产气肠杆菌磷酸酶基因克隆表达及其特性

产气肠杆菌(E.aerogenes IAM1183)的酸性磷酸酶,具有特异转移磷酸基团到核苷5′-位的功能,是极具应用价值的酶。本研究以产气肠杆菌(E.aerogenes IAM1183)的酸性磷酸酶(PhoC)为研究对象,采用基因工程手段,克隆了phoC基因,构建成酸性磷酸酶(PhoC)与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合表达载体pMKL-c2x-phoC,把其转化到不同的宿主,进行催化研究。结果发现构建成的基因工程菌具有高于原始菌催化5′-IMP生成的能力、水解5′-IMP的活性降低、酶促反应的最适pH值近中性等特点。     

固定化β-葡萄糖苷酶转化糖苷型异黄酮的研究

利用固定化β-葡萄糖苷酶把糖苷型异黄酮水解成苷元型异黄酮,可以提高大豆异黄酮的生理活性.用海藻酸钙包埋富含β-葡萄糖苷酶的黑曲霉孢子,可以方便有效地固定β-葡萄糖苷酶.研究考察了不同底物浓度,pH和温度对固定化β-葡萄糖苷酶酶解作用的影响,以及重复分批酶解条件下固定化酶的稳定性.当固定化酶珠体积占反应总体积的5%,糖苷型异黄酮浓度为1.2mg·mL-1,作用24 h,酶解效果良好.其中,大豆苷比染料木苷易于被酶解.固定化酶适宜的pH范围为3～5,最适pH值为4.8.耐热性比固定化前有所增加,在70℃以下酶较稳定.重复分批酶解糖苷型异黄酮,连续7批的转化率均可保持在90%以上.该研究结果在大豆异黄酮的生物转化方面具有潜在的应用前景.     

固定化漆酶对二氯酚的脱氯作用

采用活性炭吸附与海藻酸钙凝胶包埋相结合的方法使Coriolus versicolor漆酶固定化.利用固定化漆酶对2,4-二氯酚进行脱氯反应,其最适pH值为4.5、最适温度为40℃.与游离酶相比,固定化酶反应的pH值和温度范围更宽,其稳定性得到了明显改善.使用柱式固定化酶反应器处理2,4-二氯酚,在批式反应工艺条件下,当底物浓度为1 mmol•L^-1、反应3～5 h, 2,4-二氯酚的去除率可达99.5%以上（脱除的氯离子浓度达0.5 mmol•L^-1）.连续8批反应的结果表明：固定化漆酶性能稳定、催化效率高,在环境污染废水治理方面具有良好的应用前景.     

陶瓷-壳聚糖复合材料固定真菌漆酶酶学性质研究

以陶瓷为第一载体、壳聚糖为二次载体、戊二醛为交联剂,采用共价结合和吸附联用法制备固定化漆酶,并研究了固定化漆酶的性质.固定化酶最适pH为3.0,最适温度分别为25℃和50℃,均与游离酶相同.在pH 3.0,温度25℃时,固定化酶对ABTS的表观米氏常数为66.64 μmol/L.与游离酶相比,固定化酶的热稳定性明显提高,并具有良好的贮存和操作稳定性.     

溶胶-凝胶法固定化Candida sp.99-125脂肪酶

利用正硅酸甲酯(TMOS)和丙基三甲氧基硅烷(PTMS)为复合硅源,以PEG(MW=20000)为稳定剂,以HCl为催化剂,经过溶胶-凝胶过程包埋假丝酵母99-125脂肪酶. 研究得到最适的固定化条件为：PTMS与TMOS的摩尔比4: 1, R值(水与硅源的摩尔比)20, 给酶量(酶占硅源的质量百分数)3.71%, PEG与酶的质量比(1~1.5):1, 硅源水解时间35 min. 在该条件下,固定化脂肪酶的最高酯化活力是游离酶最高酯化活力的2.02倍. 固定化脂肪酶在100℃保温2 h后酶活仍维持为59.1%,固定化酶催化特定酯化反应,经过8批连续反应96 h后酶活维持不变.     

固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸

部分纯化的变异三角酵母D-氨基酸氧化酶(DAO)在碱性条件下变性过氧化氢酶,再与大孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯高聚物共价交联。与游离酶相比,固定化酶的最适反应温度升高,最适pH范围变宽,对温度和pH的稳定性都有明显的提高。固定化DAO在搅拌反应器中催化头孢霉素C(CPC)转化为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸(Gl-7-ACA)。以0.03g/mL的CPC为底物,在温度25℃、pH7.2条件下,产物的得率>93%,副产物得率<5%。经过110批反应后,固定化酶保持64%的初始活力。     

用氨基化硅胶和甲醛固定脂肪酶的研究

以甲醛为偶联剂,将脂肪酶固定在3-氨基丙基硅胶上。以差热分析法测试了自然酶和固定化酶的热稳定性,并研究了反应介质的温度和pH值对自然酶和固定化酶活性的影响。自然酶和固定化酶的最适pH值都在7.5附近,但固定化酶的最适温度较自然酶低。另外,还测试了固定化酶在37℃的磷酸盐缓冲溶液中贮存的稳定性,与自然酶相比其贮存的稳定性有显著的提高,同时发现固定化酶在37℃的磷酸盐缓冲溶液中有一个恢复活力的过程。     

修饰固定化青霉素酰化酶在非水相中的催化

为提高酶的催化水解活力和稳定性,将青霉素酰化酶组装于介孔泡沫二氧化硅(MCFs)中,并应用于水/有机混合体系催化水解。分别考察了有机介质种类和体积分数、葡聚糖(Dex10k)修饰对固定化酶活力的影响,研究了不同条件下固定化酶的稳定性。实验结果显示:体积分数20%石油醚中,添加Dex10k的介孔泡沫硅固定化酶比活力达209.5U/mg,是缓冲液中MCFs固定化酶活力的196.2%。20%石油醚中,经25次连续操作,固定化酶保持初始活力的71.5%。结果表明:石油醚等烷烃形成的水/有机体系是适合青霉素酰化酶催化的二相体系,且添加Dex10k能提高固定化酶在二相体系中的催化活力及稳定性。     

5,5′-偶氮二水杨酸及其钠盐的合成

以水杨酸甲酯为原料 ,合成了 5 ,5′-偶氮二水杨酸及 5 ,5′-偶氮二水杨酸钠。该合成方法的特点是原料易得 ,操作简单、安全 ,产品的纯度较高。     

海藻酸钙凝胶固定葡萄糖氧化酶的研究

利用海藻酸钙凝胶颗粒固定葡萄糖氧化酶(GOD).确定了固定化条件,并考察了温度、pH值、储存时间对固定化酶和游离酶酶活力的影响,测定了酶活回收率.确定的固定化较优条件为:CaCl2 5.0%(质量体积比),海藻酸钠3.0%(质量体积比);固定化酶的最适催化温度为31℃、最适pH值为6.3,较游离酶分别提高7℃和0.6;固定化酶的平均酶活回收率为61.69%.此外,酶的储存稳定性能也有所提高,可重复多次使用.     

固定化细胞延胡索酸酶性质的研究

探讨了海灌酸钠固定化普通变形杆菌延胡索酸酶的性质。研究结果表明：酶催化延胡索酸为Ｌ－苹果酸的最适温度为４０℃，最适ｐＨ为７．０。在温度低于４０℃和ｐＨ５。０～８．０的条件下，固定化细胞酶活力稳定性好，显示其热稳定性和ｐＨ稳定性明显优于游离细胞。Ｃｙｓ对固定化细胞酶活力无影响，ＧＳＨ对前激活作用。     

溶胶-凝胶法固定化α-淀粉酶的研究

采用溶胶-凝胶过程,以正硅酸乙酯为前驱物,对α-淀粉酶进行了固定化。考察了两种水解催化剂盐酸、醋酸对固定化酶活性的影响,并对固定化酶的耐热性、重复使用次数等进行了测试。     

反-4-(5′-丙基-四氢吡喃-2′-基)-环己基甲酸的合成

摘要：以反-4-(5′-丙基-四氢吡喃-2′-基)-苯甲酸(3PyPA)为原料经催化加氢合成顺/反-4-(5′-丙基-四氢吡喃-2′-基)-环己基甲酸(3PyHA)混合物。加氢条件实验表明：以Ru/C为催化剂,以氢氧化钠水溶液作反应介质,当反应温度为75～85 ℃,压力为3.5 MPa时反应效果最佳。 加氢完粗品经高温异构化反应,甲苯乙醇混合溶剂重结晶得纯度99.5%以上的反-3PyHA。     

AS 1.398中性蛋白酶制备水解明较(Ⅳ)——固定化酶制备水解明胶的应用研究

本文研究了反应时间、温度、pH和酶量对固定化AS 1 398中性蛋白酶催化明胶水解反应过程的影响 ,讨论了固定化AS 1 398中性蛋白酶促明胶水解制备水解明胶的可能性     

微胶囊固定酶催化合成烷基糖苷的工艺优化

用微球截留固定化和酶催化有机合成技术对β-葡萄糖苷酶固定化及其催化合成烷基糖苷的工艺进行了研究.优化出酶同定化最优上艺为:壁材海藻酸钠4.0%、交联剂戊二醛0.2%、凝聚剂CaCl20.10 mol/L、酶用量140加mg.以固定酶为催化剂、葡萄糖和正丁醇为原料合成烷基糖苷,确定合成的最佳工艺为:正丁醇20 mL、糖醇比2.0:20(g/mL)、固定酶6 g、反应温度40℃,反应时间3 h.得到的固定酶活力比游离酶高,稳定性好,重复使用3次后仍有较好活性.     

Cu(Ⅱ)螯合壳聚糖磁性微球固定化胃蛋白酶的制备及性能研究

将Cu(Ⅱ)螯合壳聚糖磁性微球用作固定化胃蛋白酶的载体,讨论了固定化时间、pH值和给酶量对酶固定化的影响.确定最适固定化条件为:固定化时间1.0 h、pH值4～5、给酶量150 mg·(g载体)-1.与自由酶比较,固定化胃蛋白酶的催化特性和稳定性均令人满意.     

醇脱氢酶在聚乙烯膜表面的固定化研究

以聚丙烯酸（PAA）改性的聚乙烯（PE）膜为载体,研究了醇脱氢酶（ADH）的两种固定化路线,并以甲醛为底物考察了固定化酶的催化性能。路线1用聚乙烯亚胺（PEI）进一步改性,使用戊二醛（GA）固定化ADH。最优固定化pH为6.0,温度为5～15℃,酶浓度为1.0 mg/ml,GA浓度为0.01%(质量);固定化酶的最适反应pH为6.5,温度为15～30℃,反应速率最高为9.6 μmol/(L·min);重复利用10次后可保持47.3%的活性。路线2以PAA-PE为载体,用1-(3-二甲氨基丙基)-2-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）为活化剂,固定化ADH。EDC和NHS最优摩尔比为1∶0.5,固定化时间为24 h;固定化酶的最适反应pH为6.5,温度为20～37℃,反应速率为15.58 μmol/(L·min);重复利用10次后可保持53.8%的活性。     

分子筛固定氨基酰化酶Ⅰ的研究

以Y型分子筛为载体,分别采用吸附法、吸附-戊二醛交联法、偶联法和偶联-重氮法4种方法对氨基酰化酶I进行固定化。 研究发现偶联法获得的分子筛固定化酶的活性最高,达0.258 IUmg-1,并对分子筛固定化酶最适pH值、最适反应温度、重复使用性和米氏常数进行了测定;结果表明该载体适合氨基酰化酶I的固定,可以获得较高的酶活力,分子筛固定化酶的最适pH值、最适反应温度都有所拓宽。     

柠檬黄合成新工艺

以苯肼-4-磺酸和顺丁烯二酸二甲酯为原料,经缩合、水解和空气氧化得到中间体1-(4′-磺酸基苯基)-3-羧基-5-吡唑啉酮,然后与对氨基苯磺酸的重氮盐偶合而得柠檬黄.对合成的1-(4 ′-磺酸基苯基)-3-羧基-5-吡唑啉酮结构进行了表征,对反应机理进行了讨论.产品柠檬黄经检测符合GB 4481.1-2010要求.     

多孔玻璃珠固定化脂肪酶及其催化合成生物柴油

以多孔玻璃珠为载体,采用共价法对假丝酵母99-125脂肪酶进行了固定,对比了固定化酶与游离酶的最适反应温度、pH值以及热稳定性.并以所制备的固定化酶为催化剂,在微水体系中利用菜籽油合成生物柴油,考察了溶剂量、体系水含量、甲醇等因素对固定化酶催化性能的影响,研究了固定化酶的操作稳定性.