重组人睫状神经营养因子突变体及其聚乙二醇修饰物的制备及其对ob/ob肥胖小鼠体重、糖脂代谢的影响

目的制备重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)突变体[rhCNTF(R~(63)15)]及其聚乙二醇修饰物[P-rhCNTF(R~(63)15)]探讨两者对ob/ob肥胖小鼠体重及糖脂代谢的影响。方法采用rhCNTF(R~(63)15)突变体工程菌株E.coli BL21(DE3)表达rhCNTF(R~(63)15)经硫酸铵沉淀、Butyl HP和Q HP纯化后采用PEG修饰剂Y-40KD-MAL-mPEG对其C17游离巯基进行定点修饰,经QH P层析纯化获得P-rhCNTF(R~(63)15)。上述产物进行SDS-PAGE、纯度、修饰率、二级结构表征、修饰位点、体外活性、体内药代动力学检测。将ob/ob小鼠分为P-rhCNTF(R~(63)15)组(0.05、0.1、0.2 mg/kg)、rhCNTF(R~(63)15)组及赋形剂组均采用高脂饲料喂养同时设C57BL/6J组(普通饲料喂养C57BL/6J小鼠),检测各组小鼠的体重、摄食量及糖脂代谢情况。结果rhCNTF(R~(63)15)及P-rhCNTF(R~(63)15)纯度分别为97.4%和99.3%,平均比活分别为9.5×10~5和6.9×10~5 IU/mg,相对比活分别为100%和72.6%;rhCNTF(R~(63)15)修饰率达90%以上大多数为单修饰产物PEG修饰未影响rhCNTF(R~(63)15)的二级结构,修饰位点发生在DLCSR肽段的C17上;P-rhCNTF(R~(63)15)经皮下及静脉途径给药的血药浓度均在注射后约72 h降至给药前水平。与赋形剂组比较,P-rhCNTF(R~(63)15) 0.05、0.1、0.2 mg/kg剂量组小鼠在疗程结束时体重组分别减轻了10%、11%和21%(P 0.05) rhCNTF(R~(63)15)组减轻了30%(P 0.01);治疗后15 d,rhCNTF(R~(63)15)及P-rhCNTF(R~(63)15)各剂量组小鼠摄食量明显降低(P0.05),随后逐渐恢复正常水平;P-rhCNTF(R~(63)15)各剂量组从给药后8 d起,小鼠随机血糖有所降低,呈一定的量效关系,rhCNTF(R~(63)15)组从给药后4 d开始有所下降;P-rhCNTF(R~(63)15) 0.2 mg/kg剂量组和rhCNTF(R~(63)15)组的口服糖耐量(oral glucose resistant test,OGTT)曲线下面积(AUC_(0～2h))及腹腔内脂肪重量显著降低(P0.05),rhCNTF(R~(63)15)及P-rhCNTF(R~(63)15)各剂量组小鼠皮下脂肪均显著降低(P0.01)。结论制备了较高纯度的rhCNTF(R~(63)15)及P-rhCNTF(R~(63)15),两者对ob/ob肥胖小鼠的体重过高、高血糖症体脂重量过高均具有良好的疗效且P-rhCNTF(R~(63)15)更长效。     

聚乙二醇修饰的重组人睫状神经营养因子对非酒精性脂肪肝的药效学作用

目的 研究聚乙二醇（PEG）修饰的重组人睫状神经营养因子（recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF）对ob/ob小鼠非酒精性脂肪肝（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的治疗作用,为PEG-rhCNTF的临床应用提供参考。方法 以14只4～10周龄雌性野生型C57BL/6J小鼠为正常对照组,83只4～10周龄雌性ob/ob小鼠分为赋形剂组、利拉鲁肽0.1 mg/kg组（每天给药2次）和0.2 mg/kg组（每4 d给药1次）、rhCNTF 0.1 mg/kg组（每天给药1次）以及PEG-rhCNTF 0.05、0.1和0.2 mg/kg组（每4 d给药1次）,每组11～12只,均经皮下注射给药。给药期间测定小鼠体质量、24 h饲料消耗量、连续血糖和随机血糖水平及口服葡萄糖耐量;实验终点时,先测定小鼠空腹血糖水平,再测定空腹血清胰岛素（fasting serum insulin,FINS）水平,并计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment of i...     

贝伐珠单抗生物类似药临床前药代动力学的相似性评价

目的评价生物类似药重组抗人血管内皮生长因子人源化单克隆抗体(recombinant humanized anti vascular endothelial growth factor monoclonal antibody,rhuMab VEGF)ASK-B1202(简称T)及原研药贝伐珠单抗(Avastin,简称R)在食蟹猴体内药代动力学(pharmacokinetic,PK)的相似性。方法选取16只食蟹猴,随机分为2组:供试品(T)及参比品(R)组,每组8只,雌雄各半,分别给药5 mg/kg,于给药前(0 min)及给药后15 min、30 min、1 h、8 h、2 d、4 d、7 d、10 d、14 d、18 d、21 d、28 d和35 d采集血样,ELISA法检测T及R的血药浓度,并进行方法验证。应用WinNonlin软件生物等效模块计算进行T及R的PK参数的相似性评估。结果 T与R标准曲线比较,差异无统计学意义(P>0. 05),呈现一致的反应性;方法的灵敏度为39. 1 ng/mL,定量范围为39. 1～5 000 ng/mL;方法的精密度、准确度、稀释线性、选择...     

制蚜菌素毒性研究

研究制蚜菌素的急性、亚慢性毒性及致突变性结果表明,急性经口LD50雌雄性大鼠均为38.3mg/kg,雄性小鼠为38.3mg/kg,雌性小鼠为17.8mg/kg,急性经皮LD50雄性大鼠为1470mg/kg,雌性大鼠为1210mg/kg;小鼠骨髓多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验及Ames试验结果均为阴性。大鼠亚慢性经口毒性无作用剂量雄性大鼠为(0.18±0.01)mg/(kg.d),雌性大鼠为(0.22±0.02)mg/(kg.d)。     

重组人睫状神经营养因子生物学活性检测方法的建立

目的建立重组人睫状神经营养因子(Recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF)的生物学活性检测方法 ,在其研制和生产中进行有效的质量控制。方法应用鸡胚睫状神经节细胞培养法和鸡胚背根神经节法,对rhCNTF进行定性和半定量检测;应用TF-1.CN5a.1细胞增殖法检测rhCNTF的活性;应用正常小鼠减重法,对rhCNTF的减肥生物学活性进行检测。并探索4种方法的实验条件及优缺点。结果上述4种方法均能用于rhCNTF的生物学活性测定,以TF-1.CN5a.1细胞增殖法及正常小鼠减重法结合使用最为有效。结论可联合使用TF-1.CN5a.1细胞增殖法和正常小鼠减重法,对重组rhCNTF进行质量控制。     

新诊断2型糖尿病患者血清Nesfatin-1水平变化与胰岛素抵抗的相关性研究

目的:探讨新诊断2型糖尿病患者血清Nesfatin-1水平及其与胰岛素抵抗的相关性。方法:随机收集新诊断2型糖尿病患者60例,按照身体质量指数(BMI)分为两组,肥胖T2DM组(BMI≥25kg/m~2)30例和非肥胖T2DM组(BMI25kg/m~2)30例,收集相同时间段的健康体检者30例作为健康对照组。记录受试者的一般资料,测定受试者血中的相关指标,如高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胆固醇(TC)、空腹胰岛素(FIns)、甘油三酯(TG),计算出胰岛素抵抗指数及胰岛β细胞功能指数。用ELisa法检测血清Nesfatin-1水平。结果:血清Nesfatin-1水平在肥胖T2DM组高于非肥胖T2DM组和健康对照组,且Nesfatin-1水平在非肥胖T2DM组高于健康对照组。Pearson及Spearman相关分析表明,血清Nesfatin-1水平与体重、BMI、WHR、TC、TG、LDL-C、FPG、HbA1c、IR呈正相关,与胰岛β细胞功能指数、HDL-C呈负相关。多元线性逐步回归分析结果:IR及HbA1c是Nesfatin-1的独立影响因素。结论:新诊断2型糖尿病患者血清中Nesfatin-1水平明显升高,血清Nesfatin-1与糖脂代谢及胰岛素抵抗关系密切。     

代森锰原药对大鼠90d饲喂毒性

应用Sprague Dawley(以下简称SD)大鼠对90%代森锰原药进行T90 d饲喂毒性试验研究.试验设计1个对照组及3个剂量组,分别为0、300、900、2700 mg/kg饲料,每组20只动物,雌雄动物各10只.试验结果表明:经饲料给予90%代森锰原药900 mg/kg饲料则可引起受试动物食欲降低、体质量增长抑制毒性反应.经给予90%代森锰原药2700 mg/kg饲料不但引起受试动物食欲降低、体质量增长受抑制,还引起受试动物双后肢麻痹.根据试验结果,在实验条件下,90%代森锰原药对SD大鼠90d喂饲给药最大无作用剂量:雄性(24.2±1.7)mg/kg体质量/day,雌性(24.9±1.5)mg/kg体质量/day.     

重组人红细胞生成素对慢性肾衰大鼠的疗效

建立慢性肾衰贫血大鼠的动物模型后 ,分别用基因重组人红细胞生成素 (r Hu EPO)按 45 0 IU /kg、15 0 IU /kg、 5 0 IU /kg 3组剂量连续 14d皮下注射上述大鼠 ,同时设立阳性对照组及阴性对照组。结果发现r Hu EPO只能治疗肾衰造成的贫血 ,而对肾衰无治疗作用。     

Ⅰ型糖尿病模型大鼠在重复给药毒性试验中的应用

目的研究Ⅰ型糖尿病模型大鼠在精蛋白重组人胰岛素注射液重复给药毒性试验中的应用。方法使用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)对健康SD大鼠造模,55 mg/kg,计算6个月后的存活率。取模型大鼠,分高、中、低剂量(30、12、5 U/kg)组和对照组,每组20只,雌雄各半,高、中、低剂量组给予精蛋白重组人胰岛素注射液,对照组给予精蛋白重组人胰岛素注射液辅料空白液,均经大鼠皮下注射,1次/d,连续4周,进行重复给药毒性试验,给药4周后,经大鼠腹主动脉采血,检测血清胰岛素含量、C肽含量、糖化血红蛋白含量以及血液生化学和血液细胞学相关指标,并进行组织病理学观察。结果模型大鼠血糖均高于16.7 mmol/L,建模成功率为91.7%,6个月存活率为82%,确定建模成功。重复给药毒性试验高剂量组大鼠死亡4只。与其他剂量组相比,给药结束后和恢复期结束后高剂量组大鼠血清中糖化血红蛋白降低(P0.05);与对照组相比,给药结束后,胰岛素、C肽含量升高(P0.05),恢复期结束后,高、中剂量组胰岛素、C肽含量升高(P0.05);与对照组相比,给药结束后,高剂量组雄鼠和雌鼠血清中白蛋白、血小板升高(P0.05),淋巴细胞数降低(P0.05),而雌鼠红细胞、白细胞减少(P0.05),其余血液细胞学指标未见明显差异。恢复期结束后,各剂量组血液生化学和血液细胞学指标均无差异,建模成功大鼠主要脏器均出现病理变化,重复给药毒性试验中各组大鼠各主要脏器在给药结束后和恢复期结束后也分别出现不同程度的病理变化。结论用STZ造模的Ⅰ型糖尿病大鼠对于精蛋白重组人胰岛素产生的低血糖反应具有较好的耐受性,接近于临床患者的病理生理特征,在使用精蛋白重组人胰岛素进行重复给药毒性试验中具有实际应用价值。     

己酸二乙氨基乙醇酯亚慢性经口毒性

按照GB15670-1995的要求进行了己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6）90d的亚慢性经口毒性试验。结果显示,与对照组相比,雌、雄性大鼠高剂量组的体重增长明显减慢（p〈0．05）;雄性大鼠高剂量组AST、ALB两项指标升高（p〈0．05）,肝、肺脏器系数增长（p〈0．05）。高、中剂量组雌、雄性大鼠发生心肌小灶炎症和肾脏小灶炎症的动物数明显增多。根据试验结果,受检样品己酸二乙氨基乙醇酯对大鼠的无作用剂量为：雄性40．2mg/kg bw／d,雌性49．1mg／kg bw／d。     

生物农药阿维菌素的NEL和ADI研究

研究了阿维菌素原药的急性和亚慢性毒性及致突变性。结果显示,大鼠经口LD50雌雄性均为21.5mg/kg,小鼠经口LD50雌性为68.1mg/kg,雄性为38.3mg/kg,大鼠经皮LD50雌雄性均大于2000mg/kg。家兔急性皮肤刺激试验,对皮肤的刺激强度属无刺激性。家兔眼刺激试验,对眼的刺激强度属轻度刺激性。小鼠骨髓多染红细胞微核试验和小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验均为阴性。大鼠亚慢性经口毒性试验,21.5mg/kg饲料组雌性大鼠体重增加量低于对照组,雌雄性大鼠食物利用率低于对照组,雌雄性大鼠心/体比、肺/体比、肾/体比高于对照组,雌性大鼠脑/体比高于对照组,雄性大鼠脾/体比低于对照组,雌雄性大鼠血液生化指标ALB、GLU高于对照组。最大无作用剂量(NEL)为:雌性大鼠(0.796±0.062)mg/kg·d,雄性大鼠(0.635±0.056)mg/kg·d。若以安全系数100倍考虑,人的每日允许摄入量(ADI)应为0.0058mg/kg·bw。     

98%呋虫胺原药对大鼠两代繁殖毒性研究

为探讨98%呋虫胺原药对大鼠亲代生殖与子代早期发育的影响,采用饲喂法进行亲代(F0)和子一代(F1)染毒,剂量分别为0、8、40和200 mg/(kg·d),连续饲喂8周,观察亲代和子代大鼠的毒性表现,对生殖器官进行病理检查,计算繁殖指数和脏器系数。结果表明,与阴性对照组相比,F1代高剂量组雌性大鼠第2～7周的摄食量及总摄食量降低(P0.01;P0.05);高剂量组仔鼠出生存活率偏低(P0.05)。供试药剂对两代大鼠的最大无作用剂量为40 mg/(kg·d),最小有害作用剂量为200 mg/(kg·d)。     

超声萃取气相色谱-质谱联用法快速测定儿童产品中2种有机磷阻燃剂

建立了气相色谱-质谱(GC-MS)联用法快速测定儿童产品中2种有机磷阻燃剂,磷酸苯基(二叔丁基苯基)酯(DBPP)和2,2-双氯甲基-三亚甲基-双[双(2-氯乙基)磷酸脂(V6)的分析方法。考察了不同萃取方法,不同萃取溶液,不同极性色谱柱对DBPP和V6分离检测的影响。采用丙酮作为萃取溶剂,超声萃取样品中DBPP和V6,选用DB-5MS色谱柱进行目标物分离,质谱定量检测。结果显示,DBPP在0.01¹0 mg/kg内,线性关系良好(R2>0.999 1),重现性良好。V6在110 mg/kg内,线性关系良好(R2>0.999 1),重现性良好。V6在1³0 mg/kg内,线性关系良好(R2>0.999 3),重现性良好。在0.0130 mg/kg内,线性关系良好(R2>0.999 3),重现性良好。在0.01¹0 mg/kg添加水平内DBPP的平均回收率为89.3%10 mg/kg添加水平内DBPP的平均回收率为89.3%⁹4.2%,相对标准偏差3.8%94.2%,相对标准偏差3.8%⁴.3%。在14.3%。在1³0 mg/kg V6添加水平内的平均回收率为87.2%30 mg/kg V6添加水平内的平均回收率为87.2%⁹5.7%,相对标准偏差4.8%95.7%,相对标准偏差4.8%⁶.5%。DBPP和V6的方法检出限(S/N>10)分别为0.01,1 mg/kg。该方法快速简捷,灵敏度高,定性准确,易于操作,适用于进出口儿童产品中的DBPP和V6日常检测工作。     

PPAR-γ在肥胖及其并发症中的作用概述

肥胖与胰岛素抵抗,葡萄糖耐受不良,高血压和血脂异常等并发症,统称为代谢综合征(Met S)。是全球面临的最具挑战性的健康问题之一。饮食和生活方式的变化是肥胖增长的主要原因。目前,肥胖治疗方法有很多,主要针对脂蛋白,血压或人体测量指标进行对症治疗。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)参与脂质和脂蛋白水平的代谢调节,对甘油三酯(TG),血糖和腹部肥胖具有一定调节作用。其中PPAR-γ在治疗肥胖及其并发症的研究最为广泛,PPAR-α和γ的合成配体纤维酸和噻唑烷二酮已用于患有2型糖尿病和糖尿病前期胰岛素抵抗的患者中,具有显着改善血糖水平的作用。本文就PPAR-γ在肥胖及其并发症中的治疗作用及其机制进行综述。     

新诊断2型糖尿病患者血清SIRT4水平变化及其与胰岛素抵抗的相关性研究

目的:探讨新诊断T2DM患者血清SIRT4水平变化与胰岛素抵抗的相关性。方法:选取2019年12月至2020年08月于佳木斯大学附属第一医院就诊的新诊断2型糖尿病患者60例,其中T2DM超重肥胖组30例(BMI≥25 kg/m~2)和T2DM体重正常组30例(BMI25 kg/m~2),另选同期健康体检者30例做为健康对照组,ELISA检测SIRT4水平,同时测身高、体重、腰围、臀围、FPG、HbA1c、TG、TC、HDL-C、LDL-C、Fins等指标,计算BMI、WHR、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β),分析新诊断T2DM患者血清SIRT4水平与胰岛素抵抗的关系。结果:(1)与健康对照组比较,血清SIRT4水平在T2DM组明显降低,T2DM超重肥胖组降低更显著(P0.01)。(2)SIRT4与HDL、HOMA-β成显著正相关(P0.01),与体重、体质指数、FPG、HbA1c、Fins、WC、HC、WHR、TG、TC、LDL-C、HOMA-IR成显著负相关(P0.05或P0.01)。(3)多元线性回归结果显示,HOMA-IR与WC是SIRT4的独立危险因素。结论:血清SIRT4与T2DM、肥胖及胰岛素抵抗密切相关。     

氟吗啉原药对Wistar大鼠致畸性毒性研究

以Wistar大鼠为实验动物,进行了氟吗啉(SYP-L190)原药对该品系大鼠的致畸性毒性研究.设计剂量为30mg/kg、132mg/kg、300mg/kg3个剂量组和1个阴性对照组(食用油)及1个阳性对照组(敌枯双),对妊娠大鼠于第6～15天染毒.在动物怀孕第20天将妊娠大鼠脱颈椎处死,取出胎鼠进行检查.结果表明:在本试验条件下,以300mg/kg剂量经口投与wistar妊娠大鼠,可产生较明显的胚胎毒性作用,但没有出现致畸作用.     

短暂前脑缺血再灌注对大鼠海马脑区脑源性神经营养因子蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨短暂前脑缺血再灌注(transient forebrain ischemia-reperfusion,I/R)对脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor,BDNF)蛋白及mRNA表达的影响,为进一步探索大鼠海马CA1区神经元损伤机制提供新的思路。方法将雄性SD大鼠随机分为control组、sham组和I/R组,利用Western blot和荧光定量PCR分析I/R后大鼠BDNF蛋白及mRNA表达的变化;染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)试验检测I/R后大鼠BDNF基因启动子上H3K27的乙酰化水平。结果与control组相比,sham组大鼠CA1和CA3区BDNF蛋白和m RNA表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。与sham组相比,I/R组大鼠CA1区BDNF蛋白表达显著下降(P <0. 001),而CA3区BDNF蛋白表达增高(P <0. 05);I/R组大鼠CA1区BDNF mRNAⅠ、Ⅱ和Ⅵ的表达均显著增高(P <0. 01),而mRNAⅣ的表达...     

2型糖尿病多种脂肪细胞因子水平及罗格列酮干预治疗的影响

目的 观察罗格列酮治疗2型糖尿病对多种脂肪细胞因子水平的影响及其与胰岛素抵抗的关系.方法 糖尿病组2型糖尿病病人56例,男性33例,女性23例,年龄(61±7)a,随机分为2组.观察组30例,予罗格列酮4mg·d-1;对照组26例,予二甲双肌和(或)磺酞脉类降糖药,疗程均为2 mo并设正常组,健康者54例,男性30例,女性24例,年龄(61±8)a.测定治疗前后各组的血压、抵抗素、脂联素、瘦素、血糖、胰岛素抵抗水平.结果 糖尿病组血压,空腹血糖和胰岛素、胰岛素抵抗指数、抵抗素和瘦素水平均高于正常组,脂联素水平低于正常组.治疗后,观察组抵抗素和瘦素分别降低(1.73±0.22)和(1.4±0.4)mg·L-1,血糖、胰岛素抵抗明显改善,与治疗前及对照纽相比,差异有非常显著意义(P＜0.01);脂联素升高(0.6±0.6)mg·L-1,与对照纽[升高(0.4±0.3)mg·L-1]无显著差异(P＞0.05).抵抗素与空腹胰岛素、脂联素呈负相关(r=-0.386,r=-0.387),与体重指数、三酞甘油和腰臀比呈正相关(r=0.4,r=0322,r-=0.298).结论 罗格列酮可改善2型糖尿病病人抵抗素、瘦素、脂联素水平,这些脂肪细胞因子的改变可能与2型糖尿病病人胰岛素抵抗的改善有关.     

重组人胰岛素的药效学及药理学检测

经检测 ,重组人胰岛素注射液生物学效价为 2 8.2U mg。按 0 .5、1.0和 2 .0U kg皮下注射 ,对小鼠正常血糖、葡萄糖型高血糖以及大鼠四氧嘧啶型高血糖均有明显的降低作用。重组人胰岛素对雄性小鼠LD5 0 为 2 1.6 9± 2 .46U kg,雌性为 47.5 6± 6 .10U kg。犬长期毒性试验表明 ,未出现任何毒性。     

翻白草对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的探讨翻白草(HPD)对2型糖尿病(2-DM)大鼠胰岛素抵抗(IR)的影响。方法高热量饲料加链脲佐菌素(STZ)建立2-DM大鼠模型,通过测定其胰岛素敏感指数(ISI)的变化来研究不同剂量HPD水煎剂对上述各指标的影响。结果HPD治疗组ISI高于2-DM大鼠模型组,并且与正常对照组和二甲双胍治疗组相比无显著性差异(P>0.05)。结论HPD水煎剂可降低2-DM大鼠胰岛素抵抗。