沙棘粕提取物对H2O2诱导的B16F10细胞氧化损伤的保护及修复

研究了沙棘粕提取物(SBSE)对B16F10细胞氧化应激损伤的保护及修复作用。首先建立了过氧化氢(H_2O_2)诱导的B16F10细胞氧化损伤模型,完成了流式细胞术对损伤模型的评价;其次,研究了SBSE预处理对细胞防御H_2O_2诱导的氧化损伤细胞活力的影响,以及对损伤模型的修复作用;再次,比较了各SBSE处理组与模型组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)水平。结果:H_2O_2的诱导条件为300μg/mL处理4 h,流式细胞术检测发现,H_2O_2处理4 h后活细胞百分比由(91.61±1.14)%降至(49.77±2.74)%(P0.01),早期凋亡细胞由(1.97±0.34)%升至(17.91±3.55)%(P0.01),晚期凋亡率升至(21.24±2.61)%,并且H_2O_2处理6 h的晚期凋亡细胞显著上升,晚期凋亡率在60%以上。利用H_2O_2刺激SBSE预处理后的B16F10细胞,结果发现0.10 mg/mL SBSE处理后的细胞活力显著高于模型组(P0.05),抗氧化酶活力显著提升,细胞内MDA的积累显著降低;不同浓度SBSE处理损伤模型,0.10mg/mL SBSE具有一定的修复作用(P0.05),其GSH-Px、CAT和SOD活力显著高于模型组(P0.05,P0.01,P0.01),MDA水平显著降低(P0.05)。由此可见,SBSE通过提高细胞GSH-Px、CAT和SOD的活性,降低过氧化产物MDA的含量来保护和修复H_2O_2诱导的B16F10细胞氧化损伤。     

诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

本文采用柱色谱技术对诸葛菜种子的提取物进行分离纯化,采用波谱技术结合化学方法进行结构鉴定,首次获得新化合物,命名为诸葛菜碱Ⅰ,并通过建立H_2O_2诱导的细胞损伤模型,对诸葛菜碱Ⅰ保护H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤的作用及其机制进行了研究。于H_2O_2刺激前,加入不同浓度的诸葛菜碱Ⅰ预处理Hep G2细胞12 h,然后以400μmol/L H_2O_2损伤细胞2 h建立模型。MTT法检测细胞存活率,微板法检测细胞培养液中LDH活性和细胞MDA含量及SOD、GSH-PX的活性,Western Blot检测细胞内Nrf 2、HO-1蛋白表达,以评价诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,与模型组相比,诸葛菜碱I给药组(53.5、107、214μmol/L)预处理12 h后,增加了细胞存活率(p0.01),显著降低LDH向细胞外液的释放(p0.01),显著降低细胞内MDA含量(p0.05,p0.01),显著提高细胞内SOD、GSH-PX的活性(p0.05,p0.01),增高了Nrf2蛋白水平。因此,诸葛菜碱Ⅰ对H_2O_2所致Hep G2细胞氧化损伤具有保护作用。     

过氧化氢诱导H epG 2细胞氧化应激模型的建立

建立过氧化氢(H_2O_2)介导的HepG2细胞氧化应激模型,为筛选抗氧化活性物质以及揭示抗氧化应激机制提供细胞学模型。采用不同浓度H_2O_2处理Hep G2细胞不同时间,噻唑蓝(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞存活率,二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平,分光光度法检测丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量,以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catlase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果表明,随着H_2O_2浓度升高和作用时间延长,Hep G2细胞存活率降低,ROS水平和MDA含量升高,SOD、CAT和GSH-Px活性降低。与对照组相比,200μmol/L H_2O_22处理Hep G2细胞6 h,细胞存活率显著降低(P0.05),仅为63.1%;ROS水平和MDA含量显著升高(P0.05),分别为127.1%和135.1%;SOD、CAT和GSH-Px活性显著降低(P0.05),分别为77.28%、78.56%和77.41%。H_2O_2诱导HepG2细胞建立氧化应激模型的最佳条件为H_2O_2作用浓度200μmol/L,作用时间6 h。     

人参皂苷F2干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡

本研究探讨了人参皂苷F2对H_2O_2诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。利用试剂盒测定凋亡细胞Caspase-6和Caspase-9活性水平,应用WesternBlot检测凋亡细胞中Bcl-2凋亡家族(Bcl-2和Bax)与Caspase凋亡家族(CleavedCaspase-3和Cleaved PARP)的蛋白表达量。H_2O_2损伤细胞后,Caspase酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L F2预处理损伤细胞后,Caspase-6和Caspase-9活力呈浓度依赖性降低(p0.05),当F2浓度达到20μmol/L时,Caspase-6活性降低了6.83 U/mg protein,Caspase-9活性降低了5.88U/mgprotein;CleavedCaspase-3和CleavedPARP蛋白表达量显著低于损伤组(p0.05),随着F2浓度的升高,Cleaved Caspase-3表达量分别下降至280.90%、232.46%、185.26%,Cleaved PARP表达量随着F2浓度升高而降低至110.36%、85.85%、61.95%;F2高浓度组的Bcl-2/Bax比值(73.94%)较损伤组比显著提升(p0.05)。表明人参皂苷F2可以抑制凋亡蛋白Caspase的活性,降低Bax促凋亡蛋白与Caspase家族上、中、下游蛋白的表达,通过调控Caspase级联反应抑制H_2O_2刺激引起的细胞凋亡。     

西番莲果皮花色苷对H2O2诱导L02细胞氧化损伤的抑制作用

目的 探究西番莲果皮花色苷(peel of passion fruits anthocyanins, PPFA)对H2O2诱导人正常肝细胞L02氧化损伤的抑制作用。方法 采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法建立H2O2诱导L02细胞氧化损伤的模型, 通过测定细胞丙二醛(malondialdehyde, MDA)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)指标, 观察PPFA对细胞氧化损伤的抑制作用, 结合非靶向代谢组学显著差异代谢物分析, 探讨其抗氧化机制。结果 PPFA体外清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)值为34.62 μg/mL, 有一定的羟自由基、超氧阴离子自由基清除能力。细胞实验表明, PPFA能够显著提高H2O2损伤的L02细胞总抗氧化力(P<0.05), 并显著降低损伤细胞中MDA生成量和LDH的释放量(P<0.05); 与损伤组相比, PPFA各剂量组SOD活性均显著升高(P<0.05), 中剂量组CAT与低剂量组GSH-Px的活性显著升高且达空白组水平(P<0.05)。代谢组学分析表明, 与损伤组相比, PPFA处理后细胞存在23种显著差异代谢物, 涉及到谷胱甘肽代谢、胆汁分泌、铁死亡和脂肪酸生物合成途径。结论 PPFA对H2O2诱导L02细胞的氧化损伤有抑制作用, 表现出显著的细胞抗氧化活性。     

金银花黄酮对过氧化氢诱导RAW264.7巨噬细胞损伤的保护作用

探讨金银花黄酮对RAW264.7巨噬细胞抗氧化活性的影响。通过过氧化氢诱导RAW264.7细胞损伤,建立细胞氧化损伤模型,研究金银花黄酮低、中、高剂量组(62.5,125,250 mg/mL)对损伤细胞的保护作用。研究结果表明:质量浓度62.5～250 mg/mL范围的金银花黄酮可显著促进RAW264.7细胞的增殖(P0.05)。金银花黄酮各剂量组显著提高了细胞及细胞培养液中总抗氧化能力(P0.05),显著提高了SOD、GSH-Px、CAT活性及GSH含量(P0.05);显著降低了细胞及细胞培养液中MDA含量(P0.05);显著降低了细胞中LDH活性并提高了细胞培养液中LDH活性(P0.05)。金银花黄酮促进RAW264.7细胞的增殖,并且对过氧化氢诱导的RAW264.7细胞损伤有良好的保护作用,存在剂量依赖效应。本研究为金银花功能性食品及保健品的开发提供理论依据。     

蓝莓花色苷对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用

为探究蓝莓花色苷（BA）对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其机制,通过MTT法测定A549细胞存活率,采用ELISA法检测细胞内丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,通过RT-PCR技术测定细胞内抗氧化酶和凋亡相关蛋白的mRNA表达量,用免疫印迹法（Western blot）测定凋亡相关蛋白表达量。结果表明：选择H2O2浓度400 μmol/L、处理时间24 h来构建细胞氧化损伤模型。BA质量浓度为30,60,90 mg/mL对A549细胞无毒性作用;BA能显著抑制H2O2造成的A549细胞存活率降低（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡率、MDA和胞内ROS水平（P<0.05）,显著增加GSH-Px、SOD和CAT活性及其相对mRNA表达量（P<0.05）,并显著上调Bcl-2/Bax的比值和下调Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3相对mRNA和蛋白表达量（P<0.05）。BA对H2O2诱导A549细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡通路相关蛋白的表达,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS,降低细胞凋亡率有关。     

蛋清源抗氧化肽对HEK293细胞氧化应激损伤的抑制作用及机制

食源性抗氧化肽以其安全性高,抗氧化能力好,逐渐成为多肽研究领域的热点。本文以蛋清卵黏蛋白胃蛋白酶水解产物为原料,以蛋清源五肽作为研究对象,首先,采用基于不同机理的体外抗氧化活性化学测定方法,对8条蛋清源五肽的抗氧化活性进行评价。DPPH自由基清除活性最强的为五肽CFDVF,浓度为1.0 mmol/L时,其自由基清除率为50.14%±2.1%;ABTS+·自由基清除能力最强的为五肽VYQFL,浓度为100μmol/L时,TEAC值为(94.66±0.37)μmol/L TE/100μmol/L;ORAC活性最强的为五肽WNWAD,TEAC值为(2.53±0.18)μmol/L TE/μmol/L。接着,利用HEK293细胞氧化损伤模型评价8条五肽的抗氧化活性,其中五肽WNWAD(Trp-Asn-Trp-Ala-Asp)的氧化应激抑制活性最强。同时,细胞毒性试验证明,五肽本身对细胞无毒副作用,也无促进增殖作用。最后,综合体外化学和细胞试验结果,筛选出WNWAD进行蛋清肽氧化应激抑制机制研究。首先采用试剂盒方法检测细胞内LDH活性和MDA含量,以及抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,结果表明H2O2可导致细胞LDH释放率上升,MDA含量增高,而WNWAD可以抑制脂质过氧化进程,维持细胞膜完整性,提高细胞内LDH活性,降低MDA含量;H2O2可以抑制细胞内抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,而经过WNWAD预处理,可以显著增强其活性;随着肽浓度的升高,3种酶的活性均有所提高,呈浓度依赖型关系,尤其在肽的浓度为1.0μmol/L时,过氧化氢酶(CAT)活力为(20.63±0.51) U/mg蛋白、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力为(179.39±5.73)U/mg蛋白,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)为(33.97±5.02)个活力单位,较对应损伤组的酶活性均有显著性提高(P0.01);最后,利用蛋白质免疫印迹技术检测细胞内抗氧化酶相关蛋白表达水平,结果表明:WNWAD预处理可在一定程度上恢复H2O2诱导损伤的HEK293细胞中抗氧化酶CAT、SOD和GSH-PX的蛋白表达水平。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H_2O_2诱导细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人胚肾HEK-293细胞氧化损伤的保护作用。方法:通过检测细胞活力、活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)水平考察C3G对氧化损伤细胞的影响,并采用Western blot法和q RTPCR检测Nrf2和Keap1的蛋白表达量和m RNA表达量变化。结果表明:C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于H_2O_2损伤组(p 0.05),并呈浓度依赖性提高; H_2O_2损伤组的DCF荧光强于对照组,ROS相对含量增加到近2倍,1.25、5、20μmol/L C3G预处理后细胞荧光强度逐渐减弱,ROS相对量呈浓度依赖性降低; C3G预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低; 1.25、5、20μmol/L C3G处理后,Nrf2的m RNA表达和蛋白表达量均呈浓度依赖性上调,Keap1蛋白表达量显著低于H_2O_2损伤组(p 0.05),5和20μmol/L C3G对Keap1的m RNA下调作用明显。结论:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对HEK-293细胞有保护作用,可降低细胞ROS和MDA水平,其作用机制可能是通过激活Nrf2/Keap1信号通路以抵抗H_2O_2导致的细胞氧化损伤。     

草苁蓉多糖对HepG2细胞氧化应激的抑制作用

研究草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化应激的抑制作用。以HepG2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞存活率;比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)活化水平。结果表明,BRPS在质量浓度12.5 mg/L~50 mg/L范围内对HepG2细胞存活率无显著影响,对细胞安全。而H_2O_2诱导使HepG2细胞存活率和抗氧化能力下降,细胞内ERK和JNK磷酸化水平升高。与H_2O_2模型组相比,BRPS预处理可提高细胞存活率;降低培养液中LDH、AST和ALT活性;降低细胞内MDA含量,升高细胞中SOD活性和GSH含量,降低细胞内ERK和JNK磷酸化水平。提示,BRPS对H_2O_2所致HepG2细胞氧化应激具有抑制作用,减轻其细胞损伤。     

红枣色素对H_2O_2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

探讨红枣色素对H_2O_2诱导人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。体外培养HUVECs,随机分为6组:空白对照组、H_2O_2损伤组、红枣色素低、中、高剂量组(50、150、250 mg/L红枣色素)和阳性对照组(50μmol/L VE),采用显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮盐法检测细胞增殖活力,试剂盒法测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogense,LDH)活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,透射电子显微镜观察细胞超微结构。结果表明,红枣色素可保护H_2O_2对HUVECs的损伤作用,能明显改善受损细胞形态、超微结构,显著降低细胞增殖抑制率、LDH活性、细胞凋亡率,明显提高线粒体膜电位水平(P0.05),且存在明显的剂量依赖关系。由此推断,红枣色素对氧化应激诱导血管内皮细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化、抑制细胞凋亡和维持线粒体膜电位有关。     

降香内生真菌代谢产物对H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤保护作用

由降香树皮中分离筛选获得一株抗氧化活性较好的内生真菌JXP21,通过ITS-rDNA序列比对及系统发育分 析对其进行分类鉴定,初步鉴定为链格孢菌（Alternaria alternata）,ITS-rDNA序列与GenBank登录号KP979753.1 具有100%的相似性。通过高效液相色谱串联二级质谱对其代谢产物进行检测,检测到了化合物染料木素。进一步 探讨了内生真菌JXP21代谢产物对H2O2诱导的HepG2细胞氧化损伤的保护作用,以200 μmol/L H2O2制备HepG2细胞 氧化应激损伤模型,检测在不同质量浓度（0、10、20、40、80 μg/mL）内生真菌代谢产物的保护作用下,对细胞 丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物 酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力的影响。结果表明：内生真菌代谢产物作用于HepG2细胞后,能够降低 H2O2诱导损伤引起的MDA含量的升高,MDA含量由4.65 nmol/mg pro下降为3.68 nmol/mg pro;提高SOD和GSH-Px 活力,SOD活力由6.88 U/mg pro升高至8.64 U/mg pro,GSH-Px活力由8.45 U/mg pro升高至9.68 U/mg pro。表明内生 真菌代谢产物对H2O2诱导所致肝细胞氧化损伤具有一定的保护作用。     

黑灵芝多糖对丙烯酰胺诱导小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究黑灵芝多糖对丙烯酰胺（acrylamide,AA）所致的小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：构建AA诱导小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）-6氧化损伤型,采用噻唑蓝比色法检测黑灵芝多糖对IEC-6氧化损伤的保护作用;同时测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以及测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平。结果：与正常对照组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖对细胞增殖影响无显著性差异。与模型（AA）组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖溶液能够明显减轻AA对细胞的毒害作用,提高细胞生存率,降低细胞培养液中LDH的释放;降低MDA含量,提高细胞SOD和GSH-Px活性。结论：黑灵芝多糖可以通过提高细胞内抗氧化酶系的活性和抗氧化物质GSH-Px活性从而有效地减弱AA诱导的小肠上皮细胞氧化损伤。     

牦牛乳酪蛋白酶解物对H_2O_2诱导的氧化损伤HepG2细胞蛋白羰基含量及抗氧化酶活性的影响

为探究牦牛乳酪蛋白酶解物缓解氧化应激损伤的作用,利用过氧化氢(H_2O_2)建立氧化损伤细胞模型,以细胞蛋白质羰基含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性为指标评价牦牛乳酪蛋白酶解物的活性。结果表明,利用酶解物处理H_2O_2损伤的HepG2细胞,能够缓解H_2O_2诱导的蛋白质羰基含量升高,并增加细胞内SOD、CAT、GSHPx的活性,从而提高机体抗氧化能力,缓解H_2O_2引发的氧化应激状态。研究证明,牦牛乳酪蛋白酶解物具有缓解氧化应激损伤的作用,为牦牛乳资源的进一步开发利用及乳源活性肽应用于抗氧化功能食品提供了依据。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽制备及其对肝细胞损伤的保护作用

目的:研究鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺及不同浓度的鳕鱼皮胶原蛋白多肽对经LPS诱导损伤的Chang Liver细胞的修复作用。方法:以料液比、加酶量、酶解时间和酶解温度为因素,MTT试验所得细胞OD值为指标,通过正交试验探讨鳕鱼皮胶原蛋白肽的最佳酶解工艺,并经超滤、阴离子交换、分子层析对其纯化。通过试剂盒法检测该纯化肽作用Chang Liver细胞后,细胞内抗氧化酶和细胞上清液中转氨酶变化情况;采用Hoechst 33258染色法和Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术观察鳕鱼皮胶原蛋白肽作用损伤Chang Liver细胞后的细胞凋亡情况。结果:最优酶解条件:以胰蛋白酶为水解酶,酶解温度50℃,p H 6,加酶量2 000 U/g,酶解时间8 h,经纯化得到蛋白肽GM2-2-3;GM2-2-3作用经LPS诱导损伤的Chang Liver细胞后,细胞氧化损伤明显减轻,细胞内SOD、CAT、GSH-PX活性上升,MDA的含量下降,并呈剂量依赖性;细胞上清液中AST、ALT、ALP、γ-GT、LDH活性有所下降,且呈剂量依赖性;与损伤组细胞相比,Chang Liver细胞形态较舒展,细胞染色质出现明显的聚集及边集化,细胞核皱缩现象减少,早期凋亡率降低,早期凋亡细胞变少。     

仙草多糖对细胞氧化损伤的保护作用

采用碱液浸提法从仙草中提取粗多糖JMBP-C,通过超滤、离子交换和凝胶柱层析纯化获得一种中性多糖JMBP-N和两种酸性多糖JMBP-A1和JMBP-A2。采用H_2O_2对人体肝细胞LO2进行氧化损伤,构建LO2细胞的氧化损伤模型。通过测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量探讨JMBP-C、JMBP-A1和JMBP-A2对氧化损伤细胞的保护作用。结果表明,3种多糖能显著增加氧化损伤细胞的存活率,有效降低LDH的释放量,2 mg/mL时,仙草多糖均能极显著降低损伤细胞LDH活力(P0.01),JMBP-A1质量浓度为0.5 mg/mL时,细胞存活率比模型组增加49.47%。仙草多糖能提高GSH-Px、SOD和CAT活力,且呈现一定的量效关系。JMBP-A2质量浓度为0.125 mg/mL时能将GSH-Px活力提高到正常细胞的69.20%,高于阳性对照,2 mg/mL的JMBP-A1将SOD和CAT活力分别恢复到正常对照组的80.32%和88.14%,极显著高于模型组(P0.01),效果接近阳性对照。同时,3种多糖样品均能有效减少MDA生成,0.5 mg/mL的JMBP-A1使受损细胞的MDA含量降低了31.50%,与阳性对照效果相当。综上,仙草多糖可增加细胞内抗氧化酶活性,降低脂质过氧化物生成,有明显的氧化损伤保护作用。     

不同蛋白源酶解产物对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用研究

本文以H_2O_2诱导损伤的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞为细胞模型,分别研究了三种蛋白源酶解产物(脑活素、鳕鱼蛋白肽和核桃蛋白肽)对H_2O_2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,H_2O_2的加入会使得PC12细胞的细胞数目减少,部分胞体皱缩成圆形或椭圆形,周围光晕消失,且随着H_2O_2浓度的增加,细胞存活率逐渐降低。脑活素可获得最好的PC12细胞损伤保护作用,核桃蛋白肽次之,而鳕鱼蛋白肽作用不明显;此外,结果表明脑活素、鳕鱼蛋白肽和核桃蛋白肽对受损伤细胞的存活和增殖也能起一定的改善作用。因此,核桃蛋白肽是一种改善脑部功能性障碍的潜在原料。     

冰岛刺参胶原蛋白多肽对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究不同分子量范围的冰岛刺参胶原蛋白多肽C1(6 kuMr10 ku)和C2(Mr6 ku)对氧化损伤的神经细胞的保护作用及机制。方法:采用H2O2诱导高分化PC12细胞建立氧化损伤神经细胞模型。预先采用C1和C2处理细胞,浓度分别为0、12.5、25、50、100μg/m L,MTT法测定PC12细胞的增殖活性。将细胞分成正常对照组、模型对照组(H2O2)和样品保护组(胶原蛋白多肽+H2O2),采用不同浓度的C1和C2预处理细胞后,加入H2O2损伤细胞,分别采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、培养基中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内抗氧化酶和Caspase-3的活性。结果:当剂量大于50μg/m L时,C1和C2对H2O2损伤的PC12的增殖活性均有显著的提高作用(p0.01)。高剂量组细胞内ROS水平均显著降低(p0.05)。中、高剂量组细胞的LDH释放量和MDA含量均显著降低(p0.01)、抗氧化酶(SOD、GSH-Px和CAT)活力均显著升高(p0.05)。各组细胞凋亡因子Caspase-3的活性显著下降(p0.05)。结论:冰岛刺参胶原蛋白多肽可以显著保护H2O2诱导的神经细胞损伤,其中低分子量的多肽效果更佳,可能与其氨基酸组成有关。     

6-姜烯酚对H_2O_2诱导NCM460和HCT116氧化损伤的作用研究

建立结直肠癌细胞氧化损伤模型,加入H_2O_2刺激,通过体外细胞实验研究6-姜烯酚对H_2O_2诱导人正常肠上皮细胞(NCM460)和原位结肠癌细胞(HCT116)氧化损伤的不同作用及可能的分子机制。利用倒置显微镜观察不同浓度6-姜烯酚对H_2O_2诱导NCM460和HCT116后细胞形态的改变。CCK8法筛选6-姜烯酚的浓度区间,并测定细胞存活率。Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同分组细胞凋亡。Western-blot检测分析相关凋亡蛋白(Caspase3、PARP1、MCC1、A2F、BCL2)的表达。结果显示,与对照组相比,6-姜烯酚可降低H_2O_2诱导的NCM460中Caspase3、PARP1、MCC1、A2F表达,促进BCL2的表达(p0.05),具有抗氧化作用,并促进H_2O_2诱导的NCM460增殖(p0.05),但是在HCT116中。6-姜烯酚却促进Caspase3、PARP1、MCC1、A2F表达,抑制BCL2表达(p0.05),不同程度加强H_2O_2对HCT116的氧化损伤,抑制细胞增殖(p0.05)。因此可以得出6-姜烯酚对H_2O_2诱导NCM460及HCT116具有明显不同的相反作用,这一发现可为进一步研究6-姜烯酚抗结直肠肿瘤具体相关机制或通路提供指导意义。     

紫芜菁乙醇提物对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

探讨紫芜菁乙醇提取物(BREE)的体外抗氧化能力及其对人肠上皮Caco-2细胞氧化损伤保护效果。二苯代苦味酰基自由基(DPPH)、羟基自由基(·OH)清除率与总还原力评估BREE的体外抗氧化力。过氧化氢(H_2O_2,150μmol/L)建立Caco-2细胞氧化损伤模型评估BREE的细胞保护效果。受损细胞生存率的影响以MTT法测定。细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平依说明用试剂盒测定。硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠法测定细胞内活性氧(ROS)水平。酶联法测定白介素(Interlukin,IL)-1β和IL-8的水平。BREE具有较强的自由基(DPPH和·OH)清除力和总还原力。BREE能显著抑制H_2O_2造成的细胞死亡,提高受损细胞中抗氧化物酶(SOD、CAT和GSH-Px)活性,降低受损细胞内MDA与ROS的生成,并抑制IL-1β和IL-8的分泌。结果提示,BREE具有较强的体外抗氧化能力,能增强细胞内源性抗氧化酶的活力显著改善H_2O_2引发的Caco-2细胞氧化应激损伤并降低炎症反应。