泸型大曲中根霉固态发酵产糖化酶条件研究

对泸型大曲中根霉菌株固态发酵产糖化酶的条件进行了研究。以糖化酶活力为评价指标,设计单因素实验,研究培养基水分含量、培养时间、培养温度对根霉产糖化酶的影响,在此基础上,利用Box—BenhnkenDesign的方法,对根霉菌株固态发酵产糖化酶的条件进行优化,结果显示泸型大曲中根霉菌株固态发酵产糖化酶的优化条件为培养温度29℃,培养基水分含量53％,培养时间164h,糖化酶的酶活力为2194．44U／g。     

利用餐厨垃圾酒糟离心液制取糖化酶

为了缓解酒糟离心液对环境的污染,达到废物资源化的目的,以餐厨垃圾酒糟离心液和麸皮为基础培养基,经黑曲霉发酵制取糖化酶.采用Plackett-Burman试验优化产糖化酶培养基,并对比自制糖化酶和工业酶制剂应用于餐厨垃圾乙醇发酵的能力.结果表明硫酸铵、氯化铵、酵母粉、豆饼、玉米粉、硫酸镁、磷酸氢二钾、氯化钙等8个因素中氯化钙为影响发酵的显著性因素.当氯化钙添加量为0.2%时,所产糖化酶的酶活最高,达3404.44 U/ml.自制糖化酶与工业酶制剂应用于餐厨垃圾酒精发酵时的酒精产量仅差6%.表明自制糖化酶可替代工业糖化酶运用于餐厨垃圾酒精发酵工艺中,这不仅可降低糖化酶的生产成本和餐厨垃圾酒精发酵成本,同时也可减少酒糟离心液对环境的污染.     

对几种相关酶联合固定化初探

用聚丙烯酰胺包埋,再以戊二醛交联联合固定了α淀粉酶、糖化酶和葡萄糖异构酶,对联合固定化的最适条件和联合固定化酶的性质进行了初步研究．结果表明联合固定化酶较固定化单酶更能发挥协同效应,能够将底物一步水解并转化为产物．文中所用的固定化方法与其他方法相比,固定化酶的稳定性、半衰期及酶固定化后活力均较高．在６０℃、ｐＨ５５时,α淀粉酶和糖化酶二酶的联合固定化酶的活力最高,其操作半衰期达到７９ｈ;在６０℃、ｐＨ７５时,α淀粉酶、糖化酶和葡萄糖异构酶三酶的联合固定化酶的活力最高,其操作半衰期达到９０ｈ．     

沉淀法去除糖化酶中转苷酶的研究

研究了磷钨酸，十二烷磺酸钠，单宁酸三种试剂去除液体曲糖化酶中转苷酶的方法，利用正交试验了每种方法的最优工艺条件，在最优工艺条件下，磷钨酸法转苷去除率为７５．９％，糖化酶活力损失９．６％，十二烷基磺酸钠法转苷酶去除率为６９．１％，糖化酶活力基本不变；单宁酸法转苷酶去除率为７０．３％，糖化酶活力提高９．８％。     

耐酸性液化糖化淀粉酶的液态发酵工艺的研究

通过对白曲霉基因工程菌株TRl2在液态发酵中的补料量、补料时间、补料次数、补料培养基配方等的研究，确定出了该菌株产酶及在3L放大条件下的最佳补料工艺。通过此工艺，在3次补料后发酵液体积逐步增加，TRl2菌株产酶的酶活总量稳定提高。发酵96h，耐酸性α—淀粉酶和糖化酶的活力分别达到86．37u/ml和25229．7u/ml的较高水平。经初步提取，1000ml发酵液可得到同时含有两种较高酶活力的粗酶蛋白干粉11．2g，为大批量生产耐酸性液化糖化淀粉酶制剂提供了工艺上的依据。     

复合酶中糖化酶活力的测定

复合糖化酶的酶活力检测是主要的质量控制指标，只有选用合理的糖化酶活力检测方法，才能真实反映出复合酶中糖化酶活力的高低．为避免因协同作用而产生的复合酶中其他酶制剂对糖化酶活力检测的干扰，作者总结了以往的研究成果，结合4种不同酶制荆的作用机理，最终否定了常用的淀粉底物法，确定了麦芽糖底物法为首选方法．     

固体发酵法生产饲用复合酶

以啤酒厂的副产物麦糟为培养基进行固体发酵，在３０℃经２４ｈ发酵后，复合酶中纤维素酶，糖化酶，中性和酸性蛋白酶的活力分别为４２．８Ｕ／ｇ，５８２．８Ｕ／ｇ，３５３．０Ｕ／ｇ，２３７．７Ｕ／ｇ可作为饲料用复合酶制剂。     

对几种相关酶联合固化初探

用聚丙烯酰胺包埋,再以戊二醛交联联合固定了α淀粉酶、糖化酶和葡萄糖异构酶,对联合固定化的最适条件和聚合固定化酶的性质进行了初步研究。结果表明联合固定化酶固定化单酶更能发挥协同效应,能够将底物一步水解并转化为产物。中所用的固定化方法与其他方法相比,固定化酶的稳定性、半衰期及酶固定化后活力均较高,在６０℃、ＰＨ５．５时,α淀粉酶和糖化酶二酶的联合固定化酶的活力最高,其操作半衰期达到７９ｈ;在６０℃、     

多菌联合固态发酵生产酒糟菌体蛋白饲料的实验研究

利用米曲霉、黑曲霉和醇母组成的三菌发酵体系对啤酒糟进行高蛋白菌体饲料化生物转化,方法为以预处理过的酒糟粉为主要培养基,添加少许辅料,接种上述三种菌种进行固态发酵,该方法的培养周期为6d,所得酒精菌体蛋白饲料的粗蛋白含量高达35．9％,糖化酶活力达7564.1u/g,演粉酶活力达4824．4。     

黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

糖化酶As3.4309的固定化方法研究

用蟹壳、明胶和卡拉胶做载体,采用交联法和包埋法对糖化酶As3.4309进行固定化。以淀粉溶液做底物,在相同条件下,对各种固定化糖化酶进行活力测定。实验结果表明:用卡拉胶包埋的固定化糖化酶保留了最高、的酶活力;而酶活力半衰期最长的是用蟹壳与戌二醛交联的方法制得的固定化糖化酶,对所获得的结果进行了分析,从而为固定化酶的进一步研究提供了方法上的依据。     

混合酶法制备高含量可溶性糖南瓜粉

采用混合酶水解南瓜中的淀粉．利用L9（3^4）正交实验优化了酶解工艺,确定的最佳工艺条件为：添加0．04％果胶酶、0．5％α-淀粉酶和1．0％的糖化酶;混合酶作用温度50℃,酶处理时间2h,摇床摇速120r／min,酶解后南瓜浆中的可溶性糖为9．37％     

牛蒡中可溶性膳食纤维的提取

将鲜牛蒡处理后,利用植物蛋白酶、糖化酶依次水解去除蛋白质和淀粉,抽滤得滤液,浓缩至原体积的1／3,用4倍体积95％的乙醇沉淀可溶性膳食纤维,抽滤,用丙酮、78％的乙醇洗涤滤渣,以除去其中的脂溶性物质,烘干即得可溶性膳食纤维．结果表明植物蛋白酶的最佳工艺条件为加酶量8％、温度50℃、时间3h、pH7;糖化酶的最佳工艺条件为加酶量1．0％、温度60℃、pH4．0～4．6、时间1h;牛蒡中可溶性膳食纤维提取率为15．43％．该产品呈浅黄色,感官形状良好．     

绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究

为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。     

餐厨垃圾发酵生产乳酸的工艺优化

为提高餐厨垃圾发酵生产乳酸的效率,采用Plackett-Burman和中心复合两种统计试验方法对影响发酵的因素进行初筛和优化.Plackett-Burman实验的结果表明,影响乳酸发酵的正向显著性因素有乳酸菌TD175、糖化酶、吐温80、纤维素酶;灭菌是负显著性因素.通过中心复合试验设计,确定最佳发酵工艺:乳酸菌接种量6.6%,糖化酶160U/g,纤维素酶60U/g,吐温800.08%,温度45℃.最佳工艺条件下发酵40h,乳酸产量能达到66.13g/L,每克干垃圾产乳酸0.53g.餐厨垃圾的乳酸发酵无需灭菌、无需额外营养物,具有良好的经济效益和应用前景.     

硅藻土吸附法去除糖化酶中的转苷酶

探讨了利用硅藻土作吸会剂去除液体曲糖化酶中转苷酶的方法。结果表明：硅藻土具有吸附转苷酶的作用并使糖化酶活力有所损失。发酵液ｐＨ值和硅藻土添加量对转苷酶去除率和糖化酶活力影响较大，而处理时间的影响较小。     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的亚克隆及表达

将人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。结果显示,重组酵母菌在甲醇体积分数为0.5%,72 h培养后,所提取的酶蛋白经酶活性检测,发现具有人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其分子质量为52 ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。     

Separation and purification of proteinases from Gastric Mucosa of Northern Sheatfish,Silurus soldatovi

The separation and purification method for pepsin of Northern Sheatfish (Silurus soldatovi) was established by using the combination technology of salting-out,gel chromatography and gel electrophoresis,and the enzymic properties were also analyzed.The experimental results indicated that 28% and 56% (NH4)2SO4 saturation could separate the activated protease from the pepsin extract of gastric mucosa of Sheatfish (Silurus soldatovi) ;compared with the homogenate extraction,the pepsin specific activity of purified extraction by Sephadex G-75 gel chromatography system increased 598 fold,was 5 times higher than that of activated liquid,and the total production rate was 10.1%.The purified pepsin liquor at the conditions of pH3.3 0.01 M alanine-formic acid buffering solution,60 cm chromatography column,and the flowing rate of 0.8 ML/min was analyzed by SDS-PAGE,which indicated that there were two bands and the molecular weight was 34.0 kDa and 40.4 kDa,respectively.There were two peaks in the enzyme activity determination of the separated collecting liquor in gel chromatography,and the SDS-PAGE showed the concentrations of the two proteins was different,which indicated that it existed at least two pepsins in the gastric mucosa of Sheatfish (Silurus soldatovi).