亚硝酸钠对金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌生物被膜形成的抑制作用

本文以金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌为研究对象,采用微孔板检测法,分别以OD630值与生物被膜清除率反映两种菌的生物被膜生成量及不同培养时间添加不同浓度亚硝酸钠对两种菌形成生物被膜的抑制效果,并通过细胞表面反应和细胞间聚集实验初步研究其抑制机理。结果表明:亚硝酸钠对两种致病菌生物被膜的形成均有一定的抑制作用,600 mg/L、培养48 h对金黄色葡萄球菌生物被膜清除率达37.31%,抑制效果最佳;而对副溶血性弧菌而言,添加200 mg/L亚硝酸钠培养12 h时清除率达36.67%,效果最佳。由细胞表面反应与细胞间聚集实验结果表明,亚硝酸钠能有效抑制两种菌的表面粘附和菌体聚集,其主要通过影响细胞聚合与表面粘附,从而抑制金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌生物被膜的形成与生长。     

不同培养条件及群体感应信号分子对蜂房哈夫尼亚菌生物被膜的影响

为研究蜂房哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)Ha-01生物被膜形成的过程及不同培养条件(碳源、p H值、Na Cl质量分数、黏附材料)对其生物被膜形成的影响,采用超声波平板法及扫描电镜法研究不同培养条件下菌株Ha-01生物被膜活菌数及生长情况,并通过添加外源标准群体感应信号分子(N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones,AHLs))中的C6-HSL研究了AHLs与其生物被膜形成的关系。结果显示,菌株Ha-01生物被膜的形成与培养时间密切相关;在不同碳源的培养条件下形成生物被膜能力不同,其中在以木糖为培养基时形成量最大,达到7.51(lg(CFU/cm~2)),与在LB培养基中相比增加10.28%;在中性培养条件下更利于其生物被膜的形成,活菌数为7.77(lg(CFU/cm~2));在Na Cl质量分数为2%时,其生物被膜产生量最大,活菌数为7.18(lg(CFU/cm~2));在不同黏附材料上生物被膜形成能力从大到小依次为铝片、锌片、玻璃片,活菌数分别为7.22、6.48、6.11(lg(CFU/cm~2));且添加C6-HSL量越多,其生物被膜产生能力越强。研究表明,培养条件能够影响菌株Ha-01生物被膜形成,且AHLs可以调控其生物被膜形成。     

硝酸钠对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响

为了评估在硝酸钠存在的食品环境中金黄色葡萄球菌生物被膜的污染风险,研究了硝酸钠对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响,并初步研究了其抑制机理。结果表明,在1.25 mmol/L~10 mmol/L的食品安全浓度下,硝酸钠即能抑制生物被膜的形成;当硝酸钠浓度为10 mmol/L时,生物被膜生物量减少了73.90%,生物被膜活性降低了92.56%。在生物被膜培养物中,硝酸钠生成了亚硝酸钠;在起始硝酸钠浓度为10 mmol/L培养基中,最终培养物中的亚硝酸钠浓度为5 mmol/L。食品安全浓度的硝酸钠对不同来源的食源性金黄色葡萄球菌菌株的生物被膜形成有普遍的抑制作用,抑制效果因菌株而异。此外,在较高浓度下,硝酸钠对生物被膜形成的抑制效果更好,当硝酸钠添加浓度为640 mmol/L时,基本检测不到活菌数。因此,硝酸钠有潜力成为食品环境中金黄色葡萄球菌生物被膜的杀菌剂与去除剂。     

实验用金黄色葡萄球菌生物被膜体外模型的建立

以96孔板为载体,通过改良微孔板法研究细菌接种浓度、培养基pH、培养基浓度、培养温度、培养时间5个单因素对金黄色葡萄球菌生物被膜生长量的影响。在单因素试验基础上,选择培养基pH、培养温度、培养时间3个因素,设计二次回归正交旋转组合试验,建立金黄色葡萄球菌生物被膜实验模型。结果表明,生物被膜成膜最佳条件为细菌接种浓度109CFU/mL、培养基pH7.3、培养基质量分数6%、培养温度37.5℃、培养时间为64.9h,此时96孔板所测光密度理论优化值为3.113 8。     

温度和接种量对搅打奶油中金黄色葡萄球菌生长及产肠毒素的影响

目的：研究金黄色葡萄球菌在搅打奶油中的生长以及产毒特性。方法：将不同浓度的初始接种量的产A型肠毒素金黄色葡萄球菌菌液接种到奶油中并搅打成型,低接种量控制在2～3（lg（CFU/g））,高接种量控制在4（lg（CFU/g））以上。定时测量不同贮存温度条件下奶油中的金黄色葡萄球菌的菌落总数以及产毒状况。结果：36 ℃条件下生长速率最快,其他温度条件下依次降低;低初接种量水平下,只有36 ℃条件下于27 h检测到产生毒素,其他温度条件下未检测到毒素产生;高初接种量水平条件下,在36 ℃于12 h、25 ℃于24 h、15 ℃于66 h检测到产生毒素,5 ℃条件下金黄色葡萄球菌既不生长,又不产毒。结论：随着温度的升高,金黄色葡萄球菌的生长速率随之升高,产肠毒素的时间也随之缩短,高初始接种量水平肠毒素产生的时间短于低初始接种量水平,肠毒素的产生时间为一般在对数期的中后期,此时金黄色葡萄球菌菌落总数≥6（lg（CFU/g））。     

低浓度乙二胺四乙酸对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响

研究了低浓度乙二胺四乙酸(EDTA)对食源性病原菌金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响。实验结果表明,0.2mmol/L的EDTA可有效抑制金黄色葡萄球菌生物被膜形成;EDTA只能影响金黄色葡萄球菌生物被膜形成的早期阶段;Ba2+不能完全阻断EDTA抑制生物被膜生成,Fe2+、Ca2+、Mg2+可以阻断EDTA抑制生物被膜的效应;即使是高浓度的EDTA也不能影响成熟的细胞被膜数量;EDTA能抑制细胞之间的粘附作用。     

反复冻融对速冻水饺菌相变化的影响

本文同时采用PCR-DGGE(聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳)方法和传统平板培养法两种方法研究了反复冻融条件下造成的温度波动对速冻水饺中微生物数量及其种类多样性的影响。并向水饺中人为添加金黄色葡萄球菌,分析反复冻融条件下金黄色葡萄球菌数量的动态变化及其对水饺中菌相的影响。研究结果表明随着反复冻融次数的增加,水饺中的微生物数量均呈显著增加趋势(P0.05),人工接种金黄色葡萄球菌处理组水饺中金黄色葡萄球菌数量从速冻后的3.49 lg CFU/g增加至5.07 lg CFU/g,已经达到了可导致葡萄球菌属中毒的水平(105CFU/g)。PCR-DGGE结果表明,乳酸菌、假单胞菌和热杀索丝菌为反复冻融过程水饺中的优势菌株,葡萄球菌属在后期数量较多成为反复冻融后期的优势菌株,与传统平凡培养方法结果基本一致。     

405 nm LED处理对不锈钢片表面金黄色葡萄球菌生物被膜的清除作用

该研究探究了405-nm LED(light-emitting diode)对不锈钢片表面金黄色葡萄球菌生物被膜的清除作用.首先测定了405-nm LED对不锈钢表面金黄色葡萄球菌生物被膜中活菌的灭活效果,随后通过分析405-nm LED处理后金黄色葡萄球菌生物被膜对消毒剂的耐受性、生物被膜化学成分以及生物被膜微观结构...     

培养条件对金黄色葡萄球菌生物被膜生长的影响

以常见的食源性病原菌金黄色葡萄球菌为研究对象,采用微孔板检测法对其生物被膜形成过程中的不同影响因素进行了研究。结果表明：在37℃下,采用1．6％胰酶大豆肉汤（TSB）培养时,金黄色葡萄球菌易形成大量生物被膜;添加低浓度的单糖及双糖可以大大提高金黄色葡萄球菌形成生物被膜的能力;添加氯化钠对金黄色葡萄球菌形成生物被膜影响显著。     

食品接触表面对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响

在食品工业中,如果金黄色葡萄球菌粘附在食品接触表面并形成生物被膜,不但会造成设备的腐蚀,更重要的是会污染食品,影响了食品的安全性.生物被膜形成的第一步是微生物在食品接触表面的粘附.本文研究了4种不同食品接触表面对金黄色葡萄球菌生物被膜形成的影响.结果表明：与玻璃和PE塑料相比,不锈钢表面粘附形成生物被膜的活菌数较多.不同的食品接触表面影响了生物被膜的形成.     

培养条件及接触材料对大米中蜡样芽孢杆菌生物被膜形成的影响

通过体外构建分离自大米的蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)生物被膜(Biofilm,BF),研究温度、培养时间、碳源、无机盐、p H及接触材料对其生物被膜形成的影响。采用改良的微孔板法培养,通过比浊法、平板计数法判断培养条件对蜡样芽孢杆菌生物被膜形成的影响。实验表明:蜡样芽孢杆菌生物被膜的OD_(600)值在培养24 h达到峰值,48 h后趋于稳定;形成蜡样芽孢杆菌生物被膜最适温度为37℃,最适p H为7.0;在培养基中加入3.0%~6.0%葡萄糖,3.0%蔗糖,1.0%Mg Cl_2时分别达到最明显的促进蜡样芽孢杆菌生物被膜形成的效果;0.01%的Ca Cl_2可促进蜡样芽孢杆菌生物被膜形成;与有机玻璃、聚氯乙烯相比,不锈钢材料更易形成蜡样芽孢杆菌生物被膜;接触过大米的不锈钢表面比洁净的不锈钢表面更适宜生物被膜的形成,且生物被膜内菌体维持活性时间更长。     

布氏乳杆菌细菌素BSX01对金黄色葡萄球菌及其生物被膜形成的影响

为评估布氏乳杆菌所产细菌素在食品工业中的应用潜力，通过培养布氏乳杆菌获得具有抑制金黄色葡萄球菌的抑菌活性物质，经纯化后鉴定其相对分子质量大小与抑菌特性，并对抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成进行探讨。结果发现，布氏乳杆菌在37 ℃ MRS培养基中培养至20 h后进入稳定期，在26 h时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达峰值，为（26.36±0.86） mm。 通过АKTA pure系统串联Superdex 30 Increase纯化后，鉴定得到抑菌活性物质（BSX01）的相对分子质量为773.56，对多种蛋白酶敏感，推测为Ⅰ类细菌素。在pH 10(2 h)和121 ℃(30 min)处理后，BSX01仍具有较好的抑菌活性，最小抑菌质量浓度（MIC）仅为12.50 μg/mL。此外，BSX01在1/2 MIC时可有效降低金黄色葡萄球菌生物被膜的形成，在2 MIC时能够完全抑制生物被膜的形成。基于上述结果，布氏乳杆菌产生的细菌素BSX01是食品工业中的潜在生物防腐剂和抑制食源性致病菌生物被膜形成的有效候选品。     

金黄色葡萄球菌生物被膜基因型的分子鉴定

本文选用常见的典型食源性微生物金黄色葡萄球菌,从食品微生物安全角度出发,采用生物被膜菌落结晶紫染色法定量检测58株金黄色葡萄球菌菌株生物被膜的形成能力。并对金黄色葡萄球菌生物被膜相关基因型进行分型研究,包括ica调控子分型(ica A、ica D、ica BC)与粘附特性分型(agr、atl E和aap)研究。结果显示,所有检测菌株均能生成生物被膜,其中3株能生成强粘附性生物被膜,占5.2%;生成中等生物被膜能力菌株有23株,占39.7%;32株金黄色葡萄球菌生成弱粘附生物被膜,占55.2%。实验所用的58株菌株中有48株能扩增出ica A基因,56株扩增出ica D基因,57株扩增出ica BC基因,56株扩增出agr,分别有53株和57株染色体中存在aap和atl E基因。本实验的结论:ica操纵子为金黄色葡萄球菌生物被膜形成所必须,aap基因可能作为促进金黄色葡萄球菌生物被膜形成的一个独立因素。而atl E,agr基因是金黄色葡萄球菌生物被膜粘附过程中形成所必须的调节因子。     

金黄色葡萄球菌生物被膜的控制方法研究进展

金黄色葡萄球菌是一种重要的食源性病原菌.金黄色葡萄球菌能够形成生物被膜,使其更加难于根除.文中对金黄色葡萄球菌生物被膜的控制方法进行了全面综述,包括去除已形成的生物被膜、杀灭生物被膜中的金黄色葡萄球菌和抑制生物被膜的形成3个主要方面,旨在为食品工业领域生物被膜的控制提供借鉴.     

溶氧对巨大芽孢杆菌发酵亚硝酸还原酶的影响

通过振荡间歇静置培养,研究不同静置时间对巨大芽孢杆菌发酵生产亚硝酸还原酶(nitrite reductase,NiR)的影响,并在适宜间歇静置条件下,分析细胞生长、基质消耗与NiR酶量的关系.结果表明,在发酵前12h每2h振荡培养间歇60min静置培养的条件下,20h发酵时所得亚硝酸盐还原酶的酶活最高:在每2h振荡培养间歇60min静置培养的条件下,周期为20h的该菌的发酵特性研究表明,菌体的细胞生长量及发酵液中的亚硝酸盐消耗量和葡萄糖消耗量均同步低于一直振荡培养的对照组,但发酵20h后所得亚硝酸还原酶的酶活为98.7U/mL,比一直振荡培养的对照组的酶活高出103.4%.     

不同类型表面材料对单增李斯特菌生物被膜形成的影响

以常见的食源性病原菌单增李斯特菌为研究对象,研究PPR,PVC,玻璃,不锈钢4种常见食品加工设备材料对生物被膜态微生物的影响,分别采用扫描电镜观察和超声振荡分离、平板计数培养检测不同类型材料表面生物被膜的形成与生长.实验结果表明:35℃下TSB培养24 h,单增李斯特菌可在PPR,PVC,玻璃和不锈钢等材料表面形成稳定的生物被膜.其表面粘附的菌体数目由多到少依次为:不锈钢PPRPVC玻璃.这说明材料粗糙度对生物被膜的形成影响显著,且粗糙度越大,越易形成生物被膜.改善材料的表面性质来减少菌体的粘附可作为一种间接控制生物被膜的新途径.     

黄芩素联合nisin对金黄色葡萄球菌生物被膜的体外作用

金黄色葡萄球菌的生物被膜是引起其增殖扩散并产生毒素的重要原因。该文探究乳酸链球菌素(nisin)与黄芩素联合使用对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制效果。通过筛选确定nisin与中药成分联用对生物被膜的抑制效果及最佳浓度配比,并初步探究二者联用对金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制机制。结果表明nisin与黄芩素对金黄色葡萄球菌生物被膜的MIC₅₀分别为0.5、0.1 mg/mL;二者联用时多个浓度配比对生物被膜均有协同抑制作用,同时可以降低剂量,其中最佳质量浓度配比为0.062 5 mg/mL的nisin和3.125μg/mL的黄芩素;二者联用可降低生物被膜的黏附性、疏水作用、自动聚集能力、胞外多糖和eDNA的产生,表明其可抑制生物被膜的黏附、生长和成熟;在18 h时nisin与黄芩素对生物被膜的抑制和清除效果最佳;通过扫描电镜观察到生物被膜附着大量减少,菌落分明。nisin与黄芩素联用可协同抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A、B、C在草莓中 表达的研究

目的研究金黄色葡萄球菌在草莓中生长情况及与3种肠毒素SEA、SEB、SEC产生的相关性。方法将实验菌株进行肠毒素分型确认后,分别制备10~4 CFU/g(高)、10~2CFU/g(低)两个浓度菌液,采用浸泡方式人工污染到草莓上,分别于8℃、25℃下贮存,贮存过程中参照GB 4789对草莓进行金黄色葡萄球菌计数和金黄色葡萄球菌肠毒素(A-C)检测。结果适宜条件下,无论初始污染程度高低,金黄色葡萄球菌都能在草莓上正常生长代谢并产生肠毒素,特别是SEA的产生较SEB和SEC迅速。其中,25℃贮存条件下,金黄色葡萄球菌累计到10~4 CFU/g以上就可从样品中检测到SEA,累计到10~5 CFU/g以上可以检测到SEC,累计到10~7CFU/g以上可以检测到SEB;8℃贮存条件下,48 h内未检测到肠毒素。结论以草莓作为金黄色葡萄球菌培养基质,获得了金黄色葡萄球菌生长及与3种常见肠毒素产生的相关性,对草莓微生物风险评估及相关标准制订具有参考意义。     

冷却猪肉分割过程中微生物污染状况的研究

对冷却猪肉在分割过程中的主要接触物、分割肉本身的微生物污染和增殖情况进行研究。结果表明:分割过程中分割线上主要接触物的微生物数量随生产时间的延长而增加,传送带的微生物数量1h内达到1.89～2.48 lg(CFU/cm2),4h达到2.63～3.18lg(CFU/cm2);工人手、刀具、电锯和案板0.5h内微生物数量达到1.42～2.36 lg(CFU/cm2),2h达到1.84～3.08lg(CFU/cm2);初始冷却猪肉的微生物主要集中在胴体表层,在分割和精修过程中,冷却猪肉与污染物的接触,造成二次污染,不同部位分割冷却猪肉的微生物数量也不同,表面微生物数量在2.56～3.68 lg(CFU/cm2)之间,肉中微生物数量在3.18～3.97 lg(CFU/g)之间。     

食源性混合病原菌生物被膜行为对金黄色葡萄球菌毒素因子转录水平的影响

以食源性病原菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和肠炎沙门氏菌)形成的混合菌生物被膜为研究对象,对其定性和定量检测,通过实时荧光定量PCR方法分别检测单一菌和混合菌生物被膜中金黄色葡萄球菌28种目的 毒素基因转录水平的变化.结果 表明,结晶紫染色法、银染法和扫描电镜法均表明混合菌在培养24 h时达到最大黏附度;混合菌生物被膜中...