龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍模型大鼠行为学及海马GR、5-HT受体表达的影响

目的:观察龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠行为学,海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptors,GR)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受体1A亚型(5-HT1A)、2A亚型(5-HT2A)表达的影响。方法:采用单一延长刺激方法制作大鼠PTSD模型,通过旷场实验、拒俘反应实验以及Morris水迷宫实验观察大鼠的情感行为和学习记忆能力的改变。采用RT-PCR法检测海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达。结果:PTSD大鼠表现出多种情感行为障碍,学习能力显著降低(P<0.01)。海马GR表达增强(P<0.01),5-HT1A受体表达下降(P<0.05),5-HT2A受体表达则升高(P<0.05)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))能显著改善PTSD大鼠的情感行为障碍,提高学习记忆能力(P<0.05或P<0.01)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))可以明显降低PTSD大鼠海马GR的表达水平,升高5-HT1A受体表达水平和降低5-HT2A受体表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶对PTSD具有良好的干预治疗作用,其作用机理与改善情感行为和认知功能以及调节海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达有关。     

淫羊藿苷通过激活Notch信号通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的:观察淫羊藿苷骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中的促进作用及其对Notch信号通路的影响。方法:通过对BMSCs细胞进行体外分离培养,将细胞分为对照组与给药组,给药组加入0.1mg·L-1、0.2 mg·L-1、0.4 mg·L-1、1 mg·L-1、2 mg·L-1、4 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1淫羊藿苷分别培养3 d、7 d、10 d、14 d、21 d,测定细胞上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,确定最佳给药剂量。将细胞分为3组,对照组、骨分化诱导组、骨分化诱导+淫羊藿苷处理组(联合组),培育7~21 d后测定ALP阳性染色率,Western blot法检测不同处理后Notch信号通路中Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达情况,RT-PCR法检测淫羊藿苷对Hes1、Runx2 mRNA的影响。结果:与对照组比较,0.1~1.0 mg·L-1淫羊藿苷处理后ALP活性升高较明显,7~14 d内活性均逐渐升高,14 d时活性达到最大值,其中0.4 mg·L-1处理活性最高。因此,选择淫羊藿苷最佳处理质量浓度为0.4 mg·L-1。对照组、联合组在细胞培养7~14 d间,ALP活性逐渐升高,14~21 d活性逐渐下降,第21天ALP活性维持较低水平;诱导组在培养期间ALP活性持续维持较高水平。第7天、第14天,与对照组比较,诱导组、联合组ALP活性升高,且诱导组升高程度高于联合组,差异有统计学意义(P<0.05)。第21天,联合组ALP活性高于对照组、诱导组,差异有统计学意义(P<0.05)。诱导组、联合组ALP阳性染色率均高于对照组,且联合组高于诱导组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,联合组、诱导组Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达量均升高,联合组蛋白表达量明显高于诱导组。RT-PCR结果显示诱导组Hesl、Runx2 mRNA表达量均高于对照组,联合组Hesl、Runx2 mRNA表达量高于诱导组。结论:淫羊藿苷能够促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并通过上调Hesl、Runx2 mRNA表达以及增加Noth1、CBF1、Jagged-1蛋白表达来实现。     

淫羊藿总黄酮对高脂血症大鼠血脂水平的影响

目的探讨淫羊藿总黄酮（TFE）对高脂血症大鼠总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平的影响。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为普通饲料组（9只）和高脂饲料组（31只）。高脂饲料组大鼠喂以高脂饮食12周后检测空腹血脂,26只造模成功。随机又分为3组,模型组（8只）、淫羊藿大剂量组（9只,淫羊藿200 mg灌胃,1次.d-1,连续4周）及淫羊藿小剂量组（9只,淫羊藿100 mg灌胃,1次.d-1,连续4周）,16周后检测血脂水平。结果干预前,高脂饲料组大鼠血清中的TG、TC以及LDL-C水平均高于普通饲料组（均P〈0.01）,HDL-C与普通饲料组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。干预4周后,模型组的TG、TC水平均明显高于普通饲料组（均P〈0.01）;淫羊藿大剂量组及淫羊藿小剂量组的TG、TC水平明显低于模型组（P〈0.05或P〈0.01）;淫羊藿大、小剂量组对LDL-C、HDL-C水平的影响比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 TFE能够降低高脂血症大鼠TG、TC水平。     

骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响

目的:观察骨碎补总黄酮与淫羊藿苷对人骨髓基质干细胞增殖及蛋白表达的影响。方法:采用人骨髓基质干细胞单独培养,按照干预药物浓度(mmol·L-1)分为:骨碎补总黄酮10-4mmol·L-1组、10-6mmol·L-1组、10-8mmol·L-1组和淫羊藿苷10-4mmol·L-1组、10-6mmol·L-1组、10-8mmol·L-1组。运用噻唑蓝比色法(MTT法),分别在实验第1天、第3天、第5天、第7天时观察其增殖情况。同时,运用蛋白免疫印迹方法(in-cell western blot)分别测定人骨髓基质干细胞培养时骨源性碱性磷酸酶蛋白的表达情况。采用一般线性模型的重复测量方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:药物作用第5天,骨碎补总黄酮10-6mmol·L-1、10-8mmol·L-1组和淫羊藿苷10-4mmol·L-1、10-6mmol·L-1、10-8mmol·L-1组增殖能力优于对照组,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。在药物作用于人骨髓基质干细胞第9天时,骨碎补总黄酮10-6mmol·L-1组、淫羊藿苷10-6mmol·L-1组骨源性碱性磷酸酶的表达量是优于对照组的,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:骨碎补总黄酮、淫羊藿苷可以促进人骨髓基质干细胞的增殖,10-6mmol·L-1的骨碎补总黄酮、淫羊藿苷对BALP表达无显著影响。     

淫羊藿苷对骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL/RANK轴系统影响的实验研究

目的通过观察不同剂量淫羊藿苷对去势骨质疏松症模型大鼠骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨其对骨改建影响的可能机制。方法将健康雌性SD大鼠切除双侧卵巢,造成骨质疏松症大鼠模型,以低、中、高剂量(200,400,800 mg/kg)淫羊藿苷灌胃3月后,取大鼠右后肢胫骨近端干骺端,利用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测OPG mRNA、RANK mRNA和RANKL mRNA的表达。结果淫羊藿苷上调OPG mRNA的同时下调RANKL mRNA和RANKL mRNA,这种调节作用在高剂量时最为显著。结论淫羊藿苷可影响大鼠OPG mRNA,RANKL mRNA,RANKL mRNA的表达,此作用与骨改建密切相关。     

石上柏颗粒对肝癌模型小鼠瘤组织中Cyclin D1、CKS表达的影响

目的:研究石上柏颗粒对肝癌模型小鼠瘤组织中Cyclin D1、CKS表达的影响。方法:选取48只肝癌模型小鼠,随机分为为模型组、氟尿嘧啶组、石上柏颗粒组、联合给药组,每组各12例。氟尿嘧啶组给予氟尿嘧啶20 mg·kg~(-1)灌胃,石上柏颗粒组给予石上柏颗粒120 mg·kg~(-1)灌胃,联合给药组同时灌胃氟尿嘧啶20 mg·kg~(-1)和石上柏颗粒120mg·kg~(-1),模型组小鼠给予同体积纯净水,各组小鼠连续灌胃不同药物4周,比较各组小鼠治疗期间肿瘤生长情况,采用RT-PRC法测定各组小鼠瘤组织中Cyclin D1 mRNA、CKS mRNA的表达,采用West-blot法测定瘤组织中Cyclin D1、CKS蛋白的表达。结果:(1)给药1周、2周、3周、4周时氟尿嘧啶组小鼠移植瘤体积均较模型组小鼠显著降低(P<0.05),给药2周、3周、4周时石上柏颗粒组小鼠移植瘤体积均较模型组小鼠显著降低(P<0.05),给药3周、4周时联合给药组移植瘤体积均较氟尿嘧啶组小鼠显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(2)给药4周时氟尿嘧啶组、石上柏颗粒组和联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1 mRNA、CKS mRNA均较模型组显著降低(P<0.05),而联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1mRNA、CKS mRNA较氟尿嘧啶组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)给药4周时,氟尿嘧啶组、石上柏颗粒组和联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1和CKS蛋白均较模型组显著降低(P<0.05),而联合给药组小鼠瘤组织Cyclin D1和CKS蛋白较氟尿嘧啶组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:石上柏颗粒有显著抗肝癌作用,且可以增强氟尿嘧啶的疗效,其抗肝癌作用可能与其抑制Cyclin D1和CKS表达有关。     

淫羊藿对激素性股骨头坏死兔模型血钙血磷的影响

目的:观察淫羊藿提取液对激素性股骨头坏死兔模型血钙、血磷变化及骨密度的影响,探讨淫羊藿提取液的作用机理。方法:所选用动物随机分为空白组10只,造模组20只。所有参加造模组动物第一次应用马血清10 m L·kg-1,经兔耳缘静脉注射;间隔3周后,再次经兔耳缘静脉注射马血清6 m L·kg-1;间隔2周后,按45 mg·kg-1的剂量给予甲基强的松龙腹腔注射,连续3 d,每天注射1次。注射激素期间,为了预防感染,每只动物每天腹腔注射青霉素10×104U,连续7 d。预防感染。空白组动物常规饲养。造模完成后随机选取空白组、造模组动物各一只解剖出股骨头做病理观察,证实造模成功(空气栓塞法处死)。随后空气栓塞法处死造模动物3只及空白组动物1只(总共4只),至最后一次注射激素后将所剩造模组16只动物随机分为两组即模型组和实验组。空白组和模型组动物每天给予10 m L生理盐水灌胃,实验组动物每天给予10 m L淫羊藿提取液灌胃,共连续灌胃8周,8周后检测各组动物血钙、血磷及骨密度变化情况。结果:给药8周后空白组(2.478±0.117)mmol·L-1与实验组(2.330±0.135)mmol·L-1血磷比较,差异有统计学意义(P>0.05);空白组、实验组和模型组(1.301±0.186)mmol·L-1血磷比较,有统计学意义(P<0.05)。空白组(1.081±0.333)mmol·L-1与实验组(1.201±0.281)mmol·L-1血钙相比较,差异无统计学意义(P>0.05);空白组、实验组和模型组(1.336±0.359)mmol·L-1血钙比较,差异有统计学意义(P<0.05)。给药8周后空白组骨密度为(0.203 5±0.014 8)g·cm-2,高于模型组(0.1689±0.011 9)g·cm-2,二者比较差异,差异有统计学意义(P<0.05);空白组与实验组(0.192 3±0.008 2)g·cm-2比较,二者比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组、空白组和模型组骨密度比较,二者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:糖皮质激素能够降低血磷水平而升高血钙水平,淫羊藿提取液能够降低糖皮质激素引起的高血钙水平及升高糖皮质激素引起的低血磷水平。     

天王补心丹联合迷迭香精油对阿尔兹海默病模型小鼠记忆功能的影响

目的:观察天王补心丹联合迷迭香精油对阿尔兹海默病模型小鼠记忆功能的影响。方法:50只SD小鼠随机平均分为5组:空白组、模型组、吸入组、中药组、中药+吸入组。除空白组外,其余各组分别腹腔注射东莨菪碱3 mg,1次·d~(-1),连续14 d。从第15天开始,吸入组吸入迷迭香精油,每次30 min,3次·d~(-1);中药组灌胃天王补心丹4.71g·kg~(-1),2次·d~(-1);中药+吸入组联合吸入组和中药组的方法,共8 d,空白组和模型组给予等体积生理盐水。于给药前1 d,给药后1 d、4 d、8 d,T迷宫测试各组小鼠的记忆能力,旷场实验测试各组小鼠的跨越格数和潜伏期;末次给药1 h后,分析主要脏器系数。结果:给药1 d后,中药+吸入组跨越格数[(32.78±2.96)个]显著高于模型组[(23.15±1.30)个](P<0.05);中药+吸入组潜伏期[(2.91±0.19)s]显著低于模型组[(4.24±0.51)s](P<0.05)。中药+吸入组T迷宫记忆测试正确率(36.26%)显著高于模型组(17.91%)(P<0.05);给药4 d后,中药+吸入组跨越格数[(40.56±3.08)个]显著高于模型组[(25.13±1.71)个](P<0.05);中药+吸入组潜伏期[(2.54±0.21)s]显著低于模型组[(4.19±0.42)s](P<0.05)。给药8 d后,吸入组T迷宫记忆测试正确率(38.01%)、中药组(39.78%)和中药+吸入组(45.21%)均显著高于模型组(18.22%)(P<0.05);吸入组跨越格数[(41.37±3.16)个]、中药组[(39.46±3.14)个]、中药+吸入组[(51.22±4.24)个]显著高于模型组[(24.68±1.49)个](P<0.05);中药+吸入组潜伏期[(1.97±0.06)s]显著低于模型组[(4.18±0.39)s]。中药组心脏系数(3.938 9±0.131 2)和肝脏系数(0.384 6±0.055 8)均显著低于模型组心脏系数(4.401 5±0.391 4)和肝脏系数(0.540 8±0.083 4)(P<0.05)。结论:天王补心丹和迷迭香精油均可改善阿尔兹海默病小鼠的记忆功能,但以二者联合使用效果为佳;迷迭香精油联合天王补心丹对小鼠记忆力有改善作用,可以兴奋中枢神经系统,使其在新异环境中的自发活动和探究行为明显增加;天王补心丹对阿尔兹海默病模型小鼠有一定的不良反应,迷迭香精油可降低天王补心丹对阿尔兹海默病模型小鼠的不良反应。     

原花青素预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用

目的:探讨原花青素(proanthocyanidins,PC)对大鼠缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)心肌能量代谢的影响及其抗氧化能力。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机均分为4组:空白对照组、IRI模型组、PC 80 mg·kg~(-1)、PC160 mg·kg~(-1)组。首先用不同剂量的PC对大鼠进行预处理,然后利用Langendorff灌流技术制备心肌IRI模型,并观察PC作用后,IRI心肌高能磷酸化合物(high energy phosphates,HEP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的变化。结果:PC 160 mg·kg~(-1)组和PC 80 mg·kg~(-1)组左心室心肌组织的三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)及总腺嘌呤核苷酸(total adenine nucleotides,TAN)分别为(0.16±0.06)mg·g~(-1),(0.51±0.15)mg·g~(-1),(0.80±0.26)mg·g~(-1),(1.47±0.44)mg·g~(-1)和(0.14±0.07)mg·g~(-1),(0.34±0.11)mg·g~(-1),(0.74±0.31)mg·g~(-1),(1.22±0.44)mg·g~(-1),均高于IRI模型组(P<0.01);PC 160 mg·kg~(-1)组左心室肌组织的ADP高于PC 80 mg·kg~(-1)组(P<0.01)。与IRI模型组比较,PC 2个剂量组左心室肌组织的SOD活性分别为(154.3±23.7)n U·mg~(-1),(134.1±18.8)n U·mg~(-1),活性升高(P<0.01,P<0.05);MDA含量分别为(3.4±0.6)μmol·g~(-1),(2.6±0.6)μmol·g~(-1),含量减少(P<0.01);PC 2个剂量组左心室肌组织的SOD活性、MDA含量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PC具有改善IRI心肌能量代谢和抗氧化的作用,能起到保护心肌IRI的作用。     

出生前PM_(2.5)暴露对成年期小鼠肝脏纤维化发生的影响及机制研究

目的:探讨出生前PM_(2.5)暴露对成年小鼠肝脏纤维化的影响及其相关机制。方法:20只未经产的4周龄的SPF级C57BL/6J雌性小鼠随机分为对照组(n=10)和PM_(2.5)暴露组(n=10),暴露7周之后,按照雌雄2︰1的比例合笼并继续暴露至子鼠出生,出生后的雄性子鼠饲养至32周。处死后,观察出生前PM_(2.5)暴露对小鼠体重、生化指标(TC、TG、AST、ALT)、肝脏组织纤维化及相关基因表达(TGF-β1、α-SMA、CollagenⅢ)、氧化应激(SOD活性、MAD含量)和炎性指标(TLR4和TNF-α)基因表达的影响。结果:PM_(2.5)暴露组小鼠出生体重低于对照组,成年期体重、肝脏组织TG含量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组血清TC、TG、AST、ALT水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);PM_(2.5)暴露组小鼠肝脏组织中TGF-β1、α-SMA、CollagenⅢ的mRNA表达水平和蛋白表达灰度值均高于对照组(P<0.05);出生前PM_(2.5)暴露组小鼠肝脏SOD活性低于对照组,肝脏组织MAD含量、TLR4和TNF-α的mRNA表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:出生前PM_(2.5)暴露显著增加小鼠成年期肝脏脂肪酸和胶原蛋白的蓄积,降低肝组织中SOD活性、增加MAD含量及炎性基因的水平,并上调TGF-β1、α-SMA和CollagenⅢ基因的表达,可通过激活TGF-β1信号通路诱导肝纤维化的发生。