高强度产甘油假丝酵母突变株的选育及其发酵性状

以一株产甘油假丝酵母为出发菌株 ,采用化学诱变 ,通过玉米浆和外加无机磷组成的磷质量浓度为 3 40mg/L的磷源选择培养基 ,得到了一株发酵时间较原菌株缩短了 8h左右 ,产甘油能力 (甘油产量约为 1 40 g/L ,甘油转化率为 5 6% )和原菌株相似的突变株 ,并研究了突变株的发酵性状 .     

耐盐酵母尿嘧啶营养缺陷型菌株的构建

在酱油高盐稀态发酵过程中通常添加假丝酵母(T酵母)和鲁氏酵母(S酵母)来增强酱油的风味品质。但是目前对T酵母和S酵母进行遗传操作没有相应的营养缺陷型菌株。因此,对T酵母和S酵母分别进行甲基磺酸乙酯(ethylmethane sulfonate,EMS)诱变和紫外诱变,以酵母的致死率为诱变标准做单因素试验,得到最佳的EMS质量分数、EMS作用时间,紫外照射距离、紫外照射时长,酵母菌浓度。通过筛选、测序获得尿嘧啶营养缺陷型菌株,为后续耐盐酵母的分子生物学研究提供理论依据。     

呼吸缺陷型酵母发酵性能研究

呼吸缺陷型酵母线粒体染色体部分缺失，丧失正常呼吸功能，不能利用非发酵性碳源。经TTC试验分离出多株呼吸缺陷型酵母和呼吸正常型酵母，反复纯化多次，并经甘油培养基鉴定，确定d2、a2、f2为呼吸缺陷型菌株，n1为呼吸正常型菌株，进行呼吸正常型、呼吸缺陷型、正常缺陷混合发酵性能试验。研究结果表明：呼吸缺陷酵母菌株在起酵、降糖速度、风味等方面都表现异常，为生产中对酵母呼吸缺陷型突变控制提供了有价值的参考。     

双重营养缺陷型（Met^-，Ile^-）黄色短杆菌突变株SFL8-3的选育

以一株黄色短杆菌SFL-8为出发茵株，经紫外线、盐酸羟胺和硫酸二乙酯等多次诱变处理，单菌落分离、摇瓶初筛和摇瓶复筛，获得了一株蛋氨酸和异亮氨酸双重缺陷型突变株SFL8-3(Met^-，Ile^-)，摇瓶发酵L-亮氨酸产量达18．98g／L。     

近平滑假丝酵母发酵产甘露醇

从甘蔗汁中筛选出1株利用葡萄糖产甘露醇的菌株,经鉴定为近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)。研究其发酵生产甘露醇的条件,通过单因素实验和正交实验优化后,培养基配方为:200 g/L葡萄糖,30 g/L酵母膏,0.05 g/L CaCl2·2H2O,0.02 g/L FeCl3·2H2O,0.5 g/L MgSO4·7H2O,此条件下摇瓶培养甘露醇产量为61.7 g/L。进行30 L发酵罐扩大培养,根据发酵曲线得知72 h时甘露醇最大产量为80.3 g/L。     

米曲霉葡萄糖代谢抑制菌株的选育及发酵性能研究

选择对2-脱氧葡萄糖（2-DG）抗性较强的米曲霉A2-104为出发菌株,通过原生质体诱变育种,进一步获得了葡萄糖代谢抑制突变株A2-104-166-小试规模的酱油酿造实验结果显示：A2-104-166的蛋白酶和谷氨酰胺酶等主要酶系的活力均有不同程度的提升,碳水化合物消耗量下降33％,全糖／全氮、谷氨酸态氮／全氮、游离氨基态氮／全氮均有明显优势;感官鉴评结果表明A2-104-166菌株的酱油成味弱,甜味和鲜味加强。     

产朊假丝酵母核酸高产株的选育及其发酵性能研究

为了获得一株发酵性能优良的高核酸酵母,以产朊假丝酵母(Candida utilis)CL1501为出发菌株,采用紫外-亚硝基胍复合诱变,筛选获得一株高核酸含量的突变株CL15013,经测定其核酸含量占菌体干质量的16.8%,高于出发菌47.8%。对比研究其流加及分批培养工艺,流加培养细胞收获量为16.9 g/L,比分批培养提高94.3%;正交试验设计优化流加培养条件后,CL15013的收获量达21.3 g/L,比分批培养提高144.8%,具有良好的生产应用潜力。     

产朊假丝酵母油脂高产菌株的诱变选育

对产朊假丝酵母进行紫外诱变获得高产油脂突变菌株.紫外诱变后筛选出产油量最多菌种.通过正交试验得到产朊假丝酵母产油脂的最优条件:培养温度25℃,培养时间4d,接菌量10%,转速100r/min,在此条件下培养,紫外诱变10s后的产朊假丝酵母产油脂量可达到18%.     

产酯酵母的筛选及其发酵特性研究

从大曲中筛选到8株产酯酵母,选酶活最高菌株进行26S rDNA鉴定,确定其为异常毕赤酵母.试验结果表明,该酵母麸曲的酯化力可达到19.36 mg/100 mL.该菌株麸曲最佳培养时间为6d;液体培养最高耐受温度为43℃;最低耐受pH值为3.5;最高耐受酒精度为18 ％vol;最适生长温度为27℃;利用葡萄糖产酒精能力较低.     

高产食用蛋白质产朊假丝酵母菌的选育及发酵条件优化

通过对产朊假丝酵母菌的紫外诱变,筛选蛋白质含量较高的可食用菌株。结果表明：在15W紫外线(30cm)处,照射120s,致死率为89%,得到蛋白质含量为33% 的诱变菌株,比诱变前的22.9% 提高了37.12%。对此菌种进行稳定性测试(传代10 次并进行蛋白质测定),性质稳定;对诱变后的发酵条件：碳源、氮源、培养温度和溶氧量(培养箱转速)进行优化,最终得到采用葡萄糖为碳源、硫酸铵和酵母浸膏粉的混合物为氮源、培养温度为32℃、转速为160r/min 时培养出的蛋白质含量及菌体生物量都在较高水平,蛋白质含量为37%。     

产L-亮氨酸营养缺陷型突变株黄色短杆菌SFL8-3的选育

氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是生物体内不可缺少的营养成分，L-亮氨酸是人体8种必需氨基酸之一，也是三种支链氨基酸之一，在医药、食品、饲料、化妆品等行业具有重要的用途。以一株黄色短杆菌为出发菌株，经紫外线、盐酸羟胺和硫酸二乙酯等多次诱变处理，单菌落分离、摇瓶初筛和摇瓶复筛，获得了一株蛋氨酸和异亮氨酸双重缺陷型突变株SFL8-3（Met^-，Ile^-），摇瓶发酵L-亮氨酸产量达18．98g／L。     

产壳聚糖酶菌株的诱变育种及其产酶条件

利用紫外线诱变不同稀释度的黑曲霉菌液后,筛选得到一株酶活力较强的菌株A3,其酶活为52.34 nkat/mL,并对其进行了Sephadex G-200凝胶柱层析纯化。对A3发酵产酶条件的研究结果表明,最适产酶发酵条件为发酵温度范围27℃~30℃,发酵时间72 h,pH6.0,摇床转速130 r/min,壳聚糖含量1.0%。     

高产核酸的热带假丝酵母诱变选育及其发酵条件优化

以热带假丝酵母（Candida tropicalis）HY4-17为出发菌株,采用电子束辐射技术诱变,经过初筛、复筛及遗传稳定性试验选育核酸高产菌株,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面法优化培养基,并优化接种量和发酵时间以提高核酸产量。结果表明,获得一株生长快速,遗传稳定的突变菌株EBI-21,其核酸含量较出发菌株HY4-17提高了25%。最佳培养基组成为：糖蜜185 g/L,硫酸铵3 g/L,硫酸锌0.05 g/L,硫酸镁0.5 g/L,硫酸亚铁0.05 g/L,磷酸1 mL/L,pH值为4.5。在优化培养基及接种量8%,发酵时间12 h条件下,核酸产量达到1.73 g/L,较未优化前提高了80.21%,培养时间缩短了10 h。     

Lactobacillus delbrueckii营养条件的研究

研究了L delbrueckiiYJS 2 1的营养要求 ,结果表明 ,L delbrueckiiYJS 2 1缺乏合成L 谷氨酸、L 天冬氨酸、L 色氨酸、L 异亮氨酸的能力 ;生物素、对氨基苯甲酸、硫胺素对L delbrueckiiYJS 2 1生长及产酸有明显的促进作用。同时利用正交设计优化得到了最佳生长因子 :L 谷氨酸 30mg/L、L 天冬氨酸 8mg/L、L 色氨酸 1 2mg/L、L 异亮氨酸 6mg/L、生物素 180 μg/L、对氨基苯甲酸 4mg/L、硫胺素 2 0mg/L。在最适发酵条件下 ,乳酸产量、对糖转化率、乳酸生产率分别为 14 0 3g/L、93 5 %、1 95 g/ (L·h)。     

聚γ-谷氨酸高产突变株的选育及摇瓶发酵条件

对地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)进行亚硝基胍和60Co诱变,获得一株γ PGA的高产菌株C9.γ PGA质量浓度由9.44g/L提高到19.76g/L,提高了109%.突变株传代10次,质量浓度保持基本稳定.通过正交试验和单因素试验对发酵培养基及发酵条件进行了优化.当发酵培养基中含柠檬酸12g/L、甘油80g/L、L 谷氨酸23g/L、氯化铵7g/L,pH7.0,装液量为50mL/250mL三角瓶,接种体积分数为5%时,37℃摇瓶发酵72h,γ PGA达到23.32g/L.     

几丁质脱乙酰酶高产菌株的选育及其发酵特性研究

以一株海洋丝状真菌（Penicillium janthinellum）UV-0S为出发菌株,通过多级紫外线诱变育种后获得几丁质脱乙酰酶（CDA） 高产突变株UV-3S,并对该菌株产CDA的发酵特性及其细胞壁几丁质的脱乙酰度（DD）进行研究。 结果表明,突变株UV-3S的胞外 CDA酶活力为11.05 U/mL,是出发菌株UV-0S的2.1倍。 该菌株产胞外CDA的最适初始pH值为9.0,最适无机盐为NaH2PO（4 11 mmol/L）, 胶体几丁质最适添加量为0.5%。 在此最佳发酵条件下,突变株UV-3S的CDA酶活力最高,为11.83 U/mL,说明CDA是一种诱导酶。 细 胞壁几丁质的脱乙酰度随真菌生长而增加,且在发酵96 h后脱乙酰度达到最高（90.52%）。     

Construction of Candida albicans Tet-on tagging vectors with a Ura-blaster cassette

It has been difficult to develop molecular tools for studying the fungal pathogen Candida albicans because this species uses a non-standard genetic code and is diploid without a complete sexual cycle. Vector systems with regulatable promoters to produce conditional mutants, epitope tags for protein detection and recyclable selection markers are useful for functional study of genes. However, most currently available vectors contain only a subset of desired properties, which limits their application. To combine several useful properties in one vector, the vector pTET25 was initially modified into pTET25M, so that the URA3 gene flanked by dpl200 could be used repetitively. To enable more choices for cloning, a multiple cloning site was introduced at both ends of GFP in pTET25M. GFP expression was induced by doxycycline in a dose- and time-dependent manner when the plasmid was introduced into C. albicans with or without URA3. The applicability of the vectors was verified by constructing strains capable of expressing either the N-terminal GFP fusion of Cdc10 or the C-terminal GFP fusion of Cdc11. Additionally, by replacing the GFP gene of pTET25M with DNA sequence encoding Cdc10 with an epitope tag of six histidine residues at the C-terminus, doxycycline-induced expression of CDC10 was achieved when the expression vector was introduced into C. albicans. This new system allows for inducible expression of a desired C. albicans gene with the advantage of convenience of cloning. It also allows the presence of a recyclable URA3 marker and the detectable expression of fusion or epitope-tagged protein.     

低高级醇啤酒酵母的选育及中试发酵

利用紫外和硫酸二乙酯对出发酵母菌株进行复合诱变,三重筛选获得高级醇产量少的菌株。同时采用响应面分析方法对发酵条件进行优化,得到最优发酵参数。中试发酵得到总高级醇含量70．67mg／L,感官和其它理化指标优良的啤酒。