菠萝蛋白酶酶活力影响因素及测定酶活力方法的研究进展

文章阐述了湿度、温度、pH、糖类、金属离子、聚乙二醇、有机溶剂和抗氧化剂等各种因素对菠萝蛋白酶酶活力的影响;以及测定菠萝蛋白酶酶活力的方法:福林法、C.D.U法、紫外分光光度法和G.D.U法。其中某些因素具有提高酶活力的作用,某些因素则会抑制酶活力。几种酶活力测定方法在试剂的繁简,操作的复杂性,以及测定灵敏度上均有优劣。     

固定床反应器培养固定化大肠杆菌生产β-葡聚糖酶

以多孔陶瓷为载体吸附法固定重组大肠杆菌E. coli JM 109-pLF3表达胞外β-葡聚糖酶。考察了固定床间歇培养时循环流速和曝气量对发酵液酶活力的影响。当循环流速达到44.19 mL/min,曝气量达到0.6 mL/min时,培养48 h后,发酵液的酶活力达100.3 U/mL。固定化细胞具有良好的重复使用能力,在连续5批次实验中,培养48 h后的酶活力均在100 U/mL左右。固定床连续培养时,固定化细胞能够保持恒定的产酶效率,当稀释率为0.05 h－1时,发酵液中得到的酶活力为39.1 U/mL。     

甲壳素脱乙酰酶产生菌的选育研究

为获得甲壳素生物转化法制备壳聚糖的甲壳素脱乙酰酶菌株,利用平板变色圈法,从经过自然富集的土壤中筛选到一株产甲壳素脱乙酰酶的霉菌CR-3,产酶活力达到41.6 U/m L。通过形态学特征和18S r DNA序列分析,确定其为杂色曲霉(Aspergillus versicolor)。经过紫外诱变后,筛选到产酶活力提高的突变株SD-3,酶活力提高到78.3 U/m L。进一步对突变株的产酶培养基组成进行了优化,产酶活力提高到147.4 U/m L。研究的结果有良好的实际应用价值。     

大分子拥挤下介孔中木瓜蛋白酶的微波辅助固定化

为了增强酶的固定化效果,通过添加大分子试剂,在微波辐射作用下将木瓜蛋白酶固定在介孔泡沫硅的孔道中. 结果表明,在加酶量为400 mg/g时,微波辐射下木瓜蛋白酶与牛血清白蛋白(BSA)共固定化制得的固定化酶催化效果最好. 当BSA含量为加酶量的5%(w)时,固定化酶表观活力高达419.1 U/mg,相对活力和酶活回收率分别为126.0%和119.1%. 影响固定化酶活力的主要因素依次为加酶量、BSA含量、微波功率和固定化pH. 该固定化酶的最适反应pH为7.0,最适反应温度为75℃,热稳定性优于游离酶和未加入BSA的固定化酶,80℃下热处理3 h,剩余活力仍为初始活力的88.2%.     

Ca~(2+)、Mg~(2+)对剩余污泥自培养产酶影响

为提高剩余污泥投加复合菌后产水解酶效果,探讨了添加Ca⁽²⁺⁾、Mg(2+)、Mg⁽²⁺⁾对剩余污泥自培养产酶中污泥水解的影响。结果表明,未加Ca(2+)对剩余污泥自培养产酶中污泥水解的影响。结果表明,未加Ca⁽²⁺⁾、Mg(2+)、Mg⁽²⁺⁾的空白组,蛋白酶和淀粉酶活力均呈现第1 d上升至最大值,后持续降低的趋势。添加0.03 mol/L Ca(2+)的空白组,蛋白酶和淀粉酶活力均呈现第1 d上升至最大值,后持续降低的趋势。添加0.03 mol/L Ca⁽²⁺⁾组的蛋白酶活力第1 d快速升至246.14 U/mL,后持续上升,并在第7 d酶活力达最大值340.07 U/mL,蛋白酶活力最大值较空白组增加了53.94%;淀粉酶活力在第1 d快速升至351.02 U/mL后快速下降,第7d酶活力为70.79 U/mL,淀粉酶活力最大值较空白组增加了51.93%,表明添加0.03 mol/L Ca(2+)组的蛋白酶活力第1 d快速升至246.14 U/mL,后持续上升,并在第7 d酶活力达最大值340.07 U/mL,蛋白酶活力最大值较空白组增加了53.94%;淀粉酶活力在第1 d快速升至351.02 U/mL后快速下降,第7d酶活力为70.79 U/mL,淀粉酶活力最大值较空白组增加了51.93%,表明添加0.03 mol/L Ca⁽²⁺⁾可以提高灭菌污泥自培养产酶效果。而添加0.06 mol/L Ca(2+)可以提高灭菌污泥自培养产酶效果。而添加0.06 mol/L Ca⁽²⁺⁾组酶活力呈下降趋势,表明高浓度Ca(2+)组酶活力呈下降趋势,表明高浓度Ca⁽²⁺⁾对产酶有抑制作用。添加0.03 mol/L或0.06 mol/L Mg(2+)对产酶有抑制作用。添加0.03 mol/L或0.06 mol/L Mg⁽²⁺⁾,不能提高产酶效果,但能维持酶活力稳定。添加合适浓度Ca(2+),不能提高产酶效果,但能维持酶活力稳定。添加合适浓度Ca⁽²⁺⁾、Mg(2+)、Mg⁽²⁺⁾能强化剩余污泥产酶过程中污泥水解效果,促进污泥上清液中有机物水解。     

凹凸棒土固定脂肪酶及其在催化菜籽油转酯反应中的应用

采用吸附法对来源于,Staphylococcus aureus JH的脂肪酶进行了固定化.以凹凸棒土作为载体系统研究了固定化条件对固定化效率及固定化酶转酯活力的影响.结果表明最适加酶量、缓冲液pH和吸附时间分别为0.35 g/g、8.0和3 h,在上述优化条件下固定化酶的转酯活力为465.5 U/g,而所用的游离酶只有较低转酯活性.利用该固定化酶催化菜籽油转酯反应生产生物柴油时,叔丁醇为适宜的反应介质,其最适添加昔为0.8 mL/g;适宜的酶鼍、加水晕和反应温度分别为40.0 U/g、油质量的的1.2%和40℃.按甲醇/油摩尔为3.5的比例在优化反应条件下,反应12 h后甲酯产率达96.0%;固定化脂肪酶具有较好的操作稳定性,反应160批次时,相对酶活力为78.4%.     

不同弹性蛋白酶酶活力条件下野生与养殖全蝎活性成分含量及体外抗肿瘤实验的对比研究

研究了弹性蛋白酶酶活力对野生与养殖全蝎活性成分含量及体外抑制肿瘤细胞生长的影响,筛选了弹性蛋白酶的最佳用量。依据全蝎混合酶解工艺中最佳提取条件,在弹性蛋白酶酶活力分别为2000、1000、400、200、20和0 U的条件下,分别测定野生与养殖全蝎中蛋白质和糖胺聚糖的含量及对肺腺癌(A549)细胞的抑制率。结果养殖全蝎的蛋白质含量显著高于野生的,而糖胺聚糖含量则显著低于野生的;养殖全蝎对肺腺癌细胞的抑制效果高于野生全蝎的抑制效果,且当弹性蛋白酶的酶活力为200U时,养殖全蝎对A549细胞的抑制效果最佳,IC_(50)值为0.331 mg/mL。养殖全蝎对肺腺癌细胞具有较高的抑制作用,弹性蛋白酶的最优酶活力为200 U。     

Ca~(2+)、Mg~(2+)对剩余污泥自培养产酶影响

为提高剩余污泥投加复合菌后产水解酶效果,探讨了添加Ca~(2+)、Mg~(2+)对剩余污泥自培养产酶中污泥水解的影响。结果表明,未加Ca~(2+)、Mg~(2+)的空白组,蛋白酶和淀粉酶活力均呈现第1 d上升至最大值,后持续降低的趋势。添加0.03 mol/L Ca~(2+)组的蛋白酶活力第1 d快速升至246.14 U/mL,后持续上升,并在第7 d酶活力达最大值340.07 U/mL,蛋白酶活力最大值较空白组增加了53.94%;淀粉酶活力在第1 d快速升至351.02 U/mL后快速下降,第7d酶活力为70.79 U/mL,淀粉酶活力最大值较空白组增加了51.93%,表明添加0.03 mol/L Ca~(2+)可以提高灭菌污泥自培养产酶效果。而添加0.06 mol/L Ca~(2+)组酶活力呈下降趋势,表明高浓度Ca~(2+)对产酶有抑制作用。添加0.03 mol/L或0.06 mol/L Mg~(2+),不能提高产酶效果,但能维持酶活力稳定。添加合适浓度Ca~(2+)、Mg~(2+)能强化剩余污泥产酶过程中污泥水解效果,促进污泥上清液中有机物水解。     

纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件优化

从堆肥化处理的甘蔗叶中分离出一株纤维素酶产生菌,并对其产酶条件进行了优化。结果表明,在培养时间为72h、培养温度为30℃、培养基初始pH值为8、接种量为3%的优化条件下,酶活力达90.19U.mL-1。     

黑曲霉分泌β-葡萄糖苷酶过程中pH值的调控

研究了初始pH值对黑曲霉合成β-葡萄糖苷酶的影响,并对产酶过程中pH值进行了人工调控.结果表明,利用黑曲霉合成β-葡萄糖苷酶的最佳初始pH值为5.0;使用氢氧化钠稀溶液能有效地时产酶过程中的pH值进行调控;将产酶期的pH值控制在4.0左右时,有利于β-葡萄糖苷酶的分泌,发酵120 h,酶活力能达到6.12 U·mL-1,大大高于调控前的酶活力.对黑曲霉合成β-葡萄糖苷酶工艺的制定及提高β-葡萄糖苷酶的产率具有重要的指导作用.     

超氧化物歧化酶吸附分离-化学修饰的耦合过程

以超氧化物歧化酶(supcroxide dismutase,SOD)为模板蛋白,将其分离纯化过程和修饰过程耦合起来,从而获得比活更高、稳定性更好的修饰SOD.将SOD选择性地吸附在DEAE-52层析柱和铜离子螯合葡聚糖凝胶柱上,先不经洗脱分离,直接用活化的聚乙二醇(PEG)5000对吸附在柱上的SOD进行化学修饰,再通过特异性洗脱分离获得PEG-SOD,使SOD分离纯化和修饰过程同步完成.SOD通过离子交换吸附层析-PEG修饰耦合过程和金属螯合层析-PEG修饰耦合过程,所得的PEG-SOD比活力分别为9638.0 U/mg和9067.8 U/mg,纯化倍数分别为1.87倍和1.755倍,氨基修饰率分别为35.3%和40.9%.结果表明SOD的分离纯化-化学修饰耦合过程是可行的,且金属螫合层析-修饰耦合过程的效果要优于离子交换吸附层析-修饰耦合过程.     

重组类人胶原蛋白的分离纯化

目的 建立重组类人胶原蛋白分离及纯化工艺。方法 将工程菌株E.coli BL21 3.1在L1523型12.8L自控发酵罐中培养14h,发酵菌体经超声破碎、硫酸铵沉淀后,依次经DEAE-52和Sephadex G-100柱层析分离纯化。结果 发酵菌体干重达到71g/L,表达量为菌体蛋白量的29.4％,最终产物纯度达98％,回收率为80.5％,纯化倍数为3.4。结论 纯化的类人胶原蛋白达电泳纯,相对分子质量为90 000,N端序列为NH_2-H-D-P-V-V-L-Q-R-R-D-W-E-N-P-G,均与其因序列设计一致。     

茯苓多糖的纯化及分子量测定

通过水提醇沉的方法得到茯苓粗多糖,精制后采用离子交换柱层析对多糖进行分离纯化,用高效凝胶过滤色谱法(HPGFC)测定多糖分子量.结果表明,茯苓粗多糖用Sevag法脱蛋白效果较好,获得了精制茯苓多糖(TAP);经DEAE-650C层析柱纯化,得到中性多糖(TAP1)和酸性多糖(TAP2),高效凝胶过滤色谱法测定其分子量分...     

仙人掌超氧化物歧化酶的纯化及其部分性质研究

10 0 0g仙人掌茎经匀浆、硫酸铵分级沉淀、SephadexG - 75凝胶层析和DEAE - 5 2离子交换层析 3个步骤 ,将仙人掌SOD纯化到SDS -PAGE均一纯 ,得白色粉状SOD 0 8985g ,比活 910U/mg,活力回收 4 3 1% ,纯化倍数 76。该酶相对分子质量 37 1kD ,H2 O2 和KCN的抑制实验结果表明为Cu、Zn -SOD。该酶的最大紫外吸收在 2 75nm处。 5 0℃保温 15 0min ,SOD的活性不变 ,在pH =5 0～ 9 0时SOD有较好的稳定性     

免疫抑制酸性蛋白的分离纯化及鉴定

采用卵巢癌腹水为原料，经盐析、DEAE－52、SephadexG100、等电聚焦电泳，Sepharose4B反相免疫亲和层析技术，分离纯化出免疫抑制酸性蛋白（IAP）纯品，经8．0％聚丙烯酰胶凝胶电泳、免疫电泳和双向免疫交叉试验，证实其为单一成分；用此抗原免疫家兔，获得了IAP抗血清，其效价为1：32。     

绿豆胚超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

采用盐析、有机溶剂沉淀及ＤＥＡＥ－ ５２ 柱层析的方法,提纯了绿豆胚超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 。纯酶总活力８００６ Ｕ,总蛋白量为７－３ ｍｇ,比活力为１０９６－８ Ｕ／ｍｇ 蛋白,纯化６４５－２ 倍,活性回收率为４４－２％ 。对其理化性质分析表明：该酶的最大紫外吸收峰为２６０ ｎｍ ,为Ｃｕ、Ｚｎ ＳＯＤ,由２ 个亚基组成,亚基相对分子质量为１５０００。     

糙皮侧耳菌漆酶的分离纯化及部分性质研究

对糙皮侧耳菌5.42产生的漆酶粗酶液通过超滤浓缩、DEAE-Cellulose和SephadexA-50纯化,得到纯化18.1倍漆酶,得率36%,用PAGE检测为单一条带,用SDS-PAGE证明漆酶的分子量为61.4 kD,而用经过高效液相色谱分离的酶液进行质谱检测分子量为60.5 kD。该酶最适温度为40℃,最适pH为5.0。金属离子对酶活有很大的影响,其中K+、Mn2+、Cu2+有明显促进作用,Hg2+、Ag+、Ba2+等对酶活有明显的抑制作用。该酶与果胶酶按比例组合在一起,对荨麻生物脱胶取得良好的脱胶效果——木质素去除率为85%。     

Electro-reduction pulsed column for the purex-process: Operational and theoretical results

Electrochemical in-situ reduction of plutonium and uranium for the separation of U/Pu and purification of Pu shows all the advantages of the external feed U(IV)-process but avoids its drawbacks. In continuation of our previous work with electro reduction mixer settlers (EMMA) an electro reduction pulsed column (ELKE) of technical scale was designed and installed in a pulsed column test facility (PUTE) and is in operation since 1982. Total throughput amounts to 270 kg Pu up to now. ELKE operated reliably both for U/Pu separation in the 1st Purex extraction cycle and for Pu purification in the 2nd extraction cycle. The wide range of operational parameters indicates a technical process of high inherent stability. Theoretical predictions for a process without the need for hydrazine under certain flowsheet conditions were confirmed.Theoretical work was conducted in parallel, leading to the computer model VISCO for the simulation of countercurrent extraction in mixer settlers and in pulsed columns. The paper includes the basis of the model and the design principles of the electroreduction column and some operational results. A sensitivity analysis of this extremely complex process involving countercurrent multicomponent extraction with coupled chemical and electrochemical redox reactions is presented.     

封闭景观水体补充水量研究

分析了上海松江区某植物园景观水体水量补充和损耗的各种因素,对各因素对应的水量进行了深入研究,最终得出了总的补充水量,为植物园水质净化设计提供参考。     

抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的提纯及应用

应用杂交—杂交瘤技术中的三瘤体（Trioma）法，获得的能稳定分泌抗HBsAg—抗HRP双特异单克隆抗体的细胞株BS－33所诱生的BALB／c小鼠腹水为材料，采用三种不同的层析方法（DEAE－52、羟基磷灰石及双亲和层析）均能提纯出该双特异抗体。用于临床检测HBSAg，与科华试剂检测结果符合率为100％。