从马肝脏提取纯化RNA方法的探索

<正>核酸是生物体的基本组成物质,是重要的生物大分子,从高等动物,植物到简单的病毒都含有核酸。核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类。RNA是基因表达中间产物,同时也是RNA病毒的遗传物质,对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。RNA分离纯化技术是分子生物学研究中的基本技术,TRIZOL试剂法提取RNA既快速有高效,TRIZOL法适用于人类、动物、植物、微生物     

血液基因组 DNA 提取方法的改良

目的：探讨改良血液样品基因组 DNA 的提取方法，制备纯化的高分子量 DNA。方法将312份新鲜血液样品随机分为2组：A 组（90份）和 B 组（222份）。A 组采用常规基因组 DNA 提取方法。B 组采用改良的基因组 DNA提取方法，其基因组 DNA 提取方法改良之处：1）在血液样品中加入细胞裂解液 CL 后采用手工震荡，并离心2 min 40 s；2）震荡混匀后将样品分装成3管，然后将缓冲液 GS 加入第1管吹打溶解后吸取上清，并加入第2管，再吹打溶解后吸取上清加入第3管，继续吹打溶解；3）加入缓冲液 GB 后再58℃水浴过夜16 h。结果改良的血液样品 DNA 提取方法能够提高产率，提高纯度，获取更多高分子量的 DNA，相对于常规基因组 DNA 提取方法有显著提高。结论改良的血液基因组 DNA 提取方法操作简便，能有效地避免操作导致 DNA 链断裂，提高 DNA 的完整性及纯度。     

基于自主核酸提取方法分析单油井采出液微生物

近年来基于培养和非培养方法研究油藏微生物的报道已经不少,但鲜有基因组总DNA提取技术与微生物检出性的报道。文章通过对长庆油田Q2YG138140油井采出液进行现场分类分级处理,将原样本即时分为 油相及水相（分成4种孔径（10.00,1.00,0.22,0.10μｍ）膜滤）作为研究对象,结合自主原油基因组总DNA提取技 术对该油井采出液样本进行菌群分析。结果表明：油相样本共检出11门、25纲、43目、66科和78属,水相样本共检出17门、35纲、64目、105科和150属。该自主提取方法对油藏常见多种菌门及菌属基因组DNA的提取均具有 较好的适用性。油相中,检出11属为“其它”,相对丰度10.02％;水相中,检出26属为“其它”,相对丰度17.34％,6属为未分类,相对丰度0.40％,该方法针对未知微生物和生物量相对较低的极端环境微生物仍均具有一定的 检出能力。4种滤膜（10.00,1.00,0.22, 0.10μｍ）分别检出10门、8门、10门和13门,59属、65属、79属和82属。0.10μｍ滤膜检出的菌群多样性明显多,进一步表明该自主提取方法适用于油水微生物的多样性分析。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB法、Trizol法以及EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明:改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S条带亮度是18S条带亮度的2倍,将其反转录获得的c DNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述:EASY spin Plus植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

浅谈大学体育教学中的自主学习模式

目的:建立一种稳定高效获得广山药总DNA基因组的提取方法,为同科属及同类植物总DNA提取提供参考依据,便于应用分子生物学进行鉴定。方法:通过采用试剂盒法、改良CTAB法和SDS法对广山药的新鲜叶子、新鲜块茎、干燥块茎和新鲜嫩茎进行DNA提取,在进行琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法进行纯度检测。结果:3种方法均可以从不同的提取部位中提取到基因组DNA,但通过天根新型植物DNA提取试剂盒提取到的DNA纯度最高,CTAB法次之,SDS法最差。结论:利用市售总DNA提取试剂盒提取DNA,方法简便高效,所提DNA效果好。     

HBV感染者DNA模板库的制备

目的:提取乙型肝炎病毒感染人群基因组DNA,并制备成DNA模板供予HBV感染相关的基因多态性研究之用。方法:收集HBV感染人群抗凝全血,采用盐析法提取基因组DNA。结果:收集的HBV感染人群包括无症状携带者、慢性肝炎、重型肝炎、肝硬化以及肝癌,同时收集了一部分健康献血员病例。结论:模板库中主要为HBV持续感染病例,采用盐析法提取的DNA纯度高且稳定。     

一种提取真菌基因组DNA的新方法

真菌基因组高通量测序对DNA纯度和含量要求较高,通过月桂酸钠法、CTAB法和酶裂解法分别提取真菌基因组DNA,然后进行琼脂糖凝胶电泳和Nanodrop 1000测定DNA浓度和纯度,结果证明月桂酸钠法提取的真菌基因组总DNA更适合应用于真菌基因组高通量测序。     

氧氟沙星在沉积物-水界面上的降解动力学研究

氧氟沙星大量进入水环境,具有较高的生态风险.探明氧氟沙星在沉积物-水界面上的降解规律有助于对其水环境污染进行控制.本研究探索了从沉积物中提取和测定氧氟沙星的方法,研究了其在沉积物-水界面上的降解动力学过程以及微生物对该过程的影响.研究结果表明利用1:1的乙腈和Mcllvina缓冲溶液(p H=10)可以从沉积物中有效提取氧氟沙星,提取回收率大于90%.降解动力学结果显示:在微生物抑制条件下,氧氟沙星降解微弱;在微生物未抑制条件下氧氟沙星的降解基本符合一级动力学和二级动力学过程,半衰期分别为10.1天和7.2天.研究暗示可以通过工程措施增强水环境中微生物的群落多样性和活性,达到促进水体中氧氟沙星的降解、降低环境风险的目的.     

DE氧化沟工艺微生物群落结构及其动态变化研究

为了研究DE氧化沟工艺中微生物群落结构及其动态变化,分别从DE氧化沟工艺中好氧区、缺氧区、厌氧区取活性污泥,通过细胞裂解直接提取颗粒污泥细菌基因组DNA。通过PCR-DGGE技术对DE氧化沟工艺中的微生物多样性进行分析,以细菌和古细菌16srRNA基因通用引物530F/1490R对DE氧化沟活性污泥中提取的细菌基因组DNA进行PCR扩增,扩增产物经纯化后用于变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析。结果显示,DE氧化沟工艺中活性污泥的微生物群落非常丰富,在好氧区微生物的种属达到12种,缺氧区为16种,厌氧区为14种;DE氧化沟工艺不同单元都有一些各自的特有种属和共有种属,工艺中的微生物群落演替不明显,微生物群落相似性为64.7%,群落结构较为稳定。     

浅谈芒果基因组DNA的提取

芒果是重要的经济果树之一,富含多酚、多糖、单宁等其他次生代谢干扰物质,因此其基因组DNA的获取和纯化较为困难。笔者对芒果基因组DNA提取方法进行了探讨,常用的获取方法有SDS法、CTAB法和试剂盒法,而CTAB法提取效果较好。