氯吡脲人工抗原的合成与鉴定

为合成新的、有效的氯吡脲（forchlorfenuron,CPPU）人工抗原,在无水三氯化铝的催化作用下,采用傅克反应对CPPU小分子进行结构改造。采用碳二亚胺（carbodiimide,EDC）法将半抗原分别与牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）和卵清蛋白（ovalbumin,OVA）进行偶联,获得CPPU的免疫抗原（CPPU-BSA)和包被抗原（CPPU-OVA）。采用质谱、元素分析和核磁共振氢谱对CPPU半抗原（CPPU-COOH）的分子结构式进行鉴定;采用紫外光谱和高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对偶联物的结构和相对分子质量进行鉴定。结果显示成功合成出CPPU人工抗原,为其抗体的制备和免疫学方法的构建提供了参考。     

氯羟吡啶人工抗原合成和鉴定

目的：将氯羟吡啶的衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)制备人工抗原。方法：采用威廉森合成法合成了氯羟吡啶的衍生物(CLOP-2C),再分别经活泼酯法和氯甲酸异丁酯法合成氯羟吡啶的人工抗原CLOP-2C-BSA,CLOP-2C-OVA)。结果：通过TLC、质谱、红外光谱等方法鉴定表明成功制备了氯羟吡啶衍生物。紫外扫描图谱表明人工抗原偶联成功,且半抗原与载体的分子结合比率分别为8.26 和4.7。结论：成功的制备了氯羟吡啶人工抗原。     

氨基甲酸酯类农药速灭威人工抗原的合成与鉴定

通过化学方法合成了两种完全突出氨基甲酸酯类农药速灭威特征结构的半抗原,并采用活化酯法与载体蛋白偶联制备成完全抗原。经动物试验鉴定合成的人工抗原可制备出高效价的抗速灭威抗体,结果表明速灭威人工抗原已成功合成,为建立速灭威残留免疫分析方法奠定了基础。     

蜂胶中盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和格列本脲HPLC测定方法的建立

建立了HPLC检测蜂胶中盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和格列本脲的方法,用二极管阵列uv-vis检测器检测,采用柱Diamonsil C18柱,200mm×4.6mm,5μm,流动相：乙腈-0.3%乙酸水溶液（60∶40）;流速：0.5mL/min;柱温：20℃;检测波长分别为233nm和274nm。采用出峰时间和紫外光谱图进行定性判定蜂胶中是否含盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍和格列本脲。     

氟西汀快速免疫检测用人工抗原的合成与鉴定

本文针对药物、减肥类保健食品中氟西汀成分及残留问题现状,主要研究了氟西汀人工抗原的合成方法,并对所合成的半抗原、人工抗原进行了结构和特异性鉴定。研究中先将氟西汀与丙烯酸甲酯反应后再经过水解制备出半抗原(H-FXT),再用活泼酯法将半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了氟西汀人工免疫原(H-FXT-BSA)和氟西汀包被原(H-FXT-OVA),通过免疫原免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA方法对抗血清进行了鉴定评价。研究制备的人工抗原H-FXT-BSA、H-FXT-OVA经紫外光谱扫描计算后偶联比分别达到14.5:1和11.3:1。免疫小鼠后所获得抗血清的效价均达到30000以上,半抑制量浓度IC50值为100 ng/m L。本研究首次合成了鉴定氟西汀人工抗原,并成功获得了氟西汀抗体,本研究可为后期在药物、减肥类保健食品中氟西汀成分的免疫快速检测方法的建立和酶联免疫检测试剂盒等相关产品开发奠定了关键技术研究基础。     

保健食品中格列本脲含量测定的能力验证研究

目的设计组织保健食品中格列本脲含量测定能力验证项目,评价实验室检测保健食品中格列本脲的技术能力和水平。方法对考核样品通过实施能力验证计划,来自27个省(自治区)、直辖市80家实验室的测定结果进行稳健统计分析,通过稳健Z比分数评价实验室检测能力。结果考核样品中的格列本脲在P0.05显著水平时是均匀的,且在整个计划周期内稳定,满足能力验证的要求。在80家参加实验室中,满意结果数为68家,满意率为85.0%;可疑结果数为6家,可疑率为7.5%;不满意结果数为6家,不满意率为7.5%。结论多数参加的实验室检测能力结果满意,表明保健食品中格列本脲检测水平总体良好。     

黄曲霉毒素B1人工抗原的合成及鉴定

采用衍生化在黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1）上引入羧基合成AFB1羧甲基活化物,通过N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxy-succinimide NHS）法将AFB1O与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备黄曲霉毒素B1完全抗原AFB1-BSA。ECI-MS和紫外光谱法的鉴定结果表明目标半抗原合成成功。结合紫外分光光度法和回归方程,分别测得不同浓度的半抗原和蛋白质线性曲线为：Y=0.1440X+0.0103,R2=0.9986;Y=0.0059X+0.0808,R2=0.9889。偶联物中半抗原和蛋白质的浓度分别为186.32 μg/mL、6127.46 μg/mL,即求得抗原分子结合比为5.13:1,从而为制备抗AFB1抗体奠定基础。     

三聚氰胺人工抗原化合物的合成及鉴定

目的：建立三聚氰胺残留的免疫分析方法。方法：以三聚氰胺结构类似物2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪为原料,分别与6-氨基己酸和对氨基苯甲酸,各经两步化学反应合成两种具有不同长度间隔臂的半抗原MEA和MEB,并分别通过碳二亚胺法和混合酸酐法将MEA和MEB与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备三聚氰胺的免疫原(MEA-BSA)和包被原(MEB-OVA)。结果：经质谱和紫外光谱表征,证明所合成的产物为目标半抗原MEA和MEB,并且与载体蛋白偶联比可达到25.28:1(MEA-BSA)和13.11:1(MEA-OVA)。结论：半抗原MEA和MEB及人工抗原合成成功。     

HPLC测定消糖灵胶囊中格列本脲的含量

目的　建立测定消糖灵胶囊中格列本脲含量的方法。方法　DiamondC1 8色谱柱,流动相为甲醇-磷酸二氢铵溶液(6 5∶35 ) ,流速1 .0ml·min-1 ,检测波长2 30nm。结果　在0 .2 4～0 .5 6 μg范围内呈线性关系(r =0 .9998) ,平均加样回收率=1 0 0 .4 0 %,RSD =2 .0 6 %。结论　此方法可用于制剂的质量控制。     

丁香酚半抗原及人工抗原的合成与鉴定

目的 合成丁香酚半抗原及人工抗原并对其结构进行鉴定。方法 采用氯乙酸对丁香酚进行结构改造, 以获得含羧基的丁香酚半抗原。将经重结晶纯化后的半抗原与牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)经碳化二亚胺(carbide dimethylamine, EDC)偶联制备人工抗原。采用电喷雾串联三重四极杆质谱法对丁香酚半抗原的结构进行鉴定。采用紫外光谱及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-flight time mass spectrometry, MALDI-TOF MS)对偶联物的结构进行鉴定。结果 紫外光谱结果表明, 与载体蛋白相比, 偶联物的特征吸收峰强度有一定的增强; MALDI-TOF MS结果表明, 表明丁香酚半抗原与BSA的偶联比为12.5:1。结论 本研究成功建立了丁香酚半抗原及人工抗原的制备方法, 为丁香酚抗体的制备提供了前期研究基础。     

多效唑人工抗原的合成与鉴定

为合成新的、有效的多效唑人工抗原,采用琥珀酸酐法对多效唑小分子进行结构修饰,以获得含羧基的多效唑半抗原。将纯化后的半抗原分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白经N-羟基琥珀酰亚胺活泼酯法偶联制备免疫原和包被原。采用质谱、红外光谱、核磁共振氢谱对多效唑半抗原的结构进行鉴定;采用紫外光谱及高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对偶联物的结构进行鉴定。结果显示成功合成出多效唑人工抗原,为其抗体的制备和免疫学方法的构建奠定了前期研究基础。     

杀草丹半抗原及其人工抗原的制备与鉴定

以乙基羟乙胺、升华硫、一氧化碳气体和对氯氯苄为原材料,合成羟基化杀草丹;经纯化后与琥珀酸酐反应,合成杀草丹半抗原,采用薄层层析色谱法、质谱法和红外光谱法分析鉴定为预期产物;利用碳二亚胺法将半抗原与牛血清蛋白BSA偶联制备杀草丹人工抗原,应用紫外光谱和荧光光谱法分析鉴定。结果表明,羟基化杀草丹经薄层层析展开效果良好,杀草丹半抗原经红外光谱分析具有明显的羧酸基团,有利于后续偶联操作;在26 ℃室温条件下制备的杀草丹人工抗原,其半抗原与载体蛋白偶联比为6.59:1。杀草丹半抗原与杀草丹人工抗原的成功制备,可为进一步研制杀草丹抗体奠定基础。     

两种特异性氰戊菊酯人工抗原的合成与鉴定

选择化学结构具有典型研究意义的氰戊菊酯(fenvalerate,Fen)为研究对象,利用有机化学合成法在氰戊菊酯分子的一端分别引入两种不同连接长度的连接臂。通过核磁共振(1H-NMR)、液相色谱-质谱联用仪(LC-MS-MS)鉴定,成功合成两种半抗原Fen1和Fen2,并与牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联合成了两种氰戊菊酯免疫特异性人工抗原Fen1-BSA、Fen2-BSA,经紫外分光光度仪扫描,人工抗原的紫外图谱相对于半抗原和载体蛋白有明显差异,测得偶联比分别约为9:1和10:1,经SDS-PAGE电泳检测表明偶联成功。     

百菌清人工抗原的制备与鉴定

以杀菌剂百菌清为起始反应物,通过两步化学反应合成百菌清的衍生物(半抗原);采用活化酯法与混合酸酐法分别将半抗原与载体蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白)进行偶联,制备百菌清的人工抗原,同时通过免疫新西兰大白兔获得抗血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其效价。利用红外光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)对百菌清半抗原进行表征,并用紫外扫描的方法对人工抗原进行鉴定。结果表明,成功制备出百菌清半抗原及人工抗原,并且半抗原与载体蛋白的偶联比分别为27.86:1 和12.32:1,抗血清效价约为1:1.28 × 104。     

呋喃唑酮代谢物人工抗原的制备及鉴定

在催化剂条件下,以碳酸二甲酯和乙醇肼为原料,四氢呋喃为溶剂,合成了高收率的呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)。实验结果表明,得到的AOZ收率可达到82.7%,此时的最佳反应条件如下:催化剂用量12%,反应温度75℃,反应时间3h。随后对AOZ进行结构改造,得到AOZ半抗原衍生物,同时采用戊二醛法将AOZ及其半抗原衍生物与活化的卵血清蛋白(cOVA)和牛血清白蛋白(cBSA)交联,成功制备了免疫原和包被原;通过气相质谱联用仪(GC-MS)、元素分析、紫外分光光度计等手段对半抗原和完全抗原进行鉴定。GC-MS结果证明了AOZ的成功合成;元素分析数据表明,半抗原顺利合成;紫外扫描数据显示,半抗原与cOVA、cBSA偶联成功,免疫原I、免疫原Ⅱ的偶联比分别为16.74和24.05。     

杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定

以咪唑乙醇为原料,与6- 溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4- 二氯苯基)-2-(1- 咪唑基)乙氧基]己酸)。产物经薄层层析和1H-NMR 鉴定后,采用活化酯法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫原(HIA-BSA)和包被原(HIA-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为13:1 和7:1,初步说明人工抗原合成成功。通过免疫动物获得效价为1:64000 的抗体,采用间接竞争ELISA 法测定抗体的IC50 值为1.76μg/mL,从而进一步证明人工抗原合成成功,所得的抗体可用于ELISA 检测试剂盒的研制。