双水相法萃取黑曲霉C2J6脂肪酶条件的优化

为提高黑曲霉C2J6发酵液中脂肪酶的分离纯化效率,采用PEG2000/(NH_4)_2SO_4双水相法进行萃取。探讨PEG2000质量浓度、(NH_4)_2SO_4质量浓度、p H、Na Cl质量浓度对脂肪酶萃取的影响,利用Box-Behnken响应面法优化萃取条件。结果表明:在PEG2000质量浓度35%、(NH_4)_2SO_4质量浓度21.60%、p H 6.90的条件下,脂肪酶萃取率高达85.92%,酶活力47.53 U/mL,比粗酶活力提高了3.02倍。此法简捷、高效,为黑曲霉脂肪酶的进一步纯化奠定基础。     

双水相萃取纤维素酶的研究

对PEG(聚乙二醇)/(NH_4)_2SO_4(硫酸铵)双水相提取纤维素酶进行了研究,考察了PEG分子量、PEG和(NH_4)_2SO_4质量分数、pH、温度等因素对纤维素酶分配系数和回收率的影响。结果表明:双水相最佳提取条件为PEG4000 20%,(NH_4)_2SO_425%,pH 4.5,温度45℃,在此条件下纤维素酶分配系数可达到23.94,回收率为91.68%。     

PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系萃取金银花中绿原酸的工艺优化

采用PEG/(NH_4)_2SO_4双水相体系优化金银花中绿原酸的提取工艺。以绿原酸萃取率为考察指标,在单因素试验基础上,确定PEG种类、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数和介质p H等关键影响因素,通过Box-Behnken试验筛选出绿原酸的最佳提取工艺条件。结果表明:PEG/(NH_4)_2SO_4双水相提取金银花中绿原酸的最佳工艺为:PEG4000质量分数28.7%、(NH_4)_2SO_4质量分数9.6%、介质pH 7。在此条件下,金银花中绿原酸萃取率为98.41%,该提取工艺环境友好,条件温和,提取率高,可为金银花资源的开发利用提供理论依据。     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。     

双水相体系萃取分离发酵液中的裂褶菌多糖

以裂褶菌发酵液为原料,采用双水相体系对裂褶菌多糖(SPG)的提取工艺进行优化。通过比较乙醇/Na_2CO_3、乙醇/K_2HPO_4、乙醇/(NH_4)_2SO_4、PEG/(NH_4)_2SO_4 4种组成的双水相体系对SPG的萃取率和分配系数的影响,确定最佳双水相体系;考察有机相和无机相的质量分数及料液比对SPG萃取率及蛋白质清除率的影响,进一步优化了萃取条件;最后采用红外光谱验证了多糖的结构。结果表明:最佳双水相萃取体系为25%乙醇/20%Na_2CO_3,最适料液比(v/w)为1:15时,SPG的萃取率达94.14%±1.59%,蛋白质清除率为93.35%±5.73%;红外光谱可以推断分离的多糖为裂褶菌多糖,含有呋喃环,糖苷键可能为α型。     

双水相萃取分离红高粱色素工艺研究

以双水相法萃取分离红高粱色素,选取聚乙二醇(PEG)/(NH_4)_2SO_4组成的双水相体系从高粱粒中萃取红高粱色素,确定双水相的组成成分PEG/(NH_4)_2SO_4对色素的影响。采用单一变量法,分别测定PEG分子量、PEG质量分数、(NH_4)_2SO_4质量分数、水浴温度、粗提取液体积萃取红高粱色素的最佳值,按照方案进行响应面分析,得到萃取高粱色素的最佳条件:PEG2000质量为1.8 g,(NH_4)_2SO_4质量为1 g,水浴温度为30℃,粗提取液体积为1.0 mL,加蒸馏水定量到10 g时,红高粱色素的萃取率最高。     

木瓜蛋白酶在金属螯合亲和双水相中分配行为的研究

利用金属螯合双水相亲和分配技术对木瓜蛋白酶的萃取进行了研究。考察了不同无机盐和浓度、PEG的分子量和浓度、亲和配基的加入量、pH、酶添加量对木瓜蛋白酶分配的影响,对不含亲和配基的双水相和含亲和配基的双水相萃取木瓜蛋白酶的效果进行比较。优化的分配条件为:质量分数17%PEG 4 000,1%PEG-IDA-Cu~(2+),18%Na_2SO_4,pH 7.0,酶添加量为2 mg/g,在此条件下,木瓜蛋白酶的酶活性回收率可达到90%左右,蛋白分配比达到5.11。结果表明,PEG 4 000/Na_2SO_4系统比PEG 4 000/(NH_4)_2SO_4系统更有利于木瓜蛋白酶亲和分配;无机盐的浓度和亲和配基的加入量是影响木瓜蛋白酶分配的关键因素;与不含亲和配基的双水相系统相比,亲和配基的加入可以提高木瓜蛋白酶在PEG相的分配,酶活性回收率和蛋白分配比可分别提高10%和2.0左右,表明金属鳌合双水相分配技术分离木瓜蛋白酶是可行的,为该体系的放大试验或规模化生产奠定了相应的试验基础。     

双水相体系萃取啤酒酵母中乙醇脱氢酶工艺

研究构建聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系对乙醇脱氢酶(ADH)进行提取。探讨了PEG分子量、PEG浓度、(NH_4)_2SO_4浓度、粗酶添加量对ADH纯化倍数的影响。结果表明,在(NH_4)_2SO_4浓度为18%、PEG800浓度为22%、粗酶添加量为5%所组成的双水相体系下,ADH的纯化倍数可达3.815。     

芦丁在异丙醇/无机盐双水相体系中分配行为的研究

采用异丙醇与无机盐构建双水相体系,以芦丁在两相间的相比R、分配系数K、萃取率E为指标,考察了无机盐种类、无机盐质量分数、异丙醇质量分数以及芦丁浓度对其分配行为的影响。实验结果表明:不同种类无机盐所构建双水相体系萃取率高低顺序为:K_2HPO_4Na_2SO_4(NH_4)_2SO_4Na_2CO_3K_2CO_3;以K_2HPO_4和异丙醇构建的双水相体系中,萃取率随盐浓度以及异丙醇浓度的增加呈先升高后降低的趋势,萃取率随芦丁浓度的增加而升高,但高浓度对萃取率的提高贡献有限。以质量分数28%的异丙醇和质量分数28%的K_2HPO_4构建的双水体系配系数为13,萃取率达93.4%。     

离子液体双水相萃取高效液相法检测青霉素G

建立了离子液体双水相萃取结合柱前衍生测定青霉素G的检测方法。由离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐[Bmim]BF_4和(NH_4)_2SO_4构成离子液体双水相体系萃取衍生后的青霉素G,并采用高效液相色谱对其进行检测。考察了离子液体与盐不同浓度组成对萃取效率的影响。结果表明,萃取率受[Bmim]BF_4和(NH_4)_2SO_4的浓度影响,当体系中[Bmim]BF_4的质量分数达到30%、(NH_4)_2SO_4的质量分数在24.72%-33.11%之间时,萃取率可达到93.21%±1.42%(n=6),定量下限(LOQ)为97μg/mL。这一体系能够有效地萃取并检测青霉素G,具有很高的灵敏度和萃取率。     

粗状假丝酵母产脂肪酶发酵条件的优化

利用粗状假丝酵母发酵生产脂肪酶,通过对粗状假丝酵母胞外脂肪酶发酵过程的培养基和发酵培养条件的优化,得出产脂肪酶的最佳条件:碳源为聚乙烯醇乳化的橄榄油和葡萄糖,氮源为蛋白胨和尿素,酵母浸出液4.5g/L,MgSO4.7H2O0.4g/L,K2HPO43.5g/L;反应温度30℃,培养基初始pH7.0,接种量为10%,摇床转速180r/min,培养24h。在此发酵条件下,发酵液的最高酶活达到12U/mL。     

PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取杏鲍菇多糖

采用PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取杏鲍菇多糖,研究了PEG的分子量、硫酸铵的浓度及PEG的浓度三个因素对杏鲍菇多糖在双水相系统中的分配系数和收率的影响,结果表明：当PEG4000浓度为21.33%,硫酸铵浓度为14%时,多糖的分配系数可达1.9529~2.0152,收率可达60.58~62.82,从而得出一种萃取杏鲍菇多糖的方法。     

PEG/(NH4)2SO4双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG（聚乙二醇）／（NH4）2SO4。双水相提取果胶酶进行了研究，考察了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响，结果表明：双水相最佳提取条件为PEG 100027％，（NH4）2SO419％，Na-Cl0．002％，pH5．0，温度50℃，在此条件果胶酶分配系数可达到14．0。     

双水相提取糖化酶的研究

利用PEG/(NH4)2SO4双水相系统从粗酶液中提取糖化酶。研究了PEG、(NH42)SO4、NaCl溶液浓度对糖化酶分配系数、回收率以及分相时间的影响,确定了提取糖化酶的最佳条件,即PEG溶液浓度为24%,(NH42)SO4溶液浓度为20%时,分配系数最小为0.0120,糖化酶回收率最高为98.81%。     

聚乙二醇/盐双水相萃取L-苯丙氨酸的研究

研究了聚乙二醇/盐双水相体系的成相行为及L-苯丙氨酸在双水相中的分配规律,其中包括聚乙二醇的分子量、聚乙二醇质量分数、盐的种类及加入量、L-苯丙氨酸初始浓度和pH对萃取分离的影响。当聚乙二醇1000的质量分数为27%,磷酸氢二钾的质量浓度为0.15g/mL,L-苯丙氨酸的质量浓度为10g/L,体系的pH为8.5时,L-苯丙氨酸的萃取率最高为99.5%,分配系数最大为186.5。     

PEG/（NH4）2SO4双水相体系萃取果胶酶

采用PEG/(NH4)2SO4双水相系统对果胶酶进行萃取分离,研究了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响,结果表明:双水相体系质量组成为PEG100027%,(NH4)2SO419%,NaCl0.002%,pH5.0时果胶酶的萃取效率较好,实验中分配系数最高可达为14.0。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

无患子提取物对Fusarium sp.发酵产脂肪酶的影响及其双水相萃取分离

研究了表面活性剂对Fusarium sp.的发酵产脂肪酶的影响.结果表明,添加无患子提取物的酶活为最高,说明无患子提取物是最佳的的表面活性剂,并且确定提取无患子提取物的液固比为6:1(mL∶g)时酶活达到最高.粗酶液经(NH4)2S04沉淀后进行双水相萃取分离,结果表明,采用质量浓度为30 g/dL的PEG(M 4000)和质量浓度为20 g/dL的NaH2 PO4时纯化系数F和萃取率Sf达到最高;经过双水相萃取后,该脂肪酶的纯化倍数可以达到7.92,回收率为48.30％.     

响应面优化双水相萃取分离酵母源MT工艺

采用聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4双水相体系,分离铜诱导的诱变酿酒酵母菌所表达的金属硫蛋白。以PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数及pH值为考察因素,萃取率为响应值,结合Design-Expert 8.0.6软件做响应面优化分析,优化到最佳萃取条件：PEG相对分子质量2 000、PEG和(NH4)2SO4质量分数分别为22.5%和17.46%、pH 5.98。获取的金属硫蛋白主要分布在上相,萃取率可达81.69%。此方法操作简单、高效、成本低,是酵母源金属硫蛋白分离提纯的新方法。