蛹虫草虫草多糖的分离纯化、分子构象分析及抗氧化活性研究

选用蛹虫草粗多糖进行分离纯化,借助二乙氨基乙基纤维素52(DEAE-52)柱层析得到虫草中性多糖(Cordyceps militaris polysaccharide,CMP)。采用紫外可见光谱(UV-visible)和傅里叶变换红外光谱(fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)表征CMP,同时选用气质联用技术(GC-MS)测定单糖组成,并采用多角度激光光散射凝胶渗透色谱和示差联用(gel permeation chromatographymulti-angle laser light scattering-reflective index,GPC-MALLS-RI)测定CMP重均分子质量(MW)和均方根旋转半径(Rg),同时分析CMP在溶液中的构象。此外,对粗多糖和CMP的抗氧化活性进行比较。结果表明:经DEAE-52水洗的中性多糖CMP质量分数为76. 63%,比粗多糖(44. 95%)纯度提高70. 48%;在260 nm和280 nm处均无明显紫外吸收; FT-IR说明CMP为α-构型多糖;其单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为1∶3. 90∶1. 51; MW和Rg分别为2. 432×107g/mol,31 nm;CMP在溶液状态下为高枝化度结构。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2'-联氨-双-(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)自由基清除实验表明,CMP具有明显的抗氧化活性,且自由基清除率高于粗多糖。     

蛹虫草多糖的纯化及其分子量的测定

以蛹虫草子实体为材料,对水提醇沉、硫酸锌盐去蛋白后获得蛹虫草粗多糖（CP）进行分离纯化。采用膜分离技术、DEAE．52柱层析及SephadexG-100柱层析对CP进行分离纯化,并使用高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定各组分多糖分子量,以表征不同路径所得多糖的分子量分布。结果表明：CP经膜过滤、DEAE-52柱层析及SephadexG-100进一步柱层析得到多糖组分CP2-c2-s2,经HPGPC法鉴定,CP2-c2-s2为均一多糖组分,其平均分子量为20200Da。     

蛹虫草培养基多糖的提取及抗肿瘤活性研究

为综合利用蛹虫草小麦培养基,研究培养基多糖的提取和开发。在热回流水提法和超声波水提法单因素试验的基础上,采用热回流水提法正交试验筛选蛹虫草小麦培养基粗多糖最佳的提取工艺;用 MTT法检测了不同处理提纯多糖的抗肿瘤活性。结果表明热回流水提法提取培养基粗多糖效果优于超声波水提法;提取温度100 ℃、料液比1 g∶25 mL、提取3次、每次提取时间90 min,为最佳培养基粗多糖提取工艺;影响粗多糖提取效率的4个因素的主次关系是：提取温度>提取时间>提取次数>料液比;粗多糖的得率随着醇沉浓度的提高而提高。MTT试验发现质量浓度为5 mg/mL、培养时间72 h,培养基脱脂脱蛋白多糖A对HepG2肝癌细胞抑制率可达到83.02%,培养基脱脂多糖B的抑制率可达到75.39%,培养基未脱脂脱蛋白粗多糖C抑制率为30.61%,提纯多糖表现出较高的抑制率;100 ℃热回流水提蛹虫草子实体脱脂脱蛋白多糖F,质量浓度为5 mg/mL、培养72 h后,对Hepg2细胞抑制率平均值达到92.974%,与对照顺铂（SB）无显著差异,与多糖A差异显著。     

蛹虫草多糖提取纯化工艺研究

为能更好地产业化开发利用蛹虫草,对蛹虫草多糖的提取纯化工艺进行研究。通过正交试验探讨了料液比、提取温度和提取时间对多糖提取率的影响,在此基础上通过分析不同的醇沉和去蛋白纯化条件,确定蛹虫草多糖的最佳制备工艺。结果表明,最佳工艺为先在液料比30∶1(V∶m)、提取温度70℃和提取时间4h下提取多糖,然后在浓缩液浓度为14%、乙醇溶液浓度为80%下进行醇沉,再调节多糖溶液的pH=3并加入4%的硫酸锌。整个工艺多糖提取率为8.97%,纯度高达68.9%,有良好的去杂纯化效果且多糖损失较小。该研究为产业化生产蛹虫草多糖提供了基础数据。     

蛹虫草培养基多糖的超声波提取及抗氧化性研究

研究用超声波提取蛹虫草培养基中粗多糖的工艺条件,并比较了该多糖与蛹虫草子实体多糖的抗氧化性。结果表明:在料液比1∶30(质量比),乙醇用量15 mL,超声波功率70 W,超声时间90 min的条件下,蛹虫草培养基中多糖含量为3.30%。在0.2 mg/mL～1.0 mg/mL浓度范围内蛹虫草培养基多糖与子实体多糖抗氧化能力相似,且具有一定的量效关系。红外显示两种多糖结构相同。     

长白山虫草属蛹虫草多糖的抗氧化活性及其对果蝇寿命的影响

以长白山虫草属蛹虫草的胞内与胞外多糖为研究对象,分别检测其体外抗氧化能力。以果蝇种群的半数死亡时间、平均寿命、平均最高寿命及寿命延长率为指标,评价胞内、外多糖对果蝇寿命的影响。试验结果表明:胞内、外多糖具有良好的体外抗氧化能力,且基本随浓度的提高而增强;胞内多糖的高剂量组能显著提高雌性果蝇寿命,延寿率可达11.63%;中、高剂量组均能显著提高雄性果蝇的寿命,延寿率分别达13.20%、16.46%,且对雄性果蝇的延寿作用强于雌性。胞外多糖方面仅中剂量组能显著提高雄性果蝇的寿命,延寿率为9.20%,延寿作用不明显,显著低于胞内多糖。本文通过探究蛹虫草胞内和胞外多糖的抗氧化及延缓衰老的作用,为进一步研发蛹虫草功能性食品提供理论依据。     

一种蛹虫草多糖的结构特征及体外抗氧化活性

采用分子筛层析法从人工培养蛹虫草子实体中分离纯化得到一种多糖W-CBP80Ⅰ,进而分别采用凝胶渗透色谱（GPC）、气-质联用（GC-MS）、红外光谱（IR）、核磁共振(¹H NMR和¹³C NMR)研究其理化性质和结构特征。结果表明:W-CBP80Ⅰ含有α-糖苷键,并主要由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成。它主要成分为低分子量多糖,分子量为8.93×10³。此外,W-CBP80Ⅰ具有体外清除DPPH,羟基和超氧阴离子自由基活性。      

蛹虫草乙醇分级多糖生理功能研究

为了探讨不同浓度乙醇分级虫草多糖的生理功能,以蛹虫草为材料通过液态深层发酵获得发酵液和菌丝体,用水浸提,以不同浓度的乙醇沉淀来获得蛹虫草胞内、胞外多糖,同时以果蝇为材料测定了不同浓度的乙醇分级虫草胞内、胞外多糖的抗氧化性、抗菌性等生理功能。结果表明,70%的醇沉多糖量最多,可使胞内、胞外多糖的得率分别为1.513 mg/mL、0.483 mg/mL;70%的醇沉胞外多糖具有较好的抗氧化性,可使果蝇体内的SOD值达到1.261 U/mgprot,比对照组高13.13%,使MDA值达到0.019 nmol/mgprot,比对照组低67.2%;70%的醇沉胞内多糖抗菌性最好,可使黑曲霉的抑菌圈直径达13.4 mm、大肠杆菌的抑菌圈直径达11.3mm,分别是对照组直径的2.19和1.85倍。     

蓝光对蛹虫草多糖含量的影响

蛹虫草菌种在两种不同的液体培养基(其中一种添加奶粉)中经摇发酵培养后,再在静置培养过程中以蓝光照射蛹虫草菌丝体,研究蓝光照射对其产生胞内和胞外多糖含量的影响。结果表明,在不含有奶粉的液体培养基表面生长蛹虫草菌丝体,其胞外多糖和胞内多糖含量受蓝光照射的影响而降低;而在培养基中加入奶粉以后,蓝光照射时也可降低胞内多糖的相对含量,但使蛹虫草胞外多糖含量稍有增加。     

蛹虫草多糖的亚临界水萃取及其抗氧化活性研究

以蛹虫草为原料,通过单因素和响应面分析实验对亚临界水提取蛹虫草多糖的工艺条件进行优化并对所得到的多糖进行结构鉴定和抗氧化活性测定。结果表明,优化得到的最佳提取条件为:p H为8,提取温度180℃,水料比为21∶1(m L/g),萃取时间为13 min时,萃取得率为7.13%,与传统热水浸提法相比,亚临界水浸提法在提取得率和提取时间方面均具有明显的优势(传统热水浸提法分别为1.72%,180 min)。传统热水浸提法和亚临界水浸提法得到的蛹虫草多糖均具有一定的还原能力,并且其DPPH·清除作用的IC_(50)值分别为0.324、0.314 mg/m L。红外光谱分析表明热水浸提和亚临界水浸提得到的蛹虫草多糖具有相同的结构特征。     

蛹虫草多糖的化学修饰及体外抗氧化能力

将醇沉法得到的粗多糖,经柱层析得多糖纯品。对多糖纯品进行硫酸化、羧甲基化、乙酰化化学修饰,用于体外抗氧化活性研究。纯化后的蛹虫草多糖可以被多种化学试剂修饰,其取代度大小的顺序是：羧甲基化＞乙酰化＞硫酸化;修饰后的多糖表现出不同程度的抗氧化活性,其中羧甲基化和硫酸化可以明显提高多糖的抗氧化能力,对烷基自由基清除率提高最大,分别达到95.19%和73.58%,其次是清除羟自由基和超氧阴离子自由基,乙酰化修饰后抗氧化能力有所下降。因此,采用合适的修饰方法,可以明显提高蛹虫草多糖的抗氧化活性。     

蛹虫草子实体多糖抗突变作用

研究蛹虫草多糖(CMPS)对环磷酰胺(CTX)诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核形成率及染色体畸变率的影响,探讨其抗突变作用。采用微核实验和染色体畸变实验技术,镜下观察并计数。结果显示:CMPS三个剂量组小鼠微核抑制率分别为29.75%、36.20%、44.48%,抑制率随剂量增多呈增加趋势,各剂量组与环磷酰胺组比较,均有显著性差异(p<0.05);CMPS三个剂量组染色体畸变率分别为36.7%±5.46%、20.8%±3.52%、18.1%±3.28%,畸变率随CMPS剂量增多呈下降趋势。蛹虫草多糖可降低环磷酰胺诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率及染色体畸变率,具有抗突变活性。      

北冬虫夏草多糖组分的分离纯化及结构研究进展

北冬虫夏草多糖是一类具有重要生理和药理活性作用的功能活性成分,是目前研究的热点之一。本文对北冬虫夏草多糖的提取、分离纯化、结构分析方面的最新进展进行了综述,并指出了当前存在的问题和今后发展的趋势。     

蛹虫草基质多糖纳米硒复合物的制备研究

以多糖为软模板,可以制备高效低毒的纳米硒-多糖复合物。本文以废弃的蛹虫草培养基质中提取的水溶性多糖为原料,研究了蛹虫草基质多糖纳米硒复合物的制备工艺及抗肿瘤活性。实验结果表明,在多糖浓度为10 mg/m L、亚硒酸浓度为0.4 mol/L、混合时间为4 h、滴加速度为1.5 r/min的条件下,可以制备出形貌理想、粒径适宜、稳定性良好的蛹虫草基质多糖纳米硒复合物。该复合物对Caco-2肿瘤细胞的生长具有一定抑制效果,且对细胞毒作用呈现出剂量依赖效应。      

蛹虫草多糖的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

以蛹虫草多糖(Cordyceps militaris polysaccharides,CMP)的提取得率为指标,通过单因素和响应面法对CMP的提取工艺进行优化。采用乙醇分级法,将CMP进行乙醇分级,分别得到4种多糖组分(CMP20、CMP40、CMP60和CMP80),并对不同多糖的得率、组分含量及抗氧化活性进行比较。结果表明,CMP的最优提取条件为温度84℃、液料比33∶1(m L/g)和时间128 min。在此条件下,实际提取得率为7.83%;CMP20、CMP40、CMP60和CMP80的得率分别为7.06%、15.07%、17.83%、25.23%。其中,CMP80的得率最高,蛋白含量最低,仅为1.47%;5种多糖均具有一定的抗氧化活性,CMP60的还原力和DPPH自由基清除率均为最高,CMP80的羟自由基的清除率最高。     

低分子肝素生物活性和功能的实验研究

目的研究低分子肝素增加皮肤血管通透性、改善局部血液循环的生物活性,为在化妆品中应用低分子肝素提供理论和数据支持。方法观察给药前后小鼠耳廓微循环的变化,进行比较研究。结果低分子肝素的效价越高,对微血管扩张和毛细血管开放程度影响越大,且持续时间长;低分子肝素对微循环的促进作用明显大于普通肝素;对熊果苷的皮肤渗透有促进作用。结论低分子肝素具有增加皮肤血管通透性、改善局部血液循环的生物活性,并能促进其它活性物质向皮肤渗透。     

蛹虫草胞外多糖的制备、结构分析及其免疫活性

本实验选择蛹虫草菌株CICC 14014液态发酵培养,提取蛹虫草胞外多糖,测定其理化性质及结构,并对其免疫活性进行研究。采用DEAE-Sephacel阴离子交换柱联合Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱纯化蛹虫草胞外多糖;利用高效液相色谱法测定多糖分子质量,利用傅里叶变换红外光谱鉴定多糖结构;选用BALB/c小鼠构建免疫损伤模型,考察其体质量及免疫器官指数变化情况,观察其脾脏组织切片形态,计算其T、B细胞增殖率,测定其血清细胞因子及免疫球蛋白质量浓度。结果表明,蛹虫草发酵液中多糖质量浓度为3.15 mg/mL,经分离纯化后所得单一多糖分子质量为3.67 kDa,纯度可达86.13%。动物实验结果表明,蛹虫草胞外多糖可明显提高免疫器官指数,能够有效促使T细胞（低剂量时）、B细胞增殖和免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）G、IgA、IgM、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-2、干扰素（interferon,IFN）-γ的分泌,免疫调节效果显著。研究结果表明蛹虫草胞外多糖可修复环磷酰胺导致的BALB/c小鼠免疫功能损伤,为开发蛹虫草发酵液资源建立了部分理论支撑。     

蛹虫草多糖的酶法修饰及其抗氧化活性

为了提高蛹虫草多糖的抗氧化活性,采用α-淀粉酶对蛹虫草多糖进行酶法修饰。以DPPH自由基清除率为响应值,运用响应面分析法对α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的工艺进行优化,研究酶修饰后蛹虫草多糖清除DPPH自由基、螯合Fe2+和还原力等抗氧化活性,并对其三螺旋体结构进行分析。结果表明:对修饰多糖抗氧化活性的影响因素从大到小依次为:加酶量、酶解温度、酶解pH值;α-淀粉酶修饰蛹虫草多糖的最优工艺条件为:酶解温度48.5℃、酶解pH 5.8、加酶量259.5U/g,在此条件下,酶修饰后蛹虫草多糖对DPPH自由基的清除率预测值为81.4%,验证值为(81.6±1.6)%,结果重现性好,可用于实际预测。抗氧化实验表明,α-淀粉酶法修饰后,蛹虫草多糖清除DPPH自由基和螯合Fe2+的EC50值分别为:0.0247、1.0120mg/mL,分别比酶法修饰前提高了55.1%和39.8%;同时,蛹虫草多糖的还原力也得到了显著提高(P<0.05)。三螺旋体结构分析表明,蛹虫草多糖经α-淀粉酶修饰后,其三螺旋体结构有轻微破坏,但仍然保持三螺旋体结构。     

低分子肝素生物活性和功能的实验研究

目的研究低分子肝素增加皮肤血管通透性、改善局部血液循环的生物活性,为在化妆品中应用低分子肝素提供理论和数据支持。方法观察给药前后小鼠耳廓微循环的变化,进行比较研究。结果低分子肝素的效价越高,对微血管扩张和毛细血管开放程度影响越大,且持续时间长;低分子肝素对微循环的促进作用明显大于普通肝素;对熊果苷的皮肤渗透有促进作用。结论低分子肝素具有增加皮肤血管通透性、改善局部血液循环的生物活性,并能促进其它活性物质向皮肤渗透。