酵母源金属硫蛋白对急性汞中毒小鼠的排汞作用及对机体氧化损伤的修复

目的探讨酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)对急性汞中毒小鼠的排汞及对机体氧化损伤的修复作用。方法经颈部皮下注射氯化汞生理盐水溶液建立急性汞中毒小鼠模型。酵母源MT-1及MT-2的低、中、高剂量组(0.16、0.40、0.80 mg/kg bw)均于每日同一时间灌胃给药,连续给药14 d,同时设模型组(等体积生理盐水)、阳性对照组(DMPS,0.80 mg/kg bw)及正常组小鼠(等体积生理盐水)。末次灌胃给药后小鼠禁食12 h,测量小鼠体重,检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,机体总抗氧化能力(T-AOC)及丙二醛(MDA)含量;同时测定血液、肝脏和肾脏中汞离子的含量。结果与正常组小鼠比较,模型组小鼠体重显著下降(P0.05);血清SOD、GSH-Px活力及T-AOC显著降低(P0.05),MDA含量及血液、肝脏、肾脏中汞离子含量显著上升(P0.05)。与模型组小鼠比较,除两种低剂量MT组外,其他剂量MT组小鼠体重均显著上升(P0.05);各MT组小鼠血清SOD、GSH-Px活力及T-AOC均明显升高(P0.05),MDA含量及血液、肝脏、肾脏中汞离子含量均明显降低(P0.05),且高剂量MT效果最佳。结论两种酵母源MT对急性汞中毒小鼠具有良好的排汞作用,并可修复机体的氧化损伤,且作用效果与给药剂量呈正相关。     

椰子油和大豆油的乙氧基化物对小鼠肝脏的脂质过氧化效应研究

为探讨椰子油乙氧基化物-36EO(COE-36)和大豆油乙氧基化物-42EO(SOE-42)对小鼠肝脏的脂质过氧化作用,采用腹腔注射技术,测定COE-36处理组、SOE-42处理组、氯化镉阳性对照组(小鼠单位体质量的氯化镉用量为2.5μg.g-1)和生理盐水阴性对照组小鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)生成量。结果表明,氯化镉显著抑制了小鼠肝脏SOD和CAT活性,增加了MDA生成量;在所测3个指标中,COE-36和SOE-42的3个用量组(以小鼠单位体质量的用药量计)与生理盐水阴性对照组相比均无显著性差异;与氯化镉阳性对照组相比,不同用量COE-36作用下SOD和CAT活性变化、不同用量SOE-42作用下CAT活性变化以及低用量(3 mg.g-1)COE-36或SOE-42作用下MDA生成量变化均有显著性差异,说明在所试用量(3～5 mg.g-1)下,这2种表面活性剂不会引起小鼠肝细胞的脂质过氧化。     

酵母源金属硫蛋白对急性铅中毒小鼠的排铅及过氧化损伤修复作用

目的探讨具有自主知识产权的两种构型酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)对急性铅中毒小鼠的排铅及过氧化损伤修复作用。方法一次性经腹腔注射醋酸铅溶液(100 mg/kg),构建急性铅中毒小鼠模型,另设正常对照组(NOR组,注射生理盐水0.2 mg/kg)。将模型小鼠随机分为11组:模型对照组(Mo D组,注射生理盐水0.2 mg/kg)、阳性对照组[二巯基丁二酸(dimercaptosuccinic acid,DMSA)组,注射DMSA 0.16 mg/kg]、动物源MT(Zn-MT)低(0.16 mg/kg)、中(0.2 mg/kg)、高(0.24 mg/kg)剂量组、MT-Ⅰ低、中、高剂量组、MT-Ⅱ低、中、高剂量组,每组10只。造模2 h后,小鼠每天同一时间一次性灌胃给药0.2 ml,连续14 d。实验期间,每天观察并记录小鼠形态特征及体重变化。末次给药24 h后,每组随机选取5只小鼠,测定血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)水平(抗氧化酶活性);各组其余5只采用石墨炉原子吸收光谱法测定血液中矿物元素铅的含量。结果小鼠急性铅染毒后,体重升高程度显著下降(P0.05),灌胃给药14 d后,仅DMSA组小鼠中毒症状改善,体重与NOR组小鼠差异无统计学意义(P0.05);MT处理组小鼠体重与Mo D组差异无统计学意义(P0.05)。与MT处理组比较,DMSA组小鼠血铅含量显著下降(P0.05),MDA含量显著升高(P0.05)。与Mo D组比较,MT处理组小鼠血铅水平显著下降(P0.05),且呈显著的量效关系(P0.05),MT-Ⅰ与Zn-MT排铅效果差异无统计学意义(P0.05),但显著高于MT-Ⅱ(P0.05)。3种MT处理组小鼠血清中MDA、SOD及GSH-Px水平驱于正常(P0.05),其中MT-Ⅰ与MT-Ⅱ组小鼠血清中MDA水平显著低于Zn-MT组(P0.05),SOD与GSH-Px水平差异无统计学意义(P0.05)。结论两种构型的酵母源MT对急性铅中毒小鼠具有显著的排铅效果,与动物源MT效果类似,并能显著提高抗氧化酶活性,减少脂质过氧化产物,从而修复铅致机体过氧化损伤。     

人参皂苷Rg1对辐射致造血干/祖细胞衰老的影响及其机制

目的探讨人参皂苷Rg1对辐射致造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cell,HSC/HPC)衰老的影响及其机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假照射组、照射组和照射+Rg1组,照射组与照射+Rg1组利用6.5 Gy的X射线全身一次性辐射小鼠。照射+Rg1组于照射前第7天起连续经腹腔注射人参皂苷Rg1 20 mg/(kg·d),照射后继续注射同剂量人参皂苷Rg1直至处死;照射组同时注射等剂量的生理盐水;假照射组小鼠处理同照射组,但不照射。辐射后不同时间点处死各组动物,改良免疫磁性吸附细胞分选(magnetic activated cell sorting,MACS)法分离、纯化骨髓Sca-1+HSC/HPC并计数;SA-β-gal染色检测衰老细胞百分率;流式细胞术分析细胞周期;造血祖细胞混合集落(colony forming unit-mixture,CFU-Mix)体外培养评价人参皂苷Rg1对辐射小鼠HSC/HPC衰老的影响;彗星试验测定细胞DNA损伤;并检测细胞内SOD活性和MDA含量。结果经MACS分离纯化后,Sca-1+HSC/HPC的纯度可达93.66%,活性可达99.4%。照射组Sca-1+HSC/HPC数量显著降低,且恢复缓慢,照射+Rg1组Sca-1+HSC/HPC数量下降在照射后第3天和第7天得到阻止,与照射组比较,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.001);照射组SA-β-gal阳性细胞率明显高于假照射组和照射+Rg1组(P<0.001);照射组Sca-1+HSC/HPC与假照射组相比出现G1期阻滞,照射+Rg1组第3和第7天G1期细胞比例较照射组降低(P<0.05或P<0.01);照射组Sca-1+HSC/HPC形成CFU-Mix的数量明显低于假照射组(P<0.001),照射+Rg1组形成CFU-Mix的数量较照射组明显增加(P<0.001);照射组DNA彗星尾长和Olive尾矩均明显大于假照射组和照射+Rg1组(P<0.001);与假照射组相比,照射组Sca-1+HSC/HPC的SOD活性明显降低(P<0.001),MDA含量明显升高(P<0.001),与照射组相比,照射+Rg1组Sca-1+HSC/HPC SOD活性明显升高(P<0.01),MDA含量明显降低(P<0.001)。结论辐射损伤可导致HSC/HPC衰老;人参皂苷Rg1具有抗辐射致HSC/HPC衰老的作用,其机制可能与抑制辐射致HSC/HPC氧化应激反应,减少氧化应激介导的DNA损伤密切相关。本实验为人参皂苷抗辐射损伤致细胞衰老提供了实验依据。     

犬胎脑注射液的药理学实验

用耐缺氧实验、全脑缺血实验、小鼠水迷宫实验和小鼠脑组织的MDA含量及SOD活性的测定 ,观察了自制犬胎脑注射液对脑功能的影响。结果表明 ,犬胎脑注射液能显著地对抗氰化钾所引起的组织缺氧 (P <0 0 1) ,明显延长断头后小鼠呼吸维持时间 (P <0 0 0 1) ,明显改善酒精引起小鼠记忆再现障碍 (P <0 0 0 5 ) ,明显降低小鼠脑组织MDA含量 (P <0 0 0 1)和提高SOD活性 (P <0 0 0 1)。     

珍珠粉对小鼠酒精肝的保护作用的实验研究

目的观察珍珠粉对小鼠酒精肝的保护作用。方法采用食用酒精诱导小鼠肝损伤,比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度,计算肝脏指数。结果珍珠粉高剂量可使小鼠酒精肝损伤血清ALT、AST升高的水平降低,降低小鼠肝损伤的肝脏MDA的水平,提高SOD的活性,降低升高的肝脏指数,与模型组比较均有显著差异(P<0.01)。结论珍珠粉对小鼠酒精肝有明显的保肝作用。     

内脂素在糖尿病模型小鼠糖脂代谢中的作用

目的探讨内脂素在糖尿病模型小鼠糖脂代谢中的作用。方法通过基因工程技术构建内脂素转基因和基因敲除小鼠,同时以野生小鼠作为对照,3组小鼠均以高脂高糖饮食饲养1个月后,于空腹12 h、进食30 min及1、2和3 h用血糖检测仪检测血糖水平;小鼠禁食10 h用生化分析仪检测甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平;Western blot法检测小鼠体内内脂素表达水平;相应试剂盒检测小鼠体内胰岛素受体及胰岛素水平。结果除空腹12 h组外,进食30 min及1、2和3 h转基因组小鼠血糖水平明显低于基因敲除组和野生组(P 0. 05),野生组小鼠血糖水平显著低于基因敲除组(P 0. 01);转基因组小鼠甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平显著低于基因敲除组(P 0. 05);基因敲除组小鼠内脂素表达水平明显低于转基因组和野生组(P 0. 001),转基因组小鼠明显高于野生组(P 0. 001);转基因小鼠胰岛素受体水平显著高于基因敲除小鼠和野生型小鼠(P 0. 01),野生型组明显高于基因敲除组(P 0. 05),3组间胰岛素水平差异无统计学意义(P 0. 05)。结论内脂素通过与胰岛素非竞争性结合胰岛素受体而发挥降低糖尿病小鼠血糖作用,且在脂代谢中具有促进脂肪积累的功能。     

姜黄素对睡眠剥夺小鼠学习记忆力的影响

目的探讨姜黄素(Curcumin)对睡眠剥夺(sleep deprived,SD)小鼠学习记忆力的影响。方法将50只C57雄性小鼠随机分为正常睡眠组、睡眠剥夺模型组和姜黄素低、中、高剂量组。采用改良多平台水环境法进行睡眠剥夺,姜黄素低、中、高剂量组分别于24、48及72 h经小鼠腹腔注射给药,剂量分别为5、10、20 mg/kg,正常睡眠组及睡眠剥夺模型组小鼠在相同时间给予腹腔注射等体积的生理盐水。每天给药1 h后经Morris水迷宫试验测试各组小鼠的学习记忆力;睡眠剥夺72 h后,检测小鼠海马组织中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量,Western blot法检测TNF-α的表达水平。结果与睡眠剥夺模型组比较,姜黄素各剂量组小鼠在Morris水迷宫定位航行试验中逃避潜伏期和游泳路程均明显缩短(P0.05),空间探索试验中穿越平台次数明显增多(P0.05);小鼠海马组织中SOD、GSH-Px含量明显增加(P0.05),MDA、TNF-α含量明显降低(P0.05);Western blot法结果表明,TNF-α的表达量明显下降(P0.05)。结论姜黄素可改善睡眠剥夺小鼠学习记忆力,其机制可能是减少自由基堆积,增强抗氧化能力,减少炎症因子TNF-α的产生。     

辐射后A549细胞上清外泌体TMEM88蛋白表达与细胞周期的相关性

目的探讨辐射对肺腺癌A549细胞细胞周期的影响,观察其细胞上清外泌体TMEM88蛋白(transmembrane protein 88)的表达情况。方法取对数生长期肺腺癌A549细胞,按0、0.5、1、1.5、2 Gy剂量(剂量率1.75 Gy/min,300 Mu/min)照射细胞,培养6和12 h后,流式细胞术检测不同辐射剂量对细胞周期的影响;收集细胞上清,超速离心提取外泌体蛋白,Western blot法分析外泌体TMEM88蛋白的表达情况。结果 G2期细胞6 h检测结果显示,与0 Gy组相比,各剂量组细胞比例显著增加(P0.001),且随照射剂量增加,细胞比例增加越明显,除0.5 Gy组与1 Gy组外,其余各组间差异均有统计学意义(P0.001);12 h检测结果显示,G2期细胞比例随照射剂量增加而显著增加,各组间差异均有统计学意义(P0.05)。S期细胞6 h检测结果显示,与0 Gy组相比,0.5、1.0、1.5 Gy组S期细胞比例显著增加(P0.05);12 h检测结果显示,与0、0.5 Gy组相比,1.0、1.5 Gy组S期细胞比例显著增加(P0.05)。随照射剂量的增加,外泌体TMEM88蛋白的表达逐渐降低,6 h检测结果显示,0 Gy组与1.5、2.0 Gy组以及0.5 Gy组与2.0 Gy组相比,差异均有统计学意义(P0.05));12 h检测结果显示,0.5、1.0、1.5、2.0 Gy组与0 Gy组相比,差异均有统计学意义(P0.001)。结论辐射能够诱导肺腺癌A549细胞细胞周期阻滞,并能抑制细胞上清外泌体TMEM88蛋白的表达。     

儿茶素没食子酸酯对糖尿病小鼠心肌氧化应激损伤的保护作用及其机制

目的探讨儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对糖尿病小鼠心肌氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法将链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病模型小鼠随机分为50、100、200 mg EGCG组和模型组,每组20只。EGCG组隔天经腹腔注射相应剂量的EGCG 1次,模型组注射100 mg/kg等量的生理盐水,共注射4周。给药4周后,检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及心肌组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达,计算心脏重量指数,观察心肌组织病理学变化。结果给药4周后,与模型组比较,各剂量EGCG组小鼠的FBG、心脏重量指数及血清MDA、ROS水平均明显降低(P0.05),血清SOD水平及心肌组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白的表达均明显升高(P0.05),且心肌组织病理形态均得到明显改善,其中100 mg EGCG组的变化幅度最大。结论 EGCG可改善糖尿病小鼠血清MDA、ROS和SOD水平,其作用机制可能与激活Nfr2通路有关。     

解偶联蛋白-2在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗中的作用及其与核转录因子-κB的关系

目的探讨解偶联蛋白-2(Uncoupling protein-2,UCP-2)在软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗(Insulin-resistance,IR)中的作用及其与核转录因子-κB(Nuclearfactor-κB,NF-κB)的关系。方法将HepG2细胞分为正常对照组、软脂酸组(加0.25mmol/L软脂酸)、高胰岛素组(加100nmol/L胰岛素)、软脂酸+京尼平组(加0.25mmol/L软脂酸和10μmol/L京尼平),培养24h后,再用100nmol/L胰岛素刺激,分别于12h后测定培养液中葡萄糖、MDA、SOD、ALT、AST、GGT、TG的浓度;油红O染色法观察细胞的脂变情况;流式细胞术检测线粒体膜电位改变;30min后采用半定量RT-PCR及Westernblot法检测细胞IRS-2、UCP-2及NF-κB的表达水平。结果胰岛素作用12h后,细胞培养液中葡萄糖含量软脂酸组与高胰岛素组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。培养液中葡萄糖含量、ALT、AST、MDA、GGT、TG的含量及UCP-2和NF-κB的表达水平,软脂酸组均较正常对照组和软脂酸+京尼平组显著升高(P<0.05),软脂酸+京尼平组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。线粒体膜电位、SOD和IRS-2的水平,软脂酸组显著低于正常对照组和软脂酸+京尼平组(P<0.05),软脂酸+京尼平组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 UCP-2在软脂酸诱导的肝脏胰岛素抵抗中起着重要作用,其机制可能与NF-κB有关。     

Protective Effect of Anthocyanin from Lonicera Caerulea var. Edulis on Radiation-Induced Damage in Mice

The radioprotective effect of anthocyanin extracted from Lonicera caerulea var. edulis (ALC), was studied in ICR mice. Different doses of ALC were intragastrically administered to mice once a day, prior to radiation. After two weeks, the mice received a one-time 5 Gy whole body ⁶⁰Coγ radiation. The spleen index, thymus index, activities of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px), malondialdehyde (MDA) content, and glutathione (GSH) content in liver tissue were measured. Compared with the radiation control group, the levels of MDA in all ALC treated groups decreased significantly (p < 0.05). Moreover, the GSH content, activities of SOD and GSH-Px in liver tissue were enhanced significantly (p < 0.05) in all ALC groups. These results demonstrate that ALC may be a potential radioprotector, and a further study of the molecular mechanism is needed for further application.     

帕罗西汀对慢性不可预见温和刺激的抑郁症大鼠抑郁行为的影响及其机制

目的探讨帕罗西汀对慢性不可预见温和刺激(Chronic unpredicted mild stress,CUMS)的抑郁症大鼠抑郁行为的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组(NG)、模型组(MG)、帕罗西汀模型组(PMG)及帕罗西汀对照组(PNG),MG组和PMG组采用孤养结合CUMS方式复制大鼠抑郁模型,每天PMG组和PNG组灌胃盐酸帕罗西汀1.8 mg/kg,NG组和MG组灌胃等体积的5%CMC-Na溶液。通过高架十字迷宫试验和糖水偏好试验评价大鼠的抑郁行为;采用常规生物化学方法测定大鼠大脑皮层丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性;RT-PCR检测海马5-羟色胺转运体(5-Hydroxy-tryptamine transporter,5-HTT)和去甲肾上腺素转运体(Noradrenaline transporter,NET)基因mRNA的转录水平。结果与NG组相比,MG组大鼠进入开放臂的次数和停留时间显著减少(P<0.01或P<0.001),而在封闭臂停留的时间明显延长(P<0.01);糖水偏好百分率显著下降(P<0.001);大脑皮层MDA含量显著升高(P<0.01),SOD和CAT活性显著降低(P<0.05);海马5-HTT和脑桥NET基因mRNA的转录水平均显著降低(P<0.001)。帕罗西汀能明显抑制CUMS诱导的上述改变(P<0.05),而对正常大鼠无显著影响(P<0.05)。结论帕罗西汀能明显改善CUMS所致的大鼠抑郁行为,其机制与增强机体抗氧化应激能力、上调海马5-HTT和脑桥NET基因mRNA的转录水平有关。     

STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用

目的探讨可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用及蜂胶的适宜剂量。方法将60只BALB/c小鼠随机分为5组,每组12只,分别用20μgSTAg、20μgSTAg+5μg蜂胶、20μgSTAg+10μg蜂胶、20μgSTAg+20μg蜂胶及20μgSTAg+40μg蜂胶鼻内免疫小鼠2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击,4×104个/只,观察小鼠存活情况。攻击后第30天处死全部小鼠,分离计数小鼠脑、肝组织内速殖子和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)、脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平。结果随着蜂胶剂量的增加,小鼠脑、肝速殖子数呈下降趋势,20μgSTAg+40μg蜂胶组显著低于20μgSTAg组,脑、肝组织减虫率分别为46.10%和60.11%;MLNL和脾T淋巴细胞增殖活性提高,其中20μgSTAg+40μg蜂胶组小鼠MLNL和脾T淋巴细胞数分别为(2.09±0.24)×107和(1.89±0.21)×107,均显著高于20μgSTAg组;肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平呈增高趋势,但各组间差异无统计学意义。结论STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠可有效诱导抗弓形虫感染的保护作用,适宜的蜂胶剂量为40μg。     

神经肽P物质对高氧损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞氧化/抗氧化状态的影响

目的探讨神经肽P物质(Substance P,SP)对高氧损伤早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial celltypeⅡ,AECⅡ)氧化/抗氧化状态的影响。方法将分离培养的原代早产大鼠AECⅡ随机分为4组:空气组(将细胞置5%CO2、21%O2的孵箱中)、高氧组(将细胞置5%CO2、95%O2的密闭氧仓中)、高氧SP组(细胞培养液中预先加入5×10-8mol/L的SP,再置高氧中)和高氧SP受体拮抗剂组(细胞培养液中预先加入5×10-8mol/L的SP和5×10-7mol/L的L703.606,再置高氧中),各组细胞培养24 h后,镜下观察细胞形态的变化;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期;JC-1探针法检测细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化;化学比色法检测细胞丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、总抗氧化能力(Total antioxidative capacity,TAOC)及超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase,SOD)的活力。结果与空气组比较,高氧组AECⅡ的增殖活力、S+G2期细胞比例、线粒体膜电位、SOD活力和TAOC均明显下降(P<0.01),MDA含量明显升高(P<0.01);与高氧组比较,高氧SP组AECⅡ的增殖活力、S+G2期细胞比例、线粒体膜电位、SOD活力和TAOC均明显升高(P<0.01),而MDA含量明显下降(P<0.01),SP受体拮抗剂可阻断该效应。结论 SP可明显减轻高氧导致的早产大鼠AECⅡ的氧化损伤,增强细胞的抗氧化能力,进而起到促进细胞增殖的作用。     

HIV-1 DNA疫苗的免疫效价及其与免疫剂量的相关性

目的研究HIV-1 DNA疫苗的免疫效价及不同剂量HIV-1 DNA疫苗对小鼠诱导免疫反应的影响。方法将80只BALB/c小鼠随机分为8组,每组10只,分别为对照组(pDRVI1.0空载体,100μg)、DNA疫苗pENV 3.125、6.25、12.5、25、50、100和200μg组,经小鼠胫骨前肌注射,100μl/只,每隔2周免疫1次,共3次。采用ELISA法检测小鼠血清抗体反应,并计算抗体阳转率;ELISPOT法检测小鼠T细胞免疫反应,并计算阳转率。结果高剂量组抗体反应仅25μg与100μg组之间差异有统计学意义(P<0.05),其他高剂量组间及低剂量各组间差异均无统计学意义(P>0.05),而各疫苗组抗体阳转率总体之间差异有统计学意义(P<0.01)。高剂量组细胞免疫反应强度之间差异无统计学意义(P>0.05),且比低剂量组更趋稳定。DNA疫苗诱导的抗体和细胞免疫反应均随免疫剂量的增加而增加,且呈正相关。当疫苗剂量达到100μg时,均达最高反应强度。结论 HIV-1 DNA疫苗25μg免疫剂量对BALB/c小鼠可能是适当的免疫剂量。在选择临床或临床前试验免疫剂量时,使用统计学无差异的低剂量可能免疫效果更好。     

硫酸锌对紫外线造成的角朊细胞氧化损伤及胞内抗氧化酶活性的影响

目的探讨硫酸锌对B段紫外线(Ultraviolet radiation B,UVB)造成的角朊细胞(Keratinocytes,KC)氧化损伤及胞内抗氧化酶活性的影响。方法取新生Wistar大鼠背部皮肤,采用中性蛋白酶和胰蛋白酶联合消化,经贴壁培养获得高纯度角朊细胞,在含10%FBS的L-DMEM+F12培养液中扩增培养。将细胞随机分为UVB组、加锌组和正常对照组,UVB组用15W的UVB进行照射,加锌组与50μmol/L硫酸锌共孵育24h后进行照射,正常对照组不照射。照射后24h收集各组细胞,进行氧化损伤指标(MDA、OH-、O2-)及胞内抗氧化酶(SOD和GSH)活性测定。结果 UVB组细胞MDA、OH-和O2-水平显著高于正常对照组(P<0.05),加锌组显著低于UVB组(P<0.05);UVB组细胞SOD和GSH水平显著低于正常对照组(P<0.05),加锌组显著高于UVB组(P<0.05)。结论硫酸锌可拮抗UVB对角朊细胞造成的氧化损伤,并提高胞内抗氧化物酶的水平。     

可溶性白细胞介素-5与白细胞介素-13受体联合应用对哮喘小鼠气道高反应性及气道炎症的影响

目的观察可溶性白细胞介素-5受体α(Soluble interleukin 5 receptorα,sIL-5Rα)与可溶性白细胞介素-13受体α2(sIL-13Rα2)联合应用对哮喘小鼠气道高反应性(Airway hyperresponsiveness,AHR)及气道炎症的影响。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα组、sIL-13Rα2组和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组,除正常对照组外,其余各组以鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏和激发,建立哮喘模型,sIL-5Rα、sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组每次激发前30 min分别经腹腔注射sIL-5Rα100μg、sIL-13Rα2 100μg和sIL-5Rα100μg+sIL-13Rα2 100μg,正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代。末次激发24 h后,检测各组小鼠经不同浓度氯化乙酰胆碱激发后的肺阻力,对支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavagefluid,BALF)进行细胞计数,HE染色观察肺组织的病理变化,ELISA法检测BALF中IL-5和IL-13水平。结果与正常对照组相比,经氯化乙酰胆碱激发后,哮喘组肺阻力显著增加(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-13Rα2和sIL-5Rα+sIL-13Rα2组肺阻力显著降低(P均<0.01),sIL-5Rα+sIL-13Rα2组降低更明显(P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘组BALF中白细胞总数和嗜酸性粒细胞(Eosinophil,EOS)数均显著增加(P均<0.01),肺组织损害明显;与哮喘组相比,3个治疗组BALF中白细胞总数和EOS数均显著降低(P均<0.01);与sIL-5Rα和sIL-13Rα2组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组BALF中白细胞总数和EOS数进一步降低(P均<0.01);3个治疗组炎症细胞浸润明显减轻,炎症反应轻微,其中sIL-5Rα+sIL-13Rα2组病理变化进一步减轻。与正常对照组比较,哮喘组小鼠BALF中IL-5和IL-13水平显著升高(P<0.01);与哮喘组相比,sIL-5Rα+sIL-13Rα2组小鼠IL-5和IL-13水平均显著降低(P<0.01)。结论 sIL-5Rα与sIL-13Rα2联合应用可明显降低哮喘小鼠AHR,减轻气道炎症。     

山奈酚对小鼠迟发型超敏反应的免疫抑制作用

目的探讨山奈酚(kaempferol,KA)对二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)的免疫抑制作用。方法将BALB/c小鼠按体重随机分为6组:生理盐水对照组、DTH模型组、环磷酰胺(cytoxan,CTX)组(20 mg/kg)、KA低剂量(2 mg/kg)、中剂量(4 mg/kg)、高剂量(8 mg/kg)组,每组10只,用DNFB致敏,同时给药,连续给药7 d。致敏后第5天于小鼠右耳背涂1%DNFB 5μl诱发DTH,左耳涂等量的丙酮/橄榄油溶剂作为对照。连续给药7 d后,称量小鼠体重及脾脏和胸腺湿重,计算脾脏指数和胸腺指数;DNFB激发后48 h,剪下小鼠左右耳廓,称重,计算小鼠耳廓肿胀度,并将剪取的右耳耳廓制成冰冻切片,光学显微镜下观察小鼠耳廓局部组织的病理变化;无菌取脾,制备脾细胞,MTT法检测经ConA刺激的脾淋巴细胞的增殖活力。结果 KA高剂量组能显著降低DTH小鼠的脾脏指数和胸腺指数(P<0.01或P<0.05);KA中、高剂量组能明显抑制DNFB所诱发的小鼠耳廓肿胀度(P<0.05或P<0.01);KA能明显减少DTH小鼠耳廓局部组织淋巴细胞的浸润,并抑制脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.05或P<0.01)。结论 KA对DTH小鼠具有明显的免疫抑制作用,抑制淋巴细胞的增殖可能是其作用机制之一。