纳豆菌蛋白酶水解玉米醇溶蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽

利用纳豆菌固态发酵产酶酶解玉米醇溶蛋白,酶解物经Sephadex G-259离纯化,对产物及其组分血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性进行检测.结果表明,酶解血管紧张素转化酶的抑制活性为77.83%,经分离后组分3的抑制效果最好,可达89.4%.     

猪股骨头胶原蛋白降血压肽的分离纯化

依次采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对猪股骨头胶原蛋白进行酶解,制备降血压肽。为了得到高活性、高纯度的降血压肽,依次采用超滤、离子交换层析、凝胶层析对酶解液进行分离纯化,采用体外检测方法测定各分离产物对血管紧张素转化酶活性的半抑制浓度（IC50值）。结果显示：猪骨酶解液经超滤分离获得分子质量小于5 ku的组分对血管紧张素转化酶的抑制活性最高,IC50值为1.400 2 mg/mL;该组分进行离子交换层析分离得4个组分,其中组分2的活性最高,IC50值为0.488 4 mg/mL;再将组分2进行凝胶层析分离得4 个组分,其中组分2-2的活性最高,IC50值为0.195 3 mg/mL。     

酶解胶原蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制剂是目前用于治疗高血压的重要药物.本实验采用胃蛋白酶(pepsin)和胰蛋白酶(trypsin)组合酶解胶原蛋白制备水解液.使用1kD超滤膜对水解液进行超滤,超滤液采用葡聚糖凝胶Sephadex G-15凝胶过滤层析得到多种组分.各组分经酶活力和蛋白浓度测定,筛选出有较高 ACE抑制率的两个样品.继续使用反相高效液相色谱进一步分离筛选出样品,对分离出的不同组分进行蛋白浓度和抑制率测定,通过分析实验数据,筛选出具有最高活性组分.最终样品经脱盐和冷冻干燥后进行高抑制活性的血管紧张素转化酶抑制肽的分子量的测定.     

鹿茸血制备ACE抑制肽的分离及结构鉴定

以天山马鹿的鹿茸血为原料,酶解制备血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。用碱性蛋白酶水解,水解产物具有较高的ACE抑制活性,对该水解产物进行分离,鉴定其中活性最强的组分的结构为PPLY(Pro-Pro-Leu-Tyr)。本实验证明从天山马鹿鹿茸血碱性蛋白酶水解物中可分离得到的一种新的ACE抑制肽PPLY。     

中国毛虾酶解产物的分子量分布及ACE抑制活性

利用胃蛋白酶酶解中国毛虾制备具有血管紧张素转化酶抑制活性的酶解产物,并采用凝胶色谱法探讨酶解产物的分子量分布。结果表明:在45℃、pH2.5、酶量2%(w/w)、酶解4h、底物浓度20%(w/v)条件下,中国毛虾酶解产物的ACE抑制率高达85.9%;Sephadex G-15葡聚糖凝胶色谱图上出现5个吸收峰,其中高ACE抑制活性组分的分子量在1320～311之间,IC50为0.77mg/mL。     

酶解玉米胚芽粕制备ACE抑制肽的条件优化

采用碱性蛋白酶酶解玉米胚芽粕制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,并以ACE抑制率为指标,在单因素的基础上,通过L9(34)正交试验来确定酶解的最佳工艺条件。最佳酶解条件为:底物浓度5%(w/v)、加酶量3%(w/w)、温度60℃、pH 8.5、水解时间2.5 h,在此条件下,水解物对ACE抑制作用最强,抑制率可以达到86.38%(此时水解度为22.76%)。以截留分子量为6KDa的超滤膜分离该水解物,测定两组分的ACE抑制活性。酶解液经超滤后组分Ⅱ(M6 kDa)的IC50值达到1.38 mg/mL,优于未超滤的酶解液的IC50值(3.16 mg/mL)。     

英红九号茶蛋白ACE抑制肽的制备、氨基酸组成及不同超滤组分的活性评价

以英红九号红茶渣经碱溶酸沉提取的茶蛋白为研究对象,血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验和响应面优化得到茶蛋白ACE抑制肽的最佳制备工艺,并对酶解物进行氨基酸组成分析、超滤膜分离和不同分子量组分的ACE抑制活性分析。结果表明,英红九号茶蛋白ACE抑制肽的最优酶解工艺为酶解温度37℃、3.20 h、p H值7.20、底物质量分数3%、酶底质量比0.40%,在此条件下进行的验证试验ACE抑制率为83.38%,与理论值84.48%较相符。英红九号茶蛋白ACE抑制肽酶解物富含必需氨基酸(33.03%)和对ACE抑制活性有重要意义的疏水性氨基酸(47.20%),且经超滤膜分离所得<3ku组分的ACE抑制活性(IC₅₀=0.85 mg/mL)要显著强于酶解物(IC₅₀=1.37 mg/mL)和>3 ku组分(IC₅₀=2.81 mg/mL)。该研究为食源性ACE抑制肽的研究开发和英红九号茶蛋白的高值化利用提供了理论依据。     

分离纯化醋蛋水解物制备降血压肽的研究

经胃蛋白酶-胰酶复合酶体系水解醋蛋液得到的水解物对血管紧张素转化酶有较强的抑制活性(IC50=0.125mg/mL),醋蛋水解物经Bio-gelP-2纯化、半制备型RP-HPLC分离,得到对ACE有强烈抑制作用的组分Y,Y经电喷雾质谱、保温后确定其序列为Arg-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Phe的多肽类物质。     

酶法制备大豆蛋白降血压肽的研究

采用5种蛋白酶对中性蛋白酶 A.S1398 酶解大豆蛋白生成的相对分子质量高的组分(HMF)进行再次水解制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽.研究结果表明,Protease N 为最适用酶,优化的水解条件为:底物质量分数5%,加酶量2.0%,pH 7.0,温度55℃.在此条件下酶解120 min,水解物对ACE抑制作用最强,抑制率达到65.1%(此时水解度为11.1%);水解液经Sephadex G-15分离,得到了对 ACE 具有较好抑制作用的组分,IC50值约为40μg/mL.     

三斑海马蛋白ACE抑制肽的制备及其二级结构的研究

以三斑海马为原料,经碱性蛋白酶酶解,获得富含血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解液。酶解液经透析、Sephadex G-25凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱得到进一步分离纯化。结果表明,透析产物的IC50值为(0.44±0.26)mg/mL,相比酶解液(0.81±0.12)mg/mL,其ACE抑制活性更强。透析产物经Sephadex G-25凝胶柱分离纯化后,得到3种组分,其中组分F2的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.11±0.08)mg/mL。F2经反相高效液相色谱进一步分离后,得到6个具有ACE抑制活性的组分峰,其中组分F2-4的ACE抑制活性最强,IC50值为(0.005 7±0.000 9)mg/mL。经过3步分离纯化后,成功从三斑海马蛋白中分离得到一种活性较强ACE抑制肽:ProAla-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala(PAGPRGPA),多肽分子量为721.39 Da。圆二色谱分析多肽二级结构表明其主要含无规则卷曲。因此,从三斑海马蛋白中分离得到的多肽可能成为营养保健品和抗高血压药品及相关疾病的一种有益成分,且对海马蛋白资源的开发利用具有重要意义。     

超声波辅助酶解对玉米醇溶蛋白酶解产物抗氧化及ACE抑制活性的影响

作为玉米加工的副产物,玉米醇溶蛋白可以在酶的作用下形成具备生物活性的多肽物质,应用于药物的生产加工过程.而常规的酶解工艺存在酶的利用率低下、产物转化率低、耗费时间长等缺陷,本文研究了超声波辅助酶解对玉米醇溶蛋白酶解产物抗氧化及ACE抑制活性的影响.研究结果表明,超声功率为200W,超声时间为40min,料液比为1 ∶1...     

油菜蜂花粉ACE抑制活性酶解物的制备及分离

采用4 种蛋白酶水解油菜蜂花粉蛋白制备ACE 抑制活性物质,高效液相色谱法测定油菜蜂花粉蛋白水解物对ACE 的抑制率。结果表明：油菜蜂花粉蛋白酶水解物具有ACE 抑制活性,水解物对ACE 的抑制活性差异显著(P ＜ 0.05),其中碱性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶＞酸性蛋白酶,碱性蛋白酶水解物的IC50 为0.35mg/mL。4 种蛋白酶水解物经Bio P-2 凝胶分离后,ACE 抑制活性较强的组分主要集中在保留时间70～120min,在此区间碱性蛋白酶水解物分离组分对ACE 的抑制率达到90% 以上,分子质量在376.4～1355D 之间。     

Effects of sweeping frequency ultrasound treatment on enzymatic preparations of ACE-inhibitory peptides from zein

In this study, the effect of sweeping frequency ultrasound (SFU) treatment on the degree of hydrolysis of zein and the angiotensin I-converting enzyme (ACE)-inhibitory activity of its hydrolysates were investigated. The mechanism through which ultrasonic pretreatment releases peptides with ACE-inhibitory activity was also studied by fluorescence, circular dichroism (CD), scanning electron microscopy (SEM), and atomic force microscopy (AFM). Compared to the control, SFU and fixed frequency ultrasound (FFU) increased the degree of zein hydrolysis by approximately 11.5 %. Sweeping frequency ultrasound pretreatment increased ACE-inhibitory activity of zein hydrolysates by 12.3–116.7 % over the control. At 40 ± 2 kHz, SFU-treated zein hydrolysates had 42.9 % ACE-inhibitory activity, representing an increase of 116.7 % over the control. The fluorescence intensity of SFU- and FFU-treated zein was weaker than in untreated zein, indicating that more Phe, Trp, and Tyr residues were exposed outside the polypeptide chains. CD spectra show that SFU treatment resulted in increase in the α-helix content by 3.4 %, and β-sheet, β-turns, and random coils content by 24.4 %. Analyses of microstructure by SEM and AFM revealed that ultrasonic pretreatment ruptured the fine meshwork structure of zein resulting in the appearance of several micro-holes. We conclude that the SFU pretreatment for 40 ± 2 kHz can remarkably raise the degree of zein hydrolysis and ACE-inhibitory activity of the hydrolysates by altering the second structure of zein and rupturing the smooth surface of protein.     

酪蛋白水解物的酶法修饰与ACE抑制活性变化

利用枯草杆菌碱性蛋白酶水解酪蛋白制备酪蛋白水解物,其水解度为11.2%,IC50为47.1μg/mL。再应用相同的酶对酪蛋白水解物进行类蛋白反应修饰,考察底物浓度、温度和酶添加量对类蛋白反应的影响,并制备5个不同的修饰产物测定其ACE抑制活性和IC50值。结果表明,修饰产物的ACE抑制活性随修饰程度(游离氨基减少量)的增加而提高,并且都高于未经修饰的酪蛋白水解物。当游离氨基减少量为154.65μmol/g(蛋白)时,修饰产物的IC50值可降至0.6μg/mL。毛细管电泳分析结果显示类蛋白修饰后水解物的多肽组成情况发生明显变化。研究结果证明酪蛋白水解物的ACE抑制活性可以通过类蛋白反应的修饰作用而提高。     

ACE-inhibitory activity of tilapia protein hydrolysates

Fish processing wastes can be used for preparing bioactive peptides with various functionalities. Our objective was to evaluate the in vitro angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity of tilapia protein hydrolysates and its corresponding fractionates. Tilapia protein was alkali-solubilised at pH 11.0 and recovered at pH 5.5 to obtain a stable substrate. This substrate was hydrolysed using two enzymes, Cryotin-F or Flavourzyme, to 7.5% and 25% degree of hydrolysis (DH). The hydrolysates were ultra-filtered into three fractions: >30 kDa fraction, 10–30 kDa fraction, and <10 kDa fractions. Both hydrolysates and fractionates were tested for ACE inhibition. Results showed that both Cryotin and Flavourzyme hydrolysates with 25% DH gave maximum ACE inhibitory activity. Low MW peptides showed higher ACE inhibition than high MW peptides. The inhibitory activity of fractionates was lower than that of the corresponding hydrolysates, possibly due to separation and removal of synergistic peptides by ultrafiltration. Amongst fractionates, all the 7.5% DH Cryotin fractions and 25% DH Flavourzyme fractions exhibited optimum % ACE inhibition. The results of this research could be used for optimising enzyme parameters to obtain peptides from tilapia with optimum in vitro ACE inhibitory activity.     

花生蛋白水解产物ACE抑制活性的研究

采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶水解花生蛋白,研究了水解过程中水解度的变化,并对水解产物的ACE抑制活性进行了探讨。得出三种酶对花生蛋白的水解作用:碱性蛋白酶>胰蛋白酶>中性蛋白酶。碱性蛋白酶水解产物ACE抑制活性明显高于胰蛋白酶和中性蛋白酶,水解产物的ACE抑制活性高达89.73%,中性蛋白酶水解产物ACE抑制率仅为27.24%。     

Antioxidant,lipase and ACE-inhibitory properties of camel lactoferrin and its enzymatic hydrolysates

The antioxidant and the lipase and the angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitory properties of camel lactoferrin and its hydrolysates elaborated with four proteolytic enzymes (trypsin, α-chymotrypsin, pancreatin and papain) were assessed. Lactoferrin was purified from camel colostrum using cation exchange chromatography. Camel lactoferrin hydrolysates showed different degrees of hydrolysis, reverse phase-HPLC profiles and molecular weight distributions, reflecting heterogeneity in terms of polarity and molecular weight of the generated peptides. Camel lactoferrin hydrolysates exhibited higher antioxidant, lipase and ACE inhibitory activities than native lactoferrin. Pancreatin-generated hydrolysates showed the highest lipase inhibitory activity (48.1%), while papain-generated hydrolysates presented the greatest ACE inhibitory activity (89.14%).     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。     

燕麦麸蛋白ACE抑制肽的制备及性质研究

以燕麦麸为原料制备了燕麦麸蛋白,并利用蛋白酶对其酶解。测定了不同蛋白酶的水解产物的ACE抑制活性,以Alcalase和Trypsin酶解物活性最强。在此基础上进一步考察了Alcalase和Trypsin酶解物的DH对ACE抑制活性的影响,结果表明DH11.0%的Alcalase酶解物和DH12.2%的Trypsin酶解物有最大ACE抑制活性,分别达92.31%和86.36%。两种酶解物的肽组分相对分子质量均较低,大部分都低于1 000u。氨基酸分析表明ACE抑制肽中富含Glu、Leu、Pro和Phe。为了达到活性组分富集的目的,超滤技术是一种切实可行的方案。     

酪蛋白酶解产物·OH清除和ACE抑制活性的稳定性

研究温度、pH值、金属离子和不同浓度的糖、盐对酪蛋白酶解产物羟自由基清除活性和ACE抑制活性的影响。结果表明:酪蛋白酶解产物的羟自由基清除活性对热不稳定,而ACE抑制活性对热稳定;在酸性条件下羟自由基清除活性和ACE抑制活性略有下降,在碱性条件下,活性丧失较多;金属离子能降低羟自由基清除活性,其影响大小顺序为Mg2+>Cu2+>Zn2+>K+>Ca2+,而对ACE抑制活性影响不大;在加热条件下,葡萄糖能增强羟自由基清除活性,而蔗糖和NaCl对其影响不大,葡萄糖和蔗糖对ACE抑制活性的影响均不显著,而质量分数为2%以上的NaCl可使ACE抑制活性明显降低。