1例犊牛腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及毒力基因检测

目的 对1例犊牛腹泻大肠埃希菌进行分离鉴定及毒力基因检测.方法 无菌采集发病牛肝脏、脾脏、肾脏及十二指肠等脏器,制备肝脾组织切片,HE染色后观察组织病理学变化,并对分离菌株进行动物试验、生化试验、药敏试验、16S rRNA的PCR鉴定、系统进化树分析、毒力基因检测及O抗原鉴定.结果 心脏、肝脏病理学组织切片有明显坏死及...     

海洋细菌的抑菌谱研究及鉴定

本实验采用琼脂扩散法研究了11种来源于北冰洋沉积物的海洋细菌对9种人类和动物致病菌(大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,白色念珠菌,弧菌,铜绿假单胞菌,沙门氏菌,肺炎克雷伯菌,屎肠球菌,鲍曼不动杆菌)的抑菌谱。并对效果最好的65号菌株进行了鉴定,确定其为芽孢杆菌。     

苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1的分离筛选及鉴定

目的从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌,并进行鉴定。方法分离自被污染的蝴蝶兰初代培养基的苏云金芽孢杆菌经富集后,筛选伴胞晶体产生菌BZ-1,显微镜观察进行鉴定;采用PCR法分析菌株BZ-1的16S rDNA和脂肽抗生素合成相关基因,SDS-PAGE分析菌株的伴胞晶体;制备菌株发酵粗提液,提取活性物质,分别置于不同温度(50、60、80、100℃)30 min、用不同的蛋白酶(蛋白酶K、胰蛋白酶)于37℃处理30 min,以枯草芽孢杆菌作为指示菌检测菌株的抑菌活性;并检测菌株对小菜蛾的毒力。结果菌株BZ-1能产生芽孢,并在芽孢旁形成多个无规则伴胞晶体;该菌株的16S rDNA扩增产物测序结果经与GenBank中登录的16S rDNA核苷酸序列进行BLAST比对,与B.anthracis str.Ames(NR_074453)、B.cereus(NR_074540)和B.thuringiensis Bt407(NR_102506)菌株相似度达99%,表明菌株BZ-1属于芽孢杆菌属,结合扫描电镜观察结果,可初步确定该菌株为苏云金芽孢杆菌;该菌株可扩增出脂肽抗生素合成相关基因sfp、mycB、ituA、fenB;该菌株从培养2 d芽孢形成后开始分泌相对分子质量约130 000的晶体蛋白,4 d时蛋白表达量增加,6 d后蛋白表达量基本达到稳定;该菌株具有一定的热稳定性,对蛋白酶K具有一定的耐受性;该菌株于30℃培养6 d,对小菜蛾表现出较高的毒力。结论从被污染的蝴蝶兰初代培养基中分离筛选的苏云金芽孢杆菌伴胞晶体产生菌BZ-1所产的抗菌物质主要抑制革兰阳性细菌,具有较高的毒力,可作为原始菌株发酵进行田间生物防治,也可为构建杀虫基因工程菌以及培育抗虫转基因植物提供高毒力的候选基因,具有较好的应用前景。     

1株牛源大肠埃希菌的分离及鉴定

目的分离及鉴定内蒙古自治区通辽市某牛场犊牛腹泻致病菌。方法无菌采集犊牛腹泻粪便,通过分离培养、染色镜检、致病性检测、药敏检测、生化鉴定、16S r RNA PCR鉴定、血清型鉴定及系统进化树的构建进行病原研究。结果致病菌的16S rRNA基因序列与大肠埃希菌的相似性在99%以上;生化鉴定该致病菌为大肠埃希菌的置信度为99%,在20种常用药品中仅对阿米卡星、庆大霉素、亚胺培南、美洛培南敏感;血清鉴定该大肠埃希菌菌株的血清型为O17。结论该致病菌鉴定为大肠埃希菌,该菌具有多重耐药性,有成为人畜共患病病原的潜在可能。该研究为通辽地区牛场流行的大肠埃希菌防控提供了参考。     

2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选

从受2,4,6-三溴苯酚(TBP)严重污染的污泥中分离TBP降解菌,并采用HPLC分析方法进行复筛,得到高效TBP降解菌株TBPY,通过细菌的形态特征、培养及生理特征、生理生化实验对TBPY菌株进行了初步的菌种鉴定,最终鉴定该菌株为假单胞菌属Pseudomonas aeruginosa.TBPY。     

双重荧光定量PCR技术在药品微生物检验中的应用

目的建立快速检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的双重荧光定量PCR方法并在药品微生物检测中应用。方法通过设计特异性引物和探针,扩增金黄色葡萄球菌的femB基因和铜绿假单胞菌的DNA gyrase subunit B基因,建立荧光定量PCR方法。将该方法应用于30批次药品微生物检测。结果建立同时检测金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的双重荧光定量PCR方法,从DNA提取到检测完毕仅需2 h。检测灵敏度为50 copies/μL,特异性为100%。30批次样品检验结果表明该方法与传统细菌培养方法结果一致。结论该法缩短了检测时间,具有良好的灵敏性和特异性,在药品微生物检验中有很好的应用前景。     

聚合酶链式反应技术检测化妆品中的铜绿假单胞菌

利用聚合酶链式反应(PCR)技术建立了一种快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。根据已报道的铜绿假单胞菌特异性基因ETA设计引物,确定引物的特异性和灵敏度;对染菌化妆品样品进行增菌检测。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有铜绿假单胞菌基因组的样品中得到条带;对染菌样品的扩增结果显示,可以在原样品的活菌浓度为6 cfu.mL-1时通过增菌12 h后检出。     

铜绿假单胞菌在水体的生长特性研究及其在不同温度下生长预测模型的建立

目的:为了更好的了解铜绿假单胞菌在水体中的生长特性,并预测铜绿假单胞菌在不同温度水体中的生长情况,从而有效降低环境中潜在的铜绿假单胞菌污染风险。方法:本实验研究了铜绿假单胞菌标准菌株在不同温度下的生长情况,之后使用Richards模型、MMF模型、Gompertz模型和Logistic模型进行数据拟合,构建不同温度下的最佳模型。结果:MMF模型适用于15℃、25℃和35℃下水体环境中的铜绿假单胞菌生长模型的构建。Logistic模型可以用来模拟5℃下铜绿假单胞菌的生长模型。结论:该模型能够较好的描述铜绿假单胞菌在不同温度下的生长规律和变化特征,能够为铜绿假单胞菌在水体环境中的生长提供较为准确地预测数据。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌毒力基因检测及药敏分析

目的:了解我院临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的毒力基因携带情况及耐药特点方法:收集2018年6月到2019年6月我院分离出的CRKP菌株42株;先用PCR方法检测毒力基因magA、uge、kfu、allS、iroNB、mrkD、kpn、fimH,并对这些菌株进行黏液丝试验。结果:42株CRKP经PCR检测fimH携带率为88.1%(37/42),mrkD携带率为92.9%(39/42),kpn携带率为92.9%(39/42);所有菌株均携带uge基因;magA,kfu,iroNB,alls均未检出。42株CRKP黏液丝试验均为阴性。结论:ESBL阳性的CRKP对临床常用的抗菌药物耐药性明显高与ESBL阴性的菌,差异有统计学意义(p0.05)。     

碳水化合物衍生的黄腐酸:一种前景广阔的加速伤口感染愈合的耐药病原体外用制剂

正研发了一种安全有效的药物,该药物主要成分为碳水化合物衍生的黄腐酸(CHD-FA),可以用来防止人遭受外伤时耐药性细菌和真菌感染。通过500个与伤口相关的药物敏感或耐药的细菌和真菌病原体临床分离株,建立了对CHD-FA的最低抑菌浓度。运用活体大鼠模型,评估前期使用CHD-FA增强耐甲氧西林金黄色葡萄球菌或铜绿假单胞菌伤口愈合的疗效。研究结果表明,CHD-FA对多种细菌和真菌病原体有较强的抑制作用,最小抑菌     

假单胞菌代谢尼古丁研究进展

假单胞菌和节杆菌是两种最重要的尼古丁降解菌,目前节杆菌降解尼古丁的代谢途径、代谢相关基因和酶学机制都已经研究清楚,但是对假单胞菌降解尼古丁的研究尚不完善。本文将主要针对假单胞菌,从目前分离到的假单胞菌属微生物的菌株种类、代谢途径、代谢相关基因和酶学机制等方面阐述假单胞菌属微生物降解尼古丁的研究进展。     

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌耐药机制及高危因素的研究进展

碳青霉烯是一种非典型内酰胺类药物,因为它抗菌谱广,抗菌能力强等特征,临床上常用于医治重大的细菌感染。近期,随着此类药物的普遍运用,致使一些肠杆菌科细菌(如铜绿假单胞菌)对其敏感性逐年下降。此类现象的出现,导致临床对这类细菌的医治相当棘手。本文将从耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(Carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)耐药机制及高危因素的角度出发,为临床控制和治疗耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌提供帮助。     

不同来源奇异变形杆菌对小鼠致病力及其毒力基因携带情况的比较

目的比较通辽地区不同来源奇异变形杆菌对小鼠致病力及其毒力基因携带情况。方法取4株(SPM、GPM、BPM-1和BPM-2)不同来源的奇异变形杆菌,进行生化鉴定、药物敏感性测试及动物致病性试验,对4株菌株的8种毒力基因(ureC、zapA、mrpA、ucaA、rsbA、pmfA、atfA、atfC)进行PCR检测,对其16S r RNA基因序列进行同源性和系统进化树分析。结果 4株菌株均被鉴定为奇异变形杆菌;对4株病原菌均高度敏感的药物有丁胺卡那、美罗培南、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、他巴克坦和氨曲南7种,均不敏感的药物有庆大霉素、亚胺培南、头孢唑啉、氨苄西林、克拉维酸、黏菌素、磺胺甲恶唑、氯霉素、环丙沙星和四环素10种;4株菌株的半数致死量(LD50)按BPM-2、BPM-1、SPM、GPM依次降低,鹅源的毒力最高;奇异变形杆菌具有不同的毒力基因谱,8种毒力基因在菌株SPM、GPM、BPM-2中均被检出,菌株BPM-2未检出ucaA基因。BPM-2和BPM-1处于同一分支,但分处于不同的末支;SPM和GPM分处于不同的小分支。结论不同来源的奇异变形杆菌对小鼠的致病力存在较小的差异,且对小鼠有致病力的基因表型与该毒力基因的分布可能存在一定的相关性。     

酸氧化电位水对病原微生物的消毒效果分析

目的:分析酸性氧化电位水对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌临床分离的影响,及15株真菌的杀菌效果。方法:采用微生物实验室方法对各种消毒剂进行鉴定。结果:用酸性氧化电位水溶液处理耐甲氧西林金。金黄色葡萄球菌和非甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌对铜绿假单胞菌的杀菌效果分别为99.9、99.9、99.9和99.9。对念珠菌的杀灭率在240s达到99.9。结论:酸性氧化电位水是一种理想的临床细菌和真菌消毒剂。杀菌时间随细菌种类和真菌种类而不同,但对有机物的影响较大。     

26株铜绿假单胞菌对常用抗菌药物敏感性的体外研究

目的了解院内感染铜绿假单胞茵的耐药性变化情况,为临床诊治提供参考。方法收集2005年至2007年我院各科临床标本,分离培养铜绿假单胞茵并做药敏鉴定,分析其耐药性的变化。结果共检出26株铜绿假单胞茵。进行抗生素的耐药性检测,亚胺培南和哌拉西林、环丙沙星等抗生素的具有较强的抗菌作用,氨苄西林和头孢曲松为甚,其耐药率高达96.15%和84.62%。结论要加强对铜绿假单胞茵的耐药性检测并合理使用抗生素以延缓耐药菌株增加。     

大米草黄酮的体外抗菌效果及机理研究

目的:研究大米草黄酮(Spartina anglica flavone,SAF)的体外抗菌效果及机理.方法:以铜绿假单胞菌等5种常见临床病原菌为试验菌株,采用牛津杯法测量抑菌圈并观察SAF的药物敏感性;采用微量稀释法测定SAF的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);测量经5 g/L SAF处理后的铜绿假单胞菌...     

恶臭假单胞菌的采集及菌种鉴定分析

恶臭假单胞菌作为碳酸盐岩表面的优势菌株,其生长繁殖及代谢活动不仅可以加速岩石矿物的风化,还可以促进或诱导矿物的合成,生物沉积碳酸盐的现象在自然界非常普遍。白云岩作为典型的碳酸盐岩,其表面分布着多种重要的微生物。本文选用采集自白云岩表面的疑似恶臭假单胞菌的优势菌种,对其进行生理生化实验鉴定,根据实验结果初步判断其为恶臭假单胞菌,为进一步证实鉴定结果,又对该菌株进行DNA测序分析,结果表明其确为恶臭假单胞菌。对该菌株的鉴定为研究其对碳酸盐岩的风化、表面形貌及对周边环境的影响提供了重要依据。     

2003年至2010年铜绿假单胞菌的耐药性变迁及临床对策

目的调查及分析临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及其变迁,为临床合理用药提供依据。方法对医院2003年1月至2010年12月住院患者各种标本中分离到的铜绿假单胞菌1124株,采用20种抗菌药物进行药敏试验,并比较4年的变迁。结果分离到的铜绿假单胞菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢替坦、头孢唑林、呋喃妥因、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均>90.00%;对碳青酶烯类美罗培南产生了51.51%的耐药率;对头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素、头孢匹美、头孢他啶、环丙沙星的敏感率均>60.00%;而最敏感的是妥布霉素、阿米卡星。结论铜绿假单胞菌对阿米卡星、妥布霉素敏感性最高,而对其他几种多药耐药现象严重,当引起临床重视。     

化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检出能力验证结果与分析

为提升对化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的检测能力,增强实验室竞争能力,本实验室参加CNAS T0710化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检出能力验证。按照能力验证作业指导书和《化妆品卫生规范》(2007年版)的要求进行增菌,采用16Sr DNA全序列分析、全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2)和全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer)对分离出的疑似菌进行鉴定。结果显示,样品HZP167-1检出金黄色葡萄球菌,HZP167-2检出铜绿假单胞菌,HZP167-3检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,HZP167-4检出表皮葡萄球菌,HZP167-5未检出。5个样品测试均取得满意的结果。     

一株对苯二甲酸降解菌的鉴定及其降解特性

从扬子石油化工责任有限公司废水处理装置的污泥池中分离、筛选得到了一株高效降解对苯二甲酸（PTA）的菌株，PA-18.采用PCR扩增获得该菌16SrDNA片段，核苷酸序列分析结果表明：该菌株的16SrDNA的核苷酸序列与多株假单胞菌（Pseudomonas sp.）的同源性为99%，在细菌系统发育分类学上，该菌株属于假单胞属.在温度为37℃、pH 7.0、OD_{660 nm}2.0条件下，反应24 h，此菌对PTA的降解率大于95 %.同时对于实际的PTA废水也有很好的处理效果，COD_Cr去除率高达85%.在好氧降解作用下，PTA降解的主要中间物被确定为原儿茶酸.