用量低于1纳克(10亿分之一克),为常规测序方法的1/500到1/600。文库制备是指从测序前基因组样本中提取不同长度的DNA片段,这一过程不仅费力、费时,还会浪费DNA,而新技术极大地减少了DNA的损耗,并缩短测序时间。该研究论文的第一作者、英国威康信托基金会桑格研究所的保罗.库普兰说:"用这种方法对病毒和细菌的基因组测序后发现,即使在相对较低的水平,也能够确定所检测的是何种有机     

红茶菌中优势菌种的分离鉴定和发育树分析

目的:试验主要对红茶菌进行优势菌种的分离鉴定,并根据鉴定结果对其进行发育树分析。方法:将红茶菌原液进行分菌培养,得到的菌种进行纯化。对纯化后的单菌落进行扩大培养,提取DNA。分别采用16S r DNA和ITS进行基因扩增,细菌采用通用引物27F和1492R,真菌采用通用引物ITS1和ITS4进行扩增并对扩增产物进行BLAST分析。在数据库中对比基因相似度并通过Mega6.0分析,构建菌种发育树。结果:经过单菌落纯化,得到单一外表的醋酸菌和酵母菌。通过PCR扩增和凝胶电泳得出醋酸菌1500bp左右,酵母菌500bp左右。通过测序,将测序结果在BLAST中进行比对,将相似性基因通过Mega6.0分析,分别得到菌种发育树。结论:在生物学鉴定和系统发育树分析后,初步确定C1为醋酸杆菌Acetobacter sp.M1T5B1,1406bp。A1为异酒香酵母Brettanomyces anomalus,486bp。     

2013—2016年泉州市感染性腹泻病例中沙门菌血清学鉴定及耐药性分析

目的 分析2013—2016年泉州市食源性疾病监测哨点医院感染性腹泻病例中沙门菌的血清型及细菌耐药性,为临床合理用药提供参考。方法 对送检的腹泻患者标本进行沙门菌增菌培养和分离鉴定,采用传统玻片凝集法和液相悬浮芯片技术(xMAP)法进行血清学分型,微量肉汤稀释法进行药敏试验,用Excel软件处理数据。结果 460份标本中有73份检出沙门菌,共分离到沙门菌73株(15.87%),检出11个血清型,主要血清型为圣保罗沙门菌(42.47%,31/73)、阿雷查瓦莱塔沙门菌(16.44%,12/73)和布利丹沙门菌(12.33%,9/73)。玻片凝集法检出61株(83.56%,61/73)完整血清型,12株不确定血清型,液相悬浮芯片技术法确定了71株(97.26%,71/73)完整血清型,仅2株未确定。药敏试验显示沙门菌对头孢唑林、头孢替坦和妥布霉素3种抗生素的耐药率高达100.00%(73/73),其次为阿米卡星(95.89%,70/73)和庆大霉素(84.93%,62/73),对厄他培南、环丙沙星、左氧氟沙星、呋喃妥英这4种抗生素不具有耐药性。结论 泉州市感染性腹泻病例中沙门菌已对多种抗生素产生较高的耐药性,临床上应及时了解沙门菌的血清型分布及其耐药情况,合理选择抗菌药物。     

市售普洱茶中真菌群落构成和物种多样性分析方法研究

目的 综合应用传统分离培养、内部转录间隔区(ITS)测序和高通量基因组学测序技术,建立分析市售普洱茶中真菌群落构成和物种多样性的新方法。方法 按照GB 4789.15—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》对普洱茶样本进行可培养真菌检测和分离纯化,对分离到的菌株进行ITS测序并在NCBI数据库中进行Blast分析;采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取普洱茶样本中真菌基因组DNA,进行聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增子测序,并对高通量测序数据进行OTUs聚类,开展物种构成及多样性分析。结果 通过传统分离培养方法获得12株真菌,主要为曲霉和毛霉,其中黑曲霉占比最高(25.00%,3/12)。基因组学的物种分布结果显示,普洱茶样本中的真菌物种多样性和均匀度较低,存在数量占比较高的优势物种;占比最高的为子囊菌门(74.03%),属的水平上以芽生葡萄孢酵母属为主(49.43%),曲霉属占比较低(14.04%)。结论 本研究综合应用传统分离培养、ITS测序和高通量基因组学测序技术,构建了普洱茶中真菌群落构成和物种多样性分析的新方法,为普洱茶中微生物群落构成及其对品质和安全性影响的进一步研究提供了思路和参考。     

乌梅提取液对李斯特菌抑菌机理

运用流式细胞仪研究乌梅提取液对李斯特菌的抑菌机理。首先通过抑菌实验确定乌梅提取液对李斯特菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.625mg/mL,然后用1、2、4倍MIC的乌梅提取液对李斯特菌进行处理,通过流式细胞仪对其前向散射光(FSC)变化、DNA含量变化、细胞膜电位变化、细胞周期变化和Annexin V-FITC/PI双标记法、细胞内Ca2+含量变化指标进行检测,探索抑菌机理。结果表明,乌梅提取液通过破坏李斯特菌的细胞膜系统和阻滞DNA的合成抑制其生长繁殖。     

1 株素食者产雌马酚肠道菌的分离与鉴定

以素食者粪便为样品,大豆异黄酮为底物,对产雌马酚的肠道菌进行分离培养及鉴定。采用紫外光谱法对雌马酚定性、定量测定,用肉眼观察、扫描电镜、生理生化、16S rDNA全序测序方法对分离得到的LJ-G1肠道菌进行菌株鉴定。结果表明：麦康凯和BHI培养基、厌氧平板划线培养法更适于产雌马酚肠道菌的分离筛选。采取10 g粪样稀释到10-5接种,在pH 7.3、温度37 ℃、厌氧培养36 h的条件下,培养基中雌马酚产出量达到10 μg/mL以上。经鉴定分离得到的LJ-G1菌株为G－杆菌;根据生理生化反应结果,查阅《常见细菌系统鉴定手册》,确定LJ-G1为河生肠杆菌;16S rDNA全序测序显示与肠杆菌同源性达99%。     

广东省首起米粉米酵菌酸中毒病原菌鉴定研究

目的对广东省首次因食用河粉引起米酵菌酸中毒的病原菌进行检测、鉴定和分析。方法病原菌的分离和鉴定参照GB/T 4789.29—2003《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》,同时采用16S rDNA序列测序进行分子鉴定。结果 31份食物中毒相关食品样品中有10份检出伯克霍尔德菌(28株),包括唐菖蒲伯克霍尔德菌(15株)、洋葱伯克霍尔德菌(3株)、越南伯克霍尔德菌(3株)等,经16S rDNA的序列测定、产毒培养、米酵菌酸测定、毒力试验等分析,在3份样品中检出14株可产生米酵菌酸的唐菖蒲伯克霍尔德菌。结论采用生化并结合16S rDNA序列测定鉴定唐菖蒲伯克霍尔德菌,结合产毒试验可确定为引起米酵菌酸食物中毒的是唐菖蒲伯克霍尔德椰毒致病种。     

冰鲜鸡肉贮藏过程中微生物菌相变化分析

应用基于16S rDNA的PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术对冰鲜鸡肉微生物多样性进行研究。分别取鸡胸肉和鸡腿肉贮藏0、3、5、7、9d的样品,提取样品总DNA,通过PCR扩增、变性梯度凝胶电泳,将16S rDNA(V6～V8区)的PCR扩增片段割胶测序确定样品中的微生物群落,与传统培养方法进行比较。传统培养方法表明：鸡胸肉和鸡腿肉在低温低氧分压条件下贮藏,导致腐败的优势菌相差不明显,且变化趋势相一致;DGGE图谱表明,初始污染数量较多的微生物不一定是腐败优势菌,能适应低温低氧分压的微生物最终成为腐败优势菌,且鸡胸肉和鸡腿肉的腐败优势菌有一定差异性。传统培养和DGGE割胶测序所得腐败优势菌的菌相不完全相同,综合两种研究方法,确定冰鲜鸡肉腐败优势菌为乳酸菌、大肠菌群、热杀索丝菌、腐败希瓦氏菌链菌和肉杆菌。     

叠氮溴乙锭-环介导等温扩增法快速检测空肠弯曲菌活菌

目的建立叠氮溴乙锭(ethidium monoazide bromide, EMA)-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测空肠弯曲菌活菌的方法。方法以空肠弯曲菌mapA基因为检测靶基因,纯培养物提取模板进行LAMP反应,检测空肠弯曲菌LAMP灵敏度、EMA曝光照射时间试验和使用浓度试验。结果空肠弯曲菌LAMP检测灵敏度为800 CFU/mL;曝光照射时间为5 min; EMA终浓度50μg/mL以下时不会抑制空肠弯曲菌活菌的DNA扩增,终浓度为1μg/mLEMA能有效抑制4×10~4CFU/mL空肠弯曲菌死菌扩增; 1%活菌混合体系中EMA-LAMP检测结果为阳性。结论 EMA-LAMP方法能有效快速检测空肠弯曲菌活菌。     

一株蛋白酶产生菌的分离鉴定

从郑州奶牛场土壤样品中分离到一株芽孢杆菌,命名为A—19菌株。该菌株有较高的蛋白酶活性,37℃、pH7．0培养48h后,其蛋白酶活力可达63．5U/mL。菌体生长专性需氧,有运动性,粗糙型菌落,氧化酶试验阳性,DNA（G＋C）的摩尔分数为47％。该菌株的16SrDNA序列与芽孢杆菌属有很高的同源性,Bacillus vallismortis（99．61％）,B．subtilis（98．81％）,B．amyloliquefaciens（98．95％）,B．licheniformis（97．93％）。通过其生理生化特征和16S rDNA序列相似性的系统发育分析,确定A—19菌株属于芽孢杆菌属。该菌的16S rDNA序列已被GenBank收录,序列登陆号为EU561347。     

氮离子注入赤藓糖醇生产菌诱变筛选高产菌株

为了获得赤藓糖醇高产菌株,以酿酒酵母NJWGYH30566为研究对象,利用N+注入进行诱变。注入N+的能量为15keV,剂量为20×1014cm-2、40×1014cm-2、60×1014cm-2、80×1014cm-2、100×1014cm-2、120×1014cm-2。结果表明最佳注入剂量为80×1014cm-2,选育出一株赤藓糖醇高产菌株H-32,赤藓糖醇产量提高17.52%,且副产物甘油降低26.9%,经连续10代遗传稳定性试验考察,其高产性能稳定,极大提高了生产效率。     

响应面法分析优化米曲霉产β-葡萄糖苷酶液体发酵培养基

利用快速有效的响应面分析法对米曲霉ASPE0485产β-葡萄糖苷酶的发酵培养基进行优化,利用PlackettBurman显著因子实验和Box-Behnken响应面分析优化了β-葡萄糖苷酶产生菌的发酵培养基,确定摇瓶发酵的最佳培养基组成为(%,w/v):玉米芯3.8%、大豆蛋白胨0.5%、KH2PO40.5%、MgSO4.7H2O0.05%、CaCl20.05%、吐温-800.27%和接种量5.3%;在此条件下发酵,得到酶活为21.1U/mL比原始酶活(17.65U/mL)提高了19.55%。     

WD02菌株产红色素的稳定性研究

从温度、pH值、光照、氧化剂及还原剂、金属离子等方面研究WD02菌株所产红色素的稳定性.结果表明,该红色素在低于40℃条件下较为稳定;对光照较为稳定;在pHS～7环境下保存率较高,适用于微酸性食品的着色;该红色素对还原剂很稳定性,而对氧化剂非常不稳定;Cu2+、Zn2+、M2+、K+、Na+等金属离子对红色素有增色效应,而Fe3+、Fe2+和Ca2+等金属离子能破坏WD02菌株红色素水溶液稳定性并造成红色素损失.     

一株银杏内生真菌红色素稳定性的研究

真菌色素是一个极具应用潜力的食用色素来源。一株从银杏枝条分离的内生真菌SX01,能产生大量的红色素,经鉴定该菌属于产紫青霉（Penicillium purpurogenum）。该菌在PDA液体培养基中静置培养后,经过离心、过滤可得到红色素,该色素为水溶性色素。通过分析红色素特征吸光值的变化,研究了光照、pH、温度、金属离子对该红色素稳定性的影响。结果表明,色素溶液对温度和光照较为敏感,色素在温度〈60℃的稳定性较高,但当温度上升至80℃以上后,色素稳定性较差。色素对光照较为敏感,长时间光照可以使色素色价大幅度下降,影响色素品质。该色素对pH是稳定的,色素提取液在pH10时色价甚至有所增高。金属离子对该色素稳定性影响较小,Zn2+有一定的增色效果,Cu2+、Al3几乎无影响,Fe2+和Fe3+对其有不良影响。     

双轴向载荷下苎麻织物经纬向的交互作用

针对植物纤维织物在实际使用条件下经纬向载荷交互影响的问题,对苎麻纤维织物在(0°、15°、30°、45°、60°、75°、90°)7个面内方向和经向设置不同载荷阈值时的力学性能进行双向拉伸试验,并用数字散斑相关方法对其应变场进行表征.结果表明:纬向载荷对经向载荷的影响较大,随着纬向载荷的线性增加,经向载荷非线性增大,经...     

多黏类芽孢杆菌JSa-9电转化方法的优化

为建立多黏类芽孢杆菌JSa-9菌株的高效电击转化体系,本实验研究菌体培养时间、电场强度、电击缓冲液、质粒用量以及电击后复苏培养时间等因素对JSa-9菌株电转化效率的影响。结果表明：Paenibacillus polymyxaJSa-9培养至OD595 nm为0.3时,电转化效率最高,为0.12×103 CFU/μg DNA;用0.5 mol/L甘露醇、0.5 mol/L山梨醇以及10%甘油的电击缓冲液洗涤细胞,在电场强度17.5 kV/cm、电阻200 Ω,电容25 μF的电击条件下,加入1.0 μg/100 mL质粒DNA,复苏培养时间18 h,电转化效率达到约为0.36×103 CFU/μg DNA;制备P. polymyxa JSa-9原生质体,在电场强度5.0 kV/cm的电击条件下,加入0.8 μg/100 mL质粒DNA,电转化效率较感受态电转提高到约1.0×103 CFU/μg DNA。     

蜂蜜中酵母菌的分离鉴定及蜂蜜酒的研制

采用稀释涂布平板法分离纯化蜂蜜样品中的菌株,并对其进行鉴定,并对蜂蜜酒进行了研制并对其挥发性成分进行测定。结果表明,从12份采自云南文山的蜂蜜样品中分离出5株酵母菌（Y3、Y5、Y7、Y9、Y10）,经5.8S rDNA-ITS 序列分析,结合形态学特征初步鉴定为暹罗接合酵母（Zygosaccharomyces siamensis）。5株菌用于蜂蜜稀释液发酵,其中菌株Y3发酵的蜂蜜酒酒香和果香浓郁,是较好的蜂蜜酒发酵菌株。以同时蒸馏萃取（SDE）-气质联用（GC-MS）技术对菌株Y3发酵的蜂蜜酒风味成分进行分析,共检测出41种挥发性成分,主要成分为2-苯乙醇（58.11%）和异戊醇（25.43%）。     

Experimental aflatoxin production in home-made yoghurt

Fungal growth and aflatoxin production by an aflatoxigenic strain during the manufacture of yoghurt are described. This completes previous studies which show that yoghurt may be a good substrate for aflatoxin production. Two factors were of special interest: (a) the temperature of the elaboration process (45 degrees C) and (b) the effect of lactic bacteria. Either during the elaboration of yoghurt or during its cooling from 45 degrees C to 4 degrees C, the necessary conditions required to start fungal growth are given; these are adequate enough for the synthesis of small quantities of aflatoxins. However our results do not clearly show that lactic bacteria have an influence on fungal growth and aflatoxin production.     

有机磷细菌PSB-2的解磷能力初探

从实验室的5株有机磷细菌中筛选到1株解磷能力强的菌株PSB-2。通过L9(34)正交设计研究其最优培养条件,添加不同金属离子对解磷能力的影响,置换培养液的卵磷脂对用2种有机磷农药的降解能力。结果表明:pH值对解磷能力的影响最大,菌PSB-2在最优培养条件下发酵液中有效磷含量可以达到9.610 mg/100g。最优培养条件是:葡萄糖15 g/L,硫酸铵1.0 g/L,pH 6.0,培养60 h。金属离子Mg2+、Ca2+、Na+、Mn2+能够显著提高解磷能力,而Al3+、Fe2+对菌体的解磷能力有明显抑制作用(P<0.05)。PSB-2菌对有机磷农药保棉丰有一定的降解能力。