水产品中志贺氏菌双抗夹心ELISA检测方法建立与应用

志贺氏菌(Shigella)通称痢疾杆菌,是一类具有传染性强和危害严重的革兰阴性食源性致病菌,广泛污染各类动物源性食品.该研究将志贺氏菌经0.5％福尔马林溶液灭活后,多次免疫雌性大耳兔获得抗志贺氏菌多克隆抗体,以抗志贺氏菌多克隆抗体作为捕获抗体,以辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标...     

双抗夹心ELISA方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

采用0.5% 福尔马林灭活的单核细胞增生李斯特氏菌作为免疫原免疫日本大耳兔,获得抗单核细胞增生李斯特氏菌多克隆抗体,并以此多克隆抗体作为捕获抗体,以抗单核细胞增生李斯特氏菌Internalin A(InlA)单克隆抗体作为检测抗体,建立快速、特异的检测该菌的双抗夹心ELISA 方法。结果表明：该方法对单核细胞增生李斯特氏菌纯培养液的最低检测量为1.7 × 105CFU/mL。在检测食品样品的实验中,食品样本对本方法干扰较小,运用选择性增菌液进行前增菌可提高该方法的准确性。     

食品中志贺氏菌检测技术研究进展

志贺氏菌是主要的食源性致病菌之一,其低感染剂量和严重危害性受到人们广泛关注。因此,探究出快速、灵敏、高效的志贺氏菌的检测方法,对于保障食品质量安全是至关重要的。志贺氏菌的检测方法可分为三大类:传统培养方法、免疫学方法和分子生物学方法,许多研究为使其在样品检测中更加实用,进行了不同程度的改进。本文综述近年检测志贺氏菌的技术,包括改良的传统方法、免疫学方法和分子生物学方法以及新兴检测方法。重点阐述这些方法的应用范畴和应用进展,为志贺氏菌检测方法的选择提供参考。     

双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究

研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1～1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1～10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。     

双抗夹心ELISA快速检测冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a

为建立冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a双抗夹心ELISA检测体系,采用福氏志贺氏菌2a抗原免疫获得多克隆抗体,应用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选出1株福氏志贺氏菌2a单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为2C10。试验结果表明,2C10杂交瘤细胞株抗体效价为1∶10.24×104,抗体纯度为96%,免疫球蛋白亚型为IgG2a。用此单克隆抗体作为检测抗体,多克隆抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心ELISA体系,检测限为1 000 CFU/g。用此体系检测宋内志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌及阪崎肠杆菌,均无交叉反应。本研究可为冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a的检测提供一种特异性强,准确度高的ELISA检测方法。     

乳品中热带假丝酵母菌的双抗夹心ELISA快速检测方法

本研究用于乳品中热带假丝酵母菌的快速检测。采用热带假丝酵母菌超声破碎后的上清蛋白作为免疫原分别免疫新西兰大耳白兔和Hartley豚鼠,获得热带假丝酵母菌的多克隆抗体。以兔抗体作为捕获抗体,豚鼠抗体作为检测抗体,通过矩阵法及正交分析建立乳品中热带假丝酵母菌快速、特异的双抗夹心ELISA检测方法。该方法检出限为98 ng/m L,板内变异系数小于2%,板间变异系数小于6%,特异性及重复性良好。实际样品检测中,通过对乳制品进行滤膜集菌并选择性增菌培养,超声后提取的蛋白上清应用本研究建立的双抗夹心ELISA检测方法,100 CFU/m L热带假丝酵母菌可在22 h内准确检测出阳性反应。      

双抗夹心ELISA法定量检测食品中大肠杆菌O157：H7初探

以鸡抗O157:H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)为捕获抗体,酶标抗体(HRP-IgY)为检测抗体建立双抗夹心ELISA法检测食品中大肠杆菌0157:H7的方法,确定了抗原浓度对数与OD450值的高度线性相关性,根据检测OD450值可从拟合回归曲线确定样品中的含菌量,含菌量≥104CFU/ml的食品样品可直接用双抗夹心法进行检测,含菌量≤104CFU/ml的食品样品可增菌14h后检测.     

基于量子点的志贺氏菌sFLISA检测方法研究

目的本研究建立基于量子点的志贺氏菌s FLISA检测方法并进行验证。方法以志贺氏菌多克隆抗体为包被抗体,以生物素标记的志贺氏菌单克隆抗体为第二抗体,以量子点标记的链酶亲和素进行荧光定量检测。结果试验确定志贺氏菌s FLISA检测最佳条件:包被抗体浓度为1.25μg/m L,生物素标记的单克隆抗体稀释倍数为1:400,量子点标记的链酶亲和素稀释倍数为1:100;特异性检验表明,s FLISA方法仅与志贺氏菌出现阳性反应,而与大肠埃希氏菌、沙门氏菌、葡萄球菌、李斯特氏菌、变形杆菌、副溶血弧菌、芽孢杆菌等均呈阴性反应。结论本研究建立的基于量子点的志贺氏菌s FLISA检测方法的最低检出量为3.5×104 CFU/m L,实现了对志贺氏菌高通量定性和定量检测。     

大豆过敏原夹心ELISA和竞争ELISA方法的建立及其在加工食品中应用研究

本文以大豆混合过敏原为目标,建立了快速、便捷检测大豆过敏原的夹心酶联免疫吸附方法（sandwich-enzyme linked immunosorbent assay）和间接竞争酶联免疫吸附方法（indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay）,通过实际加工样品的回收实验、加标食品回收实验以及对真实食物样本的检测,对这两种方法进行了比较,确定了各自的适用范围。结果表明,夹心ELISA方法标准品浓度在0.0078~30 μg/mL范围内呈现出良好的线性关系,曲线方程为y=0.2333x+0.0692,决定系数R2=0.995。竞争ELISA方法的检测范围为10~100000 ng/mL,最低检测限为10 ng/mL。对购入橙汁进行加标回收实验,夹心ELISA检测后的回收率要高于竞争ELISA检测后的回收率,达100%以上;而对成分和加工方式都比较复杂的巧克力、牛肉酱、面包或蛋糕来说,竞争ELISA检测后的回收率要高于夹心ELISA检测后的回收率。对发酵类食物进行检测,竞争ELISA方法检测到的浓度要高于夹心ELISA,而对成分比较简单的食物比如芝麻糊、豆奶等进行检测时,夹心ELISA的检测浓度要略高于竞争ELISA。综上,竞争ELISA方法更适用于食物基质复杂,经过深度加工的食品,而夹心ELISA方法更适用于食物成分简单,轻加工后的食品,两种方法在各自的适用范围内均能实现较准确的检测。     

抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌

采用水稀释法提纯抗志贺氏菌IgY,检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320,并以此IgY为基础建立间接ELISA检测志贺氏菌,测定志贺氏菌纯培养液的检出限为105～106cfu/mL。对蜡样芽孢杆菌等10株不同菌株的检测结果表明,该方法对志贺氏菌有明显的检测特异性,对所测定的其它菌株无交叉反应。     

检测乳粉中克罗诺杆菌属穆汀斯克罗诺杆菌的双抗夹心ELISA方法的研究

获得了抗穆汀斯克罗诺杆菌的多克隆抗体,抗体只对穆汀斯克罗诺杆菌菌株有特异性识别,而对非穆汀斯克罗诺杆菌无交叉反应。利用所得到的抗体,建立了一种双抗夹心ELISA检测方法,该方法对纯培养穆汀斯克罗诺杆菌菌液检出限为105cfu/mL;经过17h增菌,全脂乳粉染菌样品中的穆汀斯克罗诺杆菌的检出限为0.1cfu/g。该方法为快速检测乳粉中穆汀斯克罗诺杆菌的污染奠定了基础。     

双抗体夹心ELISA法检测食品中出血性大肠杆菌O15

以灭活重组基因工程菌EHEC O157Δler/stx（p BR322::stx1/2B::eae）免疫新西兰大耳白兔获得的兔多抗作为捕获抗体,以针对出血性大肠杆菌O157主要毒力因子的特异性单抗2H9为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA方法并绘制标准曲线用于食品中出血性大肠杆菌O157的定量分析。标准曲线线性方程为y=0.3479x-0.4121,R²=0.9862。该ELISA的重复性变异系数小于5%,稳定性良好。应用该方法测得出血性大肠杆菌O157∶H7 EDL933的最小检出限为10³cfu/m L。食品样品接种实验表明:牛肉或猪肉样品接种量为0.08 cfu/g,增菌8 h后可以检出阳性反应;蔬菜和牛奶样品接种量为0.12 cfu/g（m L）,增菌10 h后可以检出阳性反应。      

双抗夹心ELISA检测转Bar基因抗除草剂大豆

为快捷有效地检测转Bar基因抗除草剂大豆,利用已制备的抗除草剂Bar基因编码蛋白,膦丝菌素乙酰转移酶（phosphinothricin acetyltransferase,PAT）单克隆抗体和多克隆抗体,建立PAT蛋白双抗夹心酶联免疫吸附检测方法,对转Bar基因抗除草剂大豆不同组织材料进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体质量浓度0.125 μg/mL,包被酶标板,37 ℃孵育1 h后4 ℃静置过夜,检测样品37 ℃孵育1.5 h,检测抗体质量浓度6.25 μg/mL,37 ℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低检测限为0.04 ng/mL,大豆蛋白体系中为8 ng/mL;重复性变异系数小于3%。利用上述检测条件,对实验建立的转Bar基因抗除草剂大豆进行PAT蛋白定量检测,成功地在根、茎、花、叶、种子不同部位检测到该蛋白的表达。     

Direct sandwich ELISA to detect the adulteration of human breast milk by cow milk

The demand for commercially available human breast milk has significantly increased in recent years. For various reasons, a significant amount of commercially available human breast milk is being adulterated with other types of milk. This fraudulent practice poses a threat to consumers' health due to potential adulterants such as cow milk, which may put the infant at risk due to intolerance or allergy. A direct sandwich anti-bovine IgG ELISA has been developed for the sensitive and specific detection of cow milk in adulterated human breast milk. This assay uses polyclonal anti-bovine IgG antibody as a capture antibody and monoclonal anti-bovine IgG-alkaline phosphatase antibody as a detection antibody. Once optimized, the assay was found to be highly sensitive, and specific to bovine IgG. The assay had no significant cross-reaction with human breast milk, indicating that it was highly specific. The anti-bovine IgG ELISA was able to detect the presence of cow milk in adulterated human breast milk with a detection limit of 0.001% cow milk. The developed assay was highly reproducible (coefficient of variation <10%). The developed direct sandwich anti-bovine IgG ELISA is simple, reliable, and reproducible, making it an ideal test for this purpose.     

宠物食品中沙门氏菌辐照模型的建立

为了建立宠物食品中沙门氏菌的辐照模型,研究了用60Coγ射线辐照不同理化性质的宠物食品,考核理化性质对沙门氏菌灭菌效果的影响.考察了初始菌数量、pH值、含水量、蛋白质含量、辐照后储存时间等因素对沙门氏菌杀灭效果的影响,得到了宠物食品中沙门氏菌的辐照模型.模型的建立为宠物食品中沙门氏菌的灭菌提供了新的方法,为其他类型菌株的辐照灭菌提供参考,在生产上具有一定的指导意义.