沼气发酵对痢疾志贺氏菌的致死效应研究

在10L发酵瓶中探索沼气发酵温度和猪粪添加量对沼气发酵杀灭痢疾志贺氏菌的影响。结果发现在所研究的各种温度和各种猪粪添加量下的沼气发酵对痢疾志贺氏菌的杀灭都有很好效果,其中35℃下猪粪固形物为10%时的沼气发酵达到最好的杀灭痢疾志贺氏菌效果,当发酵时间超过36 h时,痢疾志贺氏菌的死亡率达到99%以上。     

4种分离培养基检测志贺氏菌效果比较

志贺氏菌是一类具有高度传染性的肠道致病菌。文中基于GB 4789.5—2012《志贺氏菌检验》标准,比较了4种分离培养基检测志贺氏菌的效果。通过4种分离培养基对福氏志贺氏菌、宋内氏志贺氏菌的回收率、最低检出限及对不同样品检测效果的比较,对不同培养基的检测效果进行评价。结果显示4种分离培养基最低检出限相近,显色培养基01检测特异性优于其他3种;针对实际检测样品,应灵活选择培养条件,以提高检测的准确性及效率。     

抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌

采用水稀释法提纯抗志贺氏菌IgY,检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320,并以此IgY为基础建立间接ELISA检测志贺氏菌,测定志贺氏菌纯培养液的检出限为105～106cfu/mL。对蜡样芽孢杆菌等10株不同菌株的检测结果表明,该方法对志贺氏菌有明显的检测特异性,对所测定的其它菌株无交叉反应。     

双抗夹心ELISA快速检测冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a

为建立冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a双抗夹心ELISA检测体系,采用福氏志贺氏菌2a抗原免疫获得多克隆抗体,应用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选出1株福氏志贺氏菌2a单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为2C10。试验结果表明,2C10杂交瘤细胞株抗体效价为1∶10.24×104,抗体纯度为96%,免疫球蛋白亚型为IgG2a。用此单克隆抗体作为检测抗体,多克隆抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心ELISA体系,检测限为1 000 CFU/g。用此体系检测宋内志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌及阪崎肠杆菌,均无交叉反应。本研究可为冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a的检测提供一种特异性强,准确度高的ELISA检测方法。     

抗大肠杆菌O157:H7的卵黄特异性IgY的研究

以大肠杆菌O157:H7为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗大肠杆菌O157:H7的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性,以及抗体的提取方法和体外抑菌效果.研究结果表明,初次免疫后第6d,在卵黄中可以检测到抗大肠杆菌O157:H7 IgY,效价为1:7200;经加强免疫后效价迅速上升,至第44d达到最高效价1:230400;免疫后360 d,效价仍维持在1:7200.用水稀释法、硫酸铵分级盐析和Sephadex G-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价是之前的4倍.SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带.体外抑菌实验表明,IgY能抑制大肠杆菌O157:H7的生长.     

基于免疫纳米磁珠对福氏志贺氏菌的快速富集研究

利用纳米磁珠的超顺磁性,结合传统平板计数的方法,通过捕获效率,研究免疫纳米磁珠制备过程中抗体加入量以及免疫纳米磁珠捕获目标细菌时的加入量,并利用免疫纳米磁珠对纯菌液以及羊肉洗水中100、101、102、103 CFU/mL的福氏志贺氏菌进行捕获.结果表明,志贺氏菌多克隆抗体(4～5mg/mL)结合1mL链酶亲和素纳米磁珠((180±20) nm,2mg/mL)的最佳量为70μL,免疫纳米磁珠捕获高浓度目标细菌(102 ～ 104 CFU/mL)时的最佳加入量为60μL.对于纯菌液和羊肉洗水,其捕获限可分别达到100CFU/mL和101CFU/mL,并且捕获时间在1h之内.本研究优化了实验条件,为免疫磁珠快速富集目标菌提供了理论依据.     

量子点免疫标记法检测福氏志贺氏菌

研究基于抗原抗体反应捕获目标菌,结合生物素与亲和素间的特异性相互作用,联合免疫纳米磁珠磁性分离、免疫量子点荧光标记技术,运用荧光检测系统,建立了福氏志贺氏菌的定量检测模型。结果表明,福氏志贺氏菌菌浓度为102CFU/mL~105CFU/mL,相对荧光强度与菌浓度关系为FI=12.78lgN+15.941,呈良好的线性关系,决定系数R2=0.9761。进一步对模型的准确度和精确度进行验证,得到菌落浓度预测值与真实值差异小,检测相对标准偏差为1.8%,表明模型的准确度好,精密度高。该方法可简单、快速（2h）、高效地检测福氏志贺氏菌。     

基于免疫纳米磁珠对福氏志贺氏菌的快速富集研究

利用纳米磁珠的超顺磁性,结合传统平板计数的方法,通过捕获效率,研究免疫纳米磁珠制备过程中抗体加入量以及免疫纳米磁珠捕获目标细菌时的加入量,并利用免疫纳米磁珠对纯菌液以及羊肉洗水中100、101、102、103CFU/mL的福氏志贺氏菌进行捕获。结果表明,志贺氏菌多克隆抗体(4～5mg/mL)结合1mL链酶亲和素纳米磁珠((180±20)nm,2mg/mL)的最佳量为70μL,免疫纳米磁珠捕获高浓度目标细菌(102～104CFU/mL)时的最佳加入量为60μL。对于纯菌液和羊肉洗水,其捕获限可分别达到100CFU/mL和101CFU/mL,并且捕获时间在1h之内。本研究优化了实验条件,为免疫磁珠快速富集目标菌提供了理论依据。      

纳米金标记-银染信号放大快速检测福氏志贺氏菌

采用纳米金标记结合银染信号放大技术建立了检测福氏志贺氏菌的新方法.优化了酶标板包被亲和素使用浓度以及分子杂交和化学发光检测实验条件.结果表明,化学发光法比吸光度法检测灵敏度高15倍,通过银染信号增强后,化学发光检测目标菌DNA的检测限达2fmol/L,相对化学发光强度与目标菌DNA浓度在5～1000 fmol/L范围内...     

裂解性福氏志贺氏菌噬菌体SF-A2 的生物学特性及其在巴氏杀菌牛奶中的灭菌效果

分离裂解性福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)噬菌体,鉴定其生物学特性,研究其在巴氏杀菌牛奶的灭菌效果。以福氏志贺氏菌为宿主菌,从污水中分离获得特异性针对福氏志贺氏菌的具有高裂解活性的噬菌体,命名为SF-A2。运用PEG/NaCl 法纯化SF-A2,经负染后电镜观察,该噬菌体为肌尾科噬菌体。生物学特性分析表明：该噬菌体特异性针对福氏志贺氏菌,且对温度及pH 值具有良好的耐受能力。将SF-A2 以高感染复数(103)用于即食性食品(牛奶)中的福氏志贺氏菌的生物防控实验。结果表明：SF-A2 能够有效灭菌,在加入48h 后,福氏志贺氏菌降低了3lg(CFU/mL);作用至72h,能够完全将福氏志贺氏菌灭活。从而表明,裂解性福氏志贺氏菌噬菌体SF-A2具有良好的杀菌能力,能够在食品中防控福氏志贺氏菌的污染,也为防治由福氏志贺氏菌引起的腹泻性疾病提供生物源性治疗源。     

抗副溶血弧菌IgY的制备及活性检测

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemololyticus,Vp)是我国微生物食源性疾病的主要病因,且是海水养殖业中的常见病原菌,造成巨大的经济损失。本研究制备副溶血弧菌免疫原,并以5×107、5×108CFU/ml两种剂量分别免疫母鸡,获得特异性的抗副溶血弧菌IgY;并建立ELISA方法检测免疫鸡蛋中的抗体效价,高剂量免疫组的抗体效价可达1:57600,低剂量免疫组的抗体效价达1:28800;低剂量组抗体效价可维持250d,高剂量组抗体效价可维持300d以上。     

免疫蛋黄抗体的研究进展

用特殊抗原免疫母鸡,并从免疫蛋中获取特异性抗体(IgY)已受到人们的关注。文章重点介绍了免疫蛋抗体IgY的理化性质和制备方法,并结合食源性疾病诊断与治疗以及我国食品工业发展的趋势,对IgY的应用前景进行了论述。     

鸡卵黄免疫球蛋白的分离制备研究

实验研究了从高免鸡卵黄中分离纯化免疫球蛋白(IgY)的方法。确定最优条件为:卵黄十倍稀释,pH5.3,-18℃冻结6h,4℃解冻;添加3%硅藻土进行微滤;采用超滤浓缩五倍;再用45%饱和硫酸铵(pH5.3)盐析;沉淀重溶后经DEAE-Sepharose F.F.柱层析分离纯化。结果表明,用此方法可以从高免鸡蛋中得到电泳纯IgY,总活性回收率达到64.16%。     

卵黄免疫球蛋白的分离提取与鉴定

对氯仿法、辛酸法、水稀释法、水-辛酸法分离卵黄免疫球蛋白(IgY)进行了比较,结果表明:水-辛酸法在9倍稀释度、pH5.3、辛酸加量1%条件下,可获得较好效果,进一步用硫酸铵沉淀脱盐后,提取率达93.4%,产率达4.67mg/mL卵黄,纯度达85%。     

Microencapsulation Protects Immunoglobulin in Yolk (IgY) Specific against Helicobacter pylori Urease

ABSTRACT: Hens were intramuscularly (im) immunized on thighs by using urease (E.C. 3.5.1.5) from Helicobactor pylori as antigen. The specificity of IgY against urease of H. pylori increased gradually after initial immunization. The collected yolk was microencapsulated with 10% or 20%β-cyclodextrin (β-CD) and gum arabic by a spray-drier. Microencapsulation was effective in protecting the IgY activity against pepsin. Liposome prepared at the lecithin/ cholesterol ratio of 1/0.25 (mole/mole) displayed satisfactory encapsulation efficiency (69%) of IgY. Increase in cholesterol content in the liposomal structure exhibited a stronger protection effect of IgY against pepsin and acid.     

Simple Separation of Immunoglobulin from Egg Yolk by Ultrafiltration

A water-soluble fraction (WSF) was prepared by filtering 10 times diluted yolk (pH 5.0) stored at 4–6°C through Whatman No. 52 or No.1 filter paper for delipidation. However, solid-phase delipidation using an octadecyl column after filtration through a cellulose powder column was more practical for industrial application. After ultrafiltration (UF) of the WSF (pH 9.0,1.5M NaCl), results showed: Amicon 80–85% recovery, 74–99% purity; Harp 72–74% recovery, 81–84% purity; A/G 75% recovery, 89% purity; Koch 88% purity.     

Immunoglobulin Separation from Egg Yolk: A Serial Filtration System

A serial filtration system was developed for separating immunoglobulin from egg yolk (IgY). Egg yolk was diluted 10 times with water, adjusted to pH 5.0, frozen, then thawed. The diluted yolk was diafiltered through a hard filter paper at 4-6°C to produce a clear water-soluble fraction (WSF). The WSF was then delipidated by filtering through a hydrophobic membrane filter. Ultrafiltration of delipidated WSF at pH 9.0, at 4-6°C, in the presence of 1.5M NaCl resulted in electrophoretically pure (>90%) IgY with a recovery of about 92%. Advantages of this method are the use of only a few mild chemicals and the potential of developing a continuous process.     

四种鸡卵黄免疫球蛋白纯化方法的研究

本文比较了分离纯化鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的四种方法(即水稀释法,聚乙二醇法,葡聚糖硫酸盐法和黄原胶法)。包括IgY产量,纯度,活性,简便性及扩大生产规模的潜力。试验表明:水稀释法(DS)产量最高,然后依次为葡聚糖硫酸盐法(DS),黄原胶法(Xan),聚乙二醇法(PEG);同时发现水稀释法简便、快速、高效,适用于工业化生产。     

鸡卵黄抗体(IgY)的制备工艺研究

对鸡卵黄抗体(简称IgY)的制备工艺进行研究。通过低温乙醇沉淀、DEAE葡萄糖凝胶A-50离子交换层析、Tris-HCl缓冲液洗脱及Sephadex G200凝胶过滤等逐步纯化免疫球蛋白。研究卵黄稀释倍数、pH值、乙醇添加量以及盐浓度对纯化效果的影响。分离纯化后所得的提取物经检测IgY纯度可达98%。用大肠杆菌(E.coli)对其活性进行测定,效果良好,此方法能很好保持免疫球蛋白的活性。