高效液相色谱法测定功能性饮料中维生素B1、维生素B2含量

为测定功能性饮料中的有效成分,建立高效液相色谱法同时测定功能性饮料中维生素B_1、维生素B_2含量的方法。对色谱条件进行试验及优化验证,以C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)为分离柱,用0.1%三氟乙酸和乙腈以不同比例混合进行梯度淋洗,用紫外检测器在280 nm处测定。结果表明,维生素B_1、维生素B_2的质量浓度分别在0～80μg/mL、0～40μg/mL范围内与其峰面积呈线性关系,其R2值分别为0.999 98、0.999 99,说明线性关系较好;检测方法的精密度、相对标准偏差分别为0.50%、0.77%;样品加入标准品后测得回收率分别在94.17%～97.78%、94.12%～98.53%之间,方法的最低检出限分别为0.002 8、0.000 60μg/mL,定量限分别为0.009 2、0.001 8μg/mL;最后通过抽取两个样品进行检测验证,结果得出检测相对偏差分别在2%～5%、1%～5%,检测结果与实测结果较为接近。     

反相高效液相色谱法测定牦牛乳中的 B 族维生素含量

建立了同时测定牦牛乳中维生素B_1、B_2、B_3、B_6、B_12的高效液相色谱法,样品经离心脱脂,高氯酸除蛋白后,采用反相色谱柱分离,DAD检测器检测,外标法定量。色谱柱为C_18柱(25 mm×4.6 mm,i.d.5μm),流动相为0.023 mol/L H_3PO_4溶液(pH3.54)和甲醇,采用梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,柱温25℃,检测波长270 nm。结果表明:维生素B_2、B_3在0.1~50.0 mg/L,维生素B_1、B_6、B_12在0.5~250.0 mg/L质量浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数均为0.999。5种B族维生素的平均回收率为90.6%~98.4%,相对标准偏差(RSDs)为2.0%~4.3%,在牦牛乳中的检出限为0.01~0.09 mg/L,定量下限为0.03~0.29 mg/L。本方法样品处理简单,分析速度快,准确度和精密度高,能够满足快速分析需要。     

反相高效液相色谱法测定果醋中的8 种维生素

建立梯度洗脱反相高效液相色谱法同时检测果醋中VC、VB1、VB2、VB3、VB6、VB12、叶酸和烟酰胺8种水溶性维生素的分析方法。考察柱温、缓冲液浓度、pH值以及梯度洗脱程序对各组分分离的影响。最终采用0.1mol/L醋酸钠溶液(pH4.25)和甲醇作为流动相进行梯度洗脱,流速为1.00mL/min,柱温为30℃,8种水溶性维生素在14.2min内达到基线分离;紫外检测波长为266nm和280nm;线性范围：VB2、叶酸为0.05～12.5μg/mL;VC、VB1、VB3、烟酰胺为0.1～25μg/mL;VB6、VB12为0.15～37.5μg/mL,相关系数均在0.999以上,其最低检出限为0.47～3.46ng/mL。该法被成功地用于定量果醋中的维生素,平均加标回收率为92.4%～105.2%,相对标准偏差为0.08%～1.54%。     

免疫亲和-HPLC法测定婴幼儿配方乳粉中维生素B_(12)

目的:建立免疫亲和-高效液相色谱法测定婴幼儿乳粉中维生素B12的方法。方法:样品经缓冲溶液提取、过滤,滤液过维生素B12免疫亲和柱净化后,洗脱液在60℃下氮吹定容上机。采用C18色谱柱,柱温为30℃,流动相为乙腈和水(15∶85),梯度洗脱,流速为0.25m L/min,紫外检测器波长为361nm,外标法定量。结果:维生素B12在0.01~1μg/m L范围内呈良好线性关系,相关系数(r)为0.999 9。本方法的检出限为5μg/kg。在样品中添加不同添加量水平的标准物质,加标回收率为80%~89%;选择不同含量的样品,重复测定相对标准偏差(RSD)为0.3%~1.6%。结论:该方法较现行国标GB 5413.14—2010的微生物法操作简便,易于掌握,可提高工作效率。     

HPLC检测黑皮鸡枞菌中的水溶性维生素

研究建立一种简单、快速、可同时检测新鲜黑皮鸡枞菌和菌粉中7种水溶性维生素(维生素C、维生素B_1、维生素B_2、维生素B_6、维生素B_(12)、烟酸和叶酸)的高效液相色谱(high performance liquid chromatographic,HPLC)方法,为黑皮鸡枞菌的深度开发和加工提供科学依据。采用Inertsil ODS-SP(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,流动相A为0.05 mol/L的KH_2PO_4溶液(pH=6.0),流动相B为甲醇,流速0.8 mL/min,柱温为室温,检测波长为268 nm,梯度洗脱,反相高效液相色谱,紫外检测器。7种维生素标准曲线的线性相关系数R2在0.999 6～1.000 0之间,相对标准偏差RSD在0.31%～2.17%之间,加标回收率在88.07%～106.01%之间,最低检出限为0.15μg/mL～1.52μg/mL,定量限为0.49μg/mL～5.08μg/mL。利用所建方法检测出新鲜黑皮鸡枞菌中含有4种水溶性维生素,菌粉中含有5种水溶性维生素且都以维生素C和烟酸为主,水溶性维生素总量分别达到22.25μg/g和242.41μg/g。     

免疫亲和柱净化-HPLC柱后光化学衍生荧光法测定花生饮料中的黄曲霉毒素B_1

建立了免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定花生饮料中黄曲霉毒素B1含量的方法。试样经乙腈-水溶液(体积比80∶20)提取,免疫亲和柱富集和净化后,采用Thermo Syncronis C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(体积比55∶45)为流动相,等度洗脱,荧光检测器检测(Ex:360nm,Em:440nm)。结果表明:黄曲霉毒素B1检出限为7.54×10~(-3)μg/kg;标准曲线的线性范围为0.1～20.0ng/mL(r=0.9999);3个不同水平的加标平均回收率为96.88%～98.82%,RSD值为0.85%～1.07%。10批试样中黄曲霉毒素B_1测定值为0～2.09μg/kg,均无过量残留。该方法具有操作简便、灵敏度高、重现性佳等特点,适用于花生饮料中黄曲霉毒素B_1的检测。     

液相色谱法测定固体饮料中维生素B12的含量

建立一种高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定固体饮料中维生素B12含量的方法。样品经水超声、提取、离心、免疫亲和柱净化处理,采用C18色谱柱,以磷酸氢二钠溶液:甲醇=76∶24(体积比)作为流动相,361 nm紫外检测,外标法测定。结果表明,维生素B12在0.1μg/m L~10μg/m L浓度线性范围内关系良好,相关系数(R2)大于0.999,加标样品的平均回收率为91.4%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为(n=9)2.55%,检出限为0.001μg/g。试验表明,该方法灵敏度和准确性较高,具有较好的可操作性,适用于固体饮料中维生素B12含量的测定。     

PITC柱前衍生反相高效液相色谱法测定维生素功能饮料中L-赖氨酸和牛磺酸的含量

建立反相高效液相色谱法检测维生素功能饮料中L-赖氨酸和牛磺酸的含量的分析方法。维生素功能性饮料中的L-赖氨酸和牛磺酸通过苯异硫氰酸酯(PITC)柱前衍生,生成有紫外响应的氨基酸衍生物苯胺基硫甲酰氨基酸(PTC-氨基酸),PTC-氨基酸经RP-HPLC梯度洗脱后检测维生素功能饮料中L-赖氨酸盐酸盐和牛磺酸的含量。使用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×150mm 5-Micron),流动相A为0.1mol/L的乙酸钠溶液,流动相B为乙腈;流速为1.0mL/min;检测波长为254nm;柱温27℃;进样量20μL。牛磺酸和L-赖氨酸在线性范围内相关系数r0.999,回收率大于97.6,日内RSD分别为0.54%和0.46%(n=6)。结果表明本方法操作性强、灵敏度高,适用于维生素功能饮料中牛磺酸和L-赖氨酸的检测。     

固相萃取-高效液相色谱法测定饮料中维生素B12

利用AgelaPCX固相萃取柱对饮料中的维生素B12进行浓缩和净化,建立了测定饮料中维生素B12的固相萃取-高效液相色谱法。方法的线性范围为0.1～20.00μg/mL,相关系数为0.99996。方法检出限为0.2ng/mL。三个浓度水平的加标回收率分别为78.7%、83.0%、83.3%,相对标准偏差小于3%。     

固相萃取-高效液相色谱法测定饮料中维生素B_（12）

利用AgelaPCX固相萃取柱对饮料中的维生素B12进行浓缩和净化,建立了测定饮料中维生素B12的固相萃取-高效液相色谱法。方法的线性范围为0.1～20.00μg/mL,相关系数为0.99996。方法检出限为0.2ng/mL。三个浓度水平的加标回收率分别为78.7%、83.0%、83.3%,相对标准偏差小于3%。     

高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中的维生素B1、维生素B2

目的建立高效液相色谱法快速测定婴幼儿配方乳粉中的维生素B1、B2的含量。方法样品进行前处理后,采用Waters Xbridge C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5μm)进行分离。以0.05 mol/L乙酸钠溶液-甲醇为流动相等度洗脱,柱温为30℃,流速为1 mL/min,荧光检测器进行检测,外标法定量。结果在优化的实验条件下,维生素B1、维生素B2可以有效分离,线性范围为0.05～1.00μg/mL,相关系数均大于0.999。维生素B1的加标回收率为87.4%～99.1%,相对标准偏差为1.2%～3.06%,检出限为0.03 mg/100 g;维生素B2的加标回收率为90.6%～97.8%,相对标准偏差为0.97%～3.44%,检出限为0.02 mg/100 g。结论此方法简单、快捷、高效,适用于婴幼儿配方乳粉中维生素B1、维生素B2的测定。     

高效液相色谱法测定维生素片中维生素B12的不确定度评定

目的评定高效液相色谱法测定维生素片中维生素B_(12)的不确定度。方法维生素片中维生素B_(12)经纯化水超声提取,经色谱柱分离,流动相等度洗脱,使用紫外检测器550 nm检测,外标法定量来测定维生素片中维生素B_(12)的含量。依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》,考察称量、标准溶液配制、样品和仪器重复测量等主要因素引入的不确定度,并对不确定度的各分量进行计算和合成。结果当维生素片中维生素B_(12)含量为0.408 mg/100 g时,在95%的置信区间下,其扩展不确定度为±0.0053 mg/100 g(k=2)。评定结果表明,实验过程中的不确定度主要来源于标准溶液配制、仪器重复测量。结论不确定度评定适用于高效液相色谱法快速测定维生素片中维生素B_(12)含量的不确定度分析,对检测结果准确度的提高具有指导意义。     

免疫亲和柱-液相色谱法快速测定面粉中黄曲霉毒素B_1的条件优化

建立了免疫亲和柱-液相色谱法快速测定面粉中黄曲霉毒素B_1的方法。样品经甲醇-水(80:20,v/v)提取,经过滤、沉淀(乙酸锌和亚铁氰化钾),通过免疫亲和柱净化,三氟乙酸和正己烷为衍生剂进行衍生,采用C_(18)柱为分离柱,乙腈:水(50:50,v/v)为流动相进行高效液相色谱分离分析。实验结果表明,黄曲霉毒素B_1线性范围(1~10)ng/m L,R2=0.9991,RSD=3.4%,检出限为0.1μg/kg,实际样品的黄曲霉毒素B_1回收率为81%~95%。该方法具有灵敏度高、回收率高、重现性好等优点,可用于面粉中黄曲霉毒素B_1的快速测定。     

酶联免疫法检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B_(12)

建立酶联免疫法检测婴幼儿配方奶粉中维生素B_(12)的分析方法,该方法线性相关系数大于0.996,范围在3~243μg/kg。奶粉样本经60%甲醇-水提取,再做1︰4稀释,通过酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中维生素B_(12)。加标浓度为20μg/kg,奶粉中维生素B_(12)的回收率在95%~118%;加标浓度0,3,6,20和50μg/kg,样本的加标回收率在87%~102%;方法检出限为3μg/kg;与高效液相色谱法检测结果的相对标准偏差小于10%。方法操作简便,准确度和灵敏度高,可适用于婴幼儿配方奶粉中维生素B_(12)的检测。     

高效液相色谱法同时测定二维葡醛内酯片中维生素C、维生素B_1的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定二维葡醛内酯片中维生素C和维生素B_1含量的方法。方法采用Agilent氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈0.04 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至2.5)(66:34),流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长249 nm。结果维生素C平均回收率为99.96%,RSD为0.08%;维生素B_1平均回收率为99.93%,RSD为0.15%。结论本法简单、准确,适用于二维葡醛内酯片中维生素C、维生素B_1的含量测定。     

免疫亲和柱-高效液相色谱法检测红曲米中的桔霉素

制备抗桔霉素(citrinin,CIT)单克隆抗体免疫亲和柱(IAC),建立了检测红曲米中CIT的免疫亲和柱-高效液相色谱检测方法。采用甲醇-水提取红曲米样品,将提取液用PBS稀释后过免疫亲和柱,甲醇洗脱后以高效液相色谱法检测,激发波长为331 nm,发射波长为500nm,流动相采用乙腈-磷酸溶液(体积比为45:55,pH2.0)。每根抗CIT单克隆抗体免疫亲和柱使用0.5 mL溴化氰活化的4FF琼脂糖凝胶,0.5mg桔霉素单克隆抗体,柱容量为0.35μg。红曲米样品添加CIT标品0.1～0.6 mg/kg,平均回收率为74.2%～87.14%,相对标准偏差为2.85%～13.12%。最低检出限为0.1mg/kg(S/N=3)。     

UPLC-MS/MS分析运动饮料中水溶性维生素

建立一种超高效液相色谱-串联质谱分析运动饮料中VB1、VB2、VB5、VB6、VB7、VB9、VB12、烟酸、烟酰胺、VC10种水溶性维生素的方法。样品前处理用10%乙醇沉淀提取后,采用Waters Atalantis T3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm)分离,以0.1%甲酸-10.0%甲醇为流动相的梯度洗脱模式下,10种水溶性维生素在10.0 ng/mL~1 000.0 ng/mL浓度范围内线性良好,相关系数r2为0.999 3~0.999 9,检出限范围为0.10μg/kg~11.5μg/kg,定量限范围为0.35μg/kg~38.0μg/kg,加标回收率为90.3%~99.5%,相对标准偏差(RSD)为2.0%~3.6%。     

高效液相色谱法测定婴儿奶粉中维生素B12

建立了奶粉中维生素B12的反相高效液相色谱的测定方法,奶粉经去蛋白质-糖分-超声提取-富集浓缩超滤后进高效液相色谱仪,采用C18色谱柱,水-乙腈流动相体系,梯度洗脱能够快速有效地分离奶粉中的维生素B12.线性范围为0.010μg/mL～10μg/mL,相关系数为0.9998,检出限为0.1 μg/100g,加标回收率为78.8％～84.0％.该方法适用于实际样品的测定,速度快、成本低,结果令人满意.     

超高效液相色谱-串联质谱测定鸡饲料中黄曲霉毒素B_1

建立一种用超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡饲料中黄曲霉毒素B_1的检测方法,并对广州市售11种鸡饲料进行了分析。试样经70%甲醇-水溶液超声提取,黄曲霉毒素B_1免疫亲和柱净化;以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,采用Waters Acquity UPLC–BEH C_(18)柱(2.1 mm×50 mm×1.7μm)色谱柱分离,电喷雾正离子模式进行质谱测定。结果表明:该方法的黄曲霉毒素B_1检出限为0.5 ng/m L,线性范围为0.5000~50.00 ng/m L,相关系数为0.993 7,以空白样品为基质3个加标水平下黄曲霉毒素B_1的平均回收率为88.8%~93.5%,RSD5.0%。该方法准确高效,重现性好,可实现鸡饲料中黄曲霉毒素B_1的测定。     

高效液相色谱-柱后衍生法测定保健品中维生素B_1的含量

文章建立了测定保健品中维生素B_1含量的高效液相色谱-柱后衍生法。方法采用色谱柱:Ultimate XB-C18(4.6mm×150mm,5μm);流动相:(0.01%辛烷磺酸钠+1.5%乙酸+5%甲醇+0.12%三乙胺)-甲醇(65∶35);流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:Ex=375nm,Em=435nm。研究发现该柱后衍生法测定同一样品中维生素B_1含量得到的峰面积是柱前衍生法测定结果的1.6-18.8倍,维生素B_1含量在0.01-32μg/mL范围内线性良好,R2=0.999,检出限为1 ng/mL。该方法灵敏、简便、准确,重现性好,可用于保健品中维生素B_1含量的测定。