轮状病毒疫苗的研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是世界范围内引起婴幼儿腹泻的主要病原体。RV疫苗的研制工作已取得了很大进展,但仍存在较大缺陷。目前投入使用的3种RV疫苗虽然能够对重症腹泻起到良好的保护作用,但却不能很好地预防RV感染,因此继续研制新的RV疫苗十分重要。本文对RV及RV疫苗的研究进展作一综述。     

轮状病毒疫苗的研发进展

轮状病毒(rotavirus,RV)是引起5岁以下儿童严重急性腹泻的主要病原菌之一,全球每年有50万~60万儿童死于RV引起的腹泻,其中90%以上来自发展中国家,在非洲和亚洲低收入国家造成了严重的疾病负担。几乎全球所有儿童在5岁以前均感染过RV,临床上对RV引起的腹泻尚无特异性治疗手段,RV疫苗的合理应用是减轻腹泻的最有效方法。本文主要对目前国内外RV疫苗的研发进展、面临的挑战及未来的展望作一综述。     

轮状病毒的分子生物学研究进展

<正> 轮状病毒(RV)为双层壳病毒,基因组含11个双股RNA片段。临床上RV是婴幼儿腹泻最主要的病原,RV的基础研究对防治腹泻具有重要意义。本文综述近年来RV的分子生物学研究的一些进展和现状。     

口服轮状病毒减毒活疫苗Rotarix的现状及研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内导致婴幼儿重症腹泻的重要病原。由于当前尚无治疗RV感染的特效药物,因此,开发安全、有效的疫苗具有重要意义。G1型RV流行范围较广,本文主要对目前国内外上市的3种RV疫苗中的G1P[8]型Rotarix疫苗的情况作一综述。     

轮状病毒Vp6蛋白的免疫荧光检测

目的检测在大肠杆菌BL21(DE3)中表达的重组轮状病毒(Rotavirus,RV)Vp6蛋白和RV SA11感染的MA104细胞中不同时间表达的Vp6蛋白及其分布规律。方法应用纯化的重组A组人轮状病毒TB-Chen株Vp6(rVp6)蛋白和RVSA11分别免疫豚鼠,制备抗血清,以抗rVp6豚鼠血清作为检测抗体,应用间接免疫荧光技术检测rVp6蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。分别用抗Vp6和抗RV SA11豚鼠血清检测Vp6蛋白和RV SA11株在感染的MA104细胞中的分布。结果在轮状病毒感染的MA104细胞和大肠杆菌BL21(DE3)中均能检测到轮状病毒Vp6蛋白。以抗RV SA11血清作为一抗检测感染细胞,比用抗rVp6血清检测具有更强的敏感性。结论免疫荧光试验可用于轮状病毒Vp6蛋白的检测。     

湘潭县和融水县2岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻病流行病学调查

目的通过对监控区域内腹泻病例的监测,获取轮状病毒(rotavirus,RV)腹泻发生率。方法在广西壮族自治区融水县、湖南省湘潭县两个地区的村卫生室及乡镇卫生院中开展腹泻监测,收集腹泻病例和流行病学信息,采集病例粪便样本。应用ELISA法检测RV,RT-PCR法对其进行基因分型。结果湘潭县和融水县RV腹泻高峰主要集中在2月份,分别占总数的45. 9%和53. 9%;两地腹泻发病率为285. 1/(1 000人·年),RV检出率为18. 0%,RV腹泻发病率为51. 2/(1 000人·年);湘潭县和融水县的轮状病毒血清型均以G9型(分别占58. 7%和73. 7%)和P8型为主(分别占67%和81. 6%)。结论 RV是导致2岁以下婴幼儿腹泻的常见病原体,湘潭和融水县的RV流行株均为G9型和P8型,流行高峰为2月。     

轮状病毒病毒样颗粒疫苗的研究进展

轮状病毒(rotavirus,RV)是全球范围内导致5岁以下婴幼儿严重腹泻的主要病原体,造成了巨大的经济和社会负担。目前,疫苗预防接种是控制RV感染最有效的手段,但目前已上市RV疫苗的有效性较低,且会增加肠套叠的风险。病毒样颗粒(VLP)在构象上与亲本病毒相似,具有高度免疫原性,且不存在毒力回复突变等风险。RV-VLP疫苗不仅能够刺激细胞和体液免疫反应,而且能提供更好的血清型覆盖。因此,RV-VLP疫苗作为下一代候选疫苗具有巨大的潜力。     

婴幼儿益生菌食品的应用现状及发展前景

针对婴幼儿特殊的免疫需求,婴幼儿益生菌食品在人们生活中发挥了越来越重要的作用。本文简要介绍婴幼儿益生菌食品中益生菌的种类、特点、主要功能以及国内外婴幼儿益生菌食品的应用现状、发展前景等,为开展基础研究提供支撑及指导消费者合理选购。     

轮状病毒的早期细胞侵入机制

轮状病毒(rotavirus,RV)是导致全世界范围内婴幼儿及多种幼龄动物腹泻的最主要传染性病原。该无囊膜病毒可以通过多种方式侵入细胞,而且不同的病毒毒株在细胞侵入机制上存在较大差异。阐明RV的细胞侵入机制将有助于解析病毒的致病机制并有利于疾病防控,降低其所造成的社会负担和经济损失。本文对RV在细胞侵入的早期阶段的侵入机制作一综述。     

牛轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的原核表达牛轮状病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制备其多克隆抗体。方法根据Gen Bank中登录的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)设计一对特异性引物,RT-PCR扩增牛RV UK株VP6全长编码区片段,克隆至载体p ET-28a,构建重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6,转染至E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。将重组蛋白与弗氏佐剂混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周,经心脏采血,分离血清,制备VP6多克隆抗体,Western blot法检测其与牛RV的反应原性。结果经双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6构建正确。重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物分别为43 000、34 000、27 000和15 000 4种不同相对分子质量的重组蛋白,纯化后纯度可达95%以上,可与牛RV阳性血清发生特异性反应。制备的VP6蛋白多克隆抗体效价1∶7 000,且可识别RV天然VP6蛋白。结论原核表达了牛RV VP6蛋白,并制备了抗VP6多克隆抗体,为后续RV疫苗效力评价及RV侵入机理等方面的研究奠定了基础。     

轮状病毒检测技术的研究进展

轮状病毒是引起婴幼儿病毒性腹泻最常见的病原体,对轮状病毒进行快速、准确的检测,对轮状病毒感染的病原学、流行病学研究以及疫苗的研制和治疗效果评价均有重要意义。本文就轮状病毒检测技术的最新研究进展作一综述。     

狂犬病病毒CVS-11毒株基质蛋白鼠源和兔源多克隆抗体的制备、鉴定及比较

目的 制备狂犬病病毒（rabies virus,RV）基质蛋白（M）鼠源和兔源多克隆抗体,并比较其反应原性。方法 以RV CVS-11毒株感染细胞后的cDNA为模板构建原核表达载体pET-28a-M,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经镍柱亲和层析、透析复性后,免疫雌性BALB/c小鼠和雌性新西兰大白兔,取全血,分离血清,ELISA法检测鼠源和兔源多克隆抗体效价,Western blot法、间接免疫荧光试验（immunofluorescence assay,IFA）、免疫沉淀（immunoprecipitation,IP）法检测鼠源和兔源多克隆抗体反应原性。结果 质粒pET-28a-M经测序鉴定证明构建正确;制备的鼠源和兔源多克隆抗体效价分别为1∶100和1∶256 000,与不同RV毒株均具有反应原性。结论 成功制备了M蛋白鼠源和兔源多克隆抗体,为探讨M蛋白与宿主蛋白相互作用的关系以及研究RV的致病机制提供了重要的生物学工具。     

我国微生态药物市场近期行情

微生态制剂可分成三大类：益生菌、益生元与合生素。益生菌是指能够促进肠内菌群生态平衡，对宿主起有益作用的活的微生物制剂。生产用益生菌菌种应符合的条件是菌种必须具有存活能力并能进行工业化规模生产；     

人产肠毒素大肠杆菌基因工程疫苗的研究进展

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻的主要致病菌之一,在世界范围内,每年可导致数亿人发生腹泻,尤其是发展中国家的婴幼儿和儿童。目前,世界各国通过构建新型的ETEC基因工程疫苗预防ETEC引起的腹泻。将ETEC的肠毒素基因和菌毛蛋白基因转化至无毒的受体菌中,构建出基因工程疫苗,免疫人体后可有效预防ETEC引起的腹泻。本文就ETEC的致病机理及国内外ETEC基因工程疫苗的最新研究进展作一综述。     

我国微生态药物价格优势已现

微生态制剂可分成三大类：益生菌、益生元与合生素．益生菌是指能够促进肠内菌群生态平衡，对宿主起有益作用的活的微生物制剂．生产用蓝生菌苗种应符合的条件是菌种必须具有存活能力并能进行工业化规模生产；在使用和贮存期间应保待稳定的活存状态：在肺内或其他环境内具有存活能力：必须对宿主产生有益的作用；无毒、无害．     

抗狂犬病病毒抗体的制备及酶联免疫法的建立

目的制备具有中和活性的抗狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)抗体,并建立检测RV抗原的ELISA法。方法以RV全病毒免疫2只新西兰家兔,制备抗RV多克隆抗体。以RV全病毒免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,建立稳定分泌抗RV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以小鼠中和试验(MNT)检测抗体的中和活性。以ELISA双抗体夹心法和ELISA竞争法检测RV抗原。结果2只家兔的多克隆抗体ELISA效价分别为1∶6.0×103和1∶1.2×104,纯化的兔抗RVIgG中和活性分别为46.3和29.2IU/ml。获得了9株稳定分泌抗RV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,属于IgG1或IgG2b亚型,腹水的抗体ELISA效价为1∶1.0×105~1∶1.0×107。单克隆抗体3E5、4C2和4F8具有中和活性,Westernblot分析提示,单克隆抗体4C2是针对RV糖蛋白线性表位的抗体。以单克隆抗体4C2作为捕捉抗体,兔多克隆抗体作为检测抗体,建立了ELISA双抗体夹心法,检测RV抗原。同时建立了另一种ELISA竞争法,加入固定工作浓度的单克隆抗体4C2,与RV病毒液孵育,以ELISA间接法检测RV病毒抗原。结论所获得的狂犬病毒多克隆和单克隆抗体具有中和活性,可在ELISA中用于检测RV抗原。     

Vero细胞对狂犬病病毒aGV株的易感性

目的探讨WHO引进的Vero细胞对狂犬病病毒(rabies virus,RV)aGV株的易感性。方法将RV aGV按MOI 0.01~0.1感染Vero细胞主代和工作代,显微镜下观察细胞形态;免疫荧光法观察感染24、48、72和96 h细胞内病毒的增殖情况;连续培养15 d,每天取上清液,采用免疫荧光法检测病毒滴度。结果 RV感染Vero细胞可致细胞圆缩病变,病毒感染第7天,病变率约为20%;RV感染Vero细胞主代和工作代24 h单个细胞内可见特异性荧光灶,48 h 20%~30%细胞内可见荧光灶,72 h 60%~80%细胞内可见荧光灶,96 h 90%~100%细胞内可见荧光灶;病毒感染后2~8 d,上清液中检测到的RV滴度均在103~108 FFU/ml之间波动,均为第8天达到高峰,达5.0×108FFU/ml以上。结论 WHO引进的Vero细胞对RV aGV株有较强的易感性,可应用于狂犬病疫苗的规模化生产。     

灭活轮状病毒与灭活肠道病毒71型联合疫苗的免疫效果

目的评价灭活轮状病毒(rotavirus,RV)与灭活肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠,同时设单价疫苗组,均经小鼠腿部肌肉注射,隔2周免疫1次,共2次,分别于每次免疫后2周,经小鼠尾静脉采血,分离血清,经56℃灭活30 min后,采用血清中和试验检测小鼠血清中抗RV和抗EV71中和抗体效价。结果初次免疫后14 d,各组小鼠血清中RV特异性中和抗体阳转率为50%~67%,中和抗体效价为2.2~2.8,加强免疫后14 d,抗体阳转率达100%,中和抗体效价为28.5~35.9。初次免疫后14 d,各组小鼠血清中抗EV71中和抗体阳转率为83%~100%,中和抗体效价为4.0~7.1,加强免疫后14 d,中和抗体阳转率达100%,中和抗体效价为25.4~71.8;联合疫苗组与单价疫苗组间抗RV及抗EV71中和抗体效价差异无统计学意义(P0.05);RV和EV71抗原量按160/160 EU配比时,可诱导出最高的抗RV抗体及抗EV71抗体应答。结论 RV与EV71联合疫苗可诱导小鼠产生针对两种病毒的体液免疫应答,抗体应答水平与疫苗抗原配比剂量相关,未发现两种抗原间有协同或拮抗作用。     

婴幼儿抗生素相关性腹泻临床分析

目的观察婴幼儿口服头孢克肟干混悬剂导致抗生素相关性腹泻(AAD)情况及同时服微生态制剂妈咪爱防治效果。方法选择呼吸道感染婴幼儿A组(头孢克肟组)386例,口服头孢克肟(3mg/kg,bid);B组(同时加服妈咪爱组)338例,疗程7～10d,比较两组抗生素相关性腹泻发生率,腹泻平均持续时间,探讨发病原因及防治。结果A组与B组婴幼儿抗生素相关性腹泻发生率分别为23.47%,7.84%,总发病率分别为37.86.77%。B组发生率显著降低、持续时间短、病情轻。结论婴幼儿口服头孢克肟所致抗生素相关性腹泻发病率较高,用药时间越长,发病率越高,病情越重。妈咪爱对抗生素相关性腹泻有显著防治作用。     

婴幼儿腺病毒呼吸道感染的临床X线诊断

婴幼儿急性下呼吸道感染,是指肺和支气管急性炎症。本文主要论述腺病毒引起的婴幼儿呼吸道感染。