抗人淋巴细胞免疫球蛋白制品中的热原处理工艺

目的 研究热原不合格的抗人淋巴细胞免疫球蛋白（ALG）半成品再制的条件。方法 将热原不合格的ALG半成品通过碱、酸以及DEAE　Sephadex　A-50处理,并检测其热原和质量的变化。结果 经处理后,细菌内毒素的含量明显降低,用家兔法和鲎试剂法检测热原均合格,制品的免疫效价仍不低于1:4000,并且其他各项主要指标也均达到2000年版《中国生物制品规程》的要求。结论 这种处理方法能有效地除去ALG制品中的热原。     

低pH病毒灭活工艺对抗人淋巴细胞免疫球蛋白质量的影响

抗人淋巴细胞免疫球蛋白（ＡＬＧ）是由多份猪免疫血浆为原料制备的产品,免疫所用的抗原来源于人的淋巴细胞,同时在ＡＬＧ生产过程中,使用了人血浆、人红细胞以及人胎盘组织吸收杂抗体。尽管对所用的人源性原料中血源性病毒实行了越来越严格的筛选,但由于筛选方法本身的限制和感染窗口期的存在,人源性原料的污染很难避免。因此有必要对ＡＬＧ中人源性病毒进行灭活。本文对抗人淋巴细免疫球蛋白进行病毒灭活后的质量进行了分析。结果抗人淋巴细胞免疫球蛋白通过低ｐＨ孵化２４天后（ｐＨ４．１±０．３）,其免疫效价仍不低于１：４００…     

一种抗人T淋巴细胞免疫球蛋白淋巴细胞毒效价检测方法的建立

目的 建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法 采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名：Grafalon)作为待检样品,建立其淋巴细胞毒效价定量检测方法。优化反应体系,考察细胞培养密度、细胞代次对待检样品效价的影响,并对方法的精密度进行验证。结果 优化的反应体系组成为50μL待检样品+50μL补体(1∶5稀释)+50μL细胞(5×10⁶个/mL);细胞传代密度为2×10⁵个/mL传代培养72 h或3×10⁵个/mL传代培养48 h用于效价测定最佳;当细胞生长状态较好且一致时,从P10到P25代次的细胞效价测定结果较一致。采用该方法板内重复测定待检样品效价,变异系数(CV)为6.32%,重复性良好;不同代次Jurkat细胞测定待检样品效价6次,CV为4.15%,中间精密度良好。结论 建立了一种便捷、精确的测定ALG淋巴细胞毒效价的定量检测方法,为...     

卵黄免疫球蛋白的稳定性研究

经稳定性研究发现，IPY具有一定的耐热、耐酸、耐碱及耐高渗性能，在温度不高于65℃、PH4～11的范围内具有较好的稳定性；在60％的高浓度蔗糖溶液中还能保持活性。并通过在各种条件下的紫外、荧光分析了活性与其结构之间的关系。     

静注人免疫球蛋白（pH 4）工艺优化后产品的稳定性

目的 评价静注人免疫球蛋白（pH 4）[human immunoglobulin(pH 4)for intravenous injection,IGIV,简称静丙]工艺优化后产品的稳定性。方法 在多批次规模化生产中,采用A滤板和B滤膜分别对不同分离阶段蛋白组分进行过滤,以降低产品中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)残留量。对成品进行物理（外观、可见异物、不溶性微粒检查及热稳定性试验）、化学检定[蛋白质含量、纯度、分子大小分布、抗-HBs、白喉抗体、激肽释放酶原激活剂（prokallikrein activator,PKA）、抗补体活性（anti-complement activity,ACA）及抗-A和抗-B血凝素抗体效价、IgA残留量]及加速和长期稳定性试验。结果 采用优化工艺生产的静丙关键质量指标与正常工艺生产批次相比,均无明显差异,IgA残留量明显下降（t分别为3.992和11.215,P均<0.05）。加速稳定性和长期稳定性试验工艺优化后的静丙各项检测结果均合格,符合《中国药典》三部（2020版）中相关规定。结论 工艺优化后的静丙在有效降低IgA残留...     

巴氏消毒法对乙型肝炎人免疫球蛋白病毒灭活效果的验证

目的以伪狂犬病病毒(PRV)、Sindbis病毒和HIV-1为模型病毒,验证巴氏消毒法对乙型肝炎人免疫球蛋白(HBIG)的病毒灭活效果。方法将模型病毒按1:9(v/v)的比例加入HBIG样品中,60℃水浴保温10h,测定病毒滴度,观察病毒灭活效果,并以放射免疫法测定病毒灭活前后样品抗HBsAg效价的变化。结果病毒灭活后,PRV滴度下降超过5LgCCID50/0.1ml,Sindbis病毒滴度下降超过6LgPFU/ml,HIV-1滴度下降超过4LgCCID50/0.1ml;3批HBIG样品的抗HBsAg效价分别降低了6.5%、6.0%和5.8%。结论巴氏消毒法可以对HBIG样品中的模型病毒进行有效灭活。目的以伪狂犬病病毒(PRV)、Sindbis病毒和HIV-1为模型病毒,验证巴氏消毒法对乙型肝炎人免疫球蛋白(HBIG)的病毒灭活效果。方法将模型病毒按1:9(v/v)的比例加入HBIG样品中,60℃水浴保温10h,测定病毒滴度,观察病毒灭活效果,并以放射免疫法测定病毒灭活前后样品抗HBsAg效价的变化。结果病毒灭活后,PRV滴度下降超过5LgCCID50/0.1ml,Sindbis病毒滴度下降超过6LgPFU/ml,HIV-1滴度下降超过4LgCCID50/0.1ml;3批HBIG样品的抗HBsAg效价分别降低了6.5%、6.0%和5.8%。结论巴氏消毒法可以对HBIG样品中的模型病毒进行有效灭活。     

采用低pH法灭活人乙型肝炎免疫球蛋白中的病毒

目的　考察人乙型肝炎免疫球蛋白 (HBIG)于低pH孵放下 ,其病毒灭活情况 ,及对抗—HBs效价、IgG组份的影响。方法　将HBIG原液调pH至 4 0于 2 4℃± 1℃孵放 2 1d ,以及将成品于 2～ 8℃放置 3年比较抗—HBs、IgG各组份指标的变化。结果　HBIG原液按上述条件病毒灭活效果可达到 7 0 0logTCID50 0 1mL以上 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体 (D +M)的含量均有所下降。成品 2～ 8℃放置 3年 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体的含量较稳定。结论　人乙型肝炎免疫球蛋白经低PH灭活病毒法灭活病毒有效 ,灭活后 ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体之和均有所下降 ,但其成品放于 2～ 8℃ ,抗—HBs效价、IgG单体与二聚体含量较稳定     

人破伤风免疫球蛋白国家标准品的研制

目的　研制人破伤风免疫球蛋白国家标准品。方法　按WHO有关要求制备并检测标准品 ,以人破伤风免疫球蛋白国际标准品为标准进行协作标定。结果　冻干人破伤风免疫球蛋白国家标准品经外观、水分、无菌、分装误差、效力检测 ,均符合要求 ,在 4℃保持 6 0个月效力稳定。协作标定平均值为 10 5 5IU 支 ,CV值为4 7%。结论　该批人破伤风免疫球蛋白标准品可以作为国家标准品 ,效价定为 10IU 支 ,批号为 0 0 1     

抗人T细胞猪免疫球蛋白的有效期研究

目的研究低温乙醇法工艺生产的抗人T细胞猪免疫球蛋白的有效期。方法将3批经全面检定合格的抗人T细胞猪免疫球蛋白置(6±2)℃贮存36个月,分别于0、3、6、9、12、18、24、30、36个月取样,参考《中国药典》三部(2005版)中抗人T细胞猪免疫球蛋白检测方法和标准,对制品外观、pH值、纯度、蛋白含量、分子大小分布以及效价进行检定。将E玫瑰花环形成抑制试验及淋巴细胞毒试验的标示量与贮存时间结果导入Excel,使用6SQ统计加载项,进行一元线性回归,选择时间和预测区间的上或下限作散点图,在散点图中选择添加趋势线,如可观察到预测区间的上限值呈线性,可在趋势预测/回归分析类型中选择线性,获得拟合方程,将标示量带入方程中,计算获得有效期。结果根据E玫瑰花环形成抑制试验效价测定结果,理论推算在(6±2)℃条件下保存时,有效期可达41~100个月;根据淋巴细胞毒试验效价测定结果,理论推算在(6±2)℃条件下保存时,有效期可达47.9~64.3个月。结论初步确定抗人T细胞猪免疫球蛋白制品有效期为30个月。     

蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)质量稳定性考察

目的考察蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)存放于不同温度、不同时期的质量稳定性,以及内包装材料对制品质量稳定性的影响。方法将静注人免疫球蛋白(pH4)分别放置于2~8℃和20~25℃的条件下,定期取样。依照《中国生物制品规程》(2000年版)的相应标准进行检测,并比较进口与国产模制瓶灌装对产品质量的影响。结果静注人免疫球蛋白(pH4)在2~8℃条件下存放2年后,与出厂时的检验结果比较,质量指标无显著变化;在20~25℃条件下存放2年后,分子大小分布、抗-HBs效价、浊度等质量指标变化显著。静注人免疫球蛋白(pH4)灌装于进口模制瓶的质量稳定性优于国产模制瓶。结论蓉生静注人免疫球蛋白(pH4)保存在2~8℃在有效期内质量稳定。     

狂犬病人免疫球蛋白低pH孵放工艺的病毒灭活验证

目的对狂犬病人免疫球蛋白(human rabies immunoglobulin)低pH孵放生产工艺[pH 3.8～4.4,(24±1)℃,21 d]进行脂包膜病毒灭活验证。方法以伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)、水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)、辛德毕斯病毒(sindbis virus,SV)和人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)作为研究病毒,考察低pH孵放对这些脂包膜病毒的灭活能力。同时考察低pH孵放步骤对制品质量的影响。结果在工艺设定的参数范围内,低pH孵放后4种脂包膜病毒的滴度降低均在4.00 Log以上,且3批狂犬病人免疫球蛋白的纯度和分子大小分布保持稳定,抗体效价与灭活前差异均在方法允许的波动范围内。结论低pH孵放工艺能有效地灭活脂包膜病毒,保证了狂犬病人免疫球蛋白制品的质量及安全性。     

高效价巨细胞病毒人免疫球蛋白原料血浆的筛查

目的分析普通健康供浆员中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)免疫球蛋白(IgG)抗体效价分布情况,筛查富含高效价HCMV IgG抗体的原料血浆。方法采用HCMV IgG定量检测试剂,检测本公司下属广西地区五个单采血浆站采集的血浆样本的HCMV IgG抗体效价,检测抗体效价15 PEI-U/ml的血浆样本混合后的HCMV IgG抗体效价,并对血浆中富含HCMV抗体的供浆员血浆进行采集,分析效价分布变化情况。结果健康供浆员28 607份血浆样本的HCMV IgG抗体阳性率为85.2%,其中效价分布在1~10、10~15、15 PEI-U/ml的各占64.5%、8.7%和11.9%;1 318名血浆中富含HCMV抗体的供浆员8 426份血浆样本HCMV IgG抗体阳性率为98.1%,抗体效价15 PEI-U/ml占43.8%,约为普通健康人血浆样本的3.7倍,3个月内平均抗体效价可维持在15 PEI-U/ml以上的有586人,占44.5%;不同浆站抗体效价15 PEI-U/ml的血浆样本混和后的平均效价为33.72 PEI-U/ml。结论健康供浆员中高效价HCMV IgG抗体的比例较高,部分供浆员HCMV IgG抗体高效价水平可稳定维持3个月,从健康供浆员中采集含高效价HCMV IgG抗体的原料血浆,用于制备巨细胞病毒人免疫球蛋白具有可行性。     

抗人淋巴细胞球蛋白制剂的质量比较

抗人淋巴细胞球蛋白(ATG/ALG)是一种有效的免疫抑制剂。目前对ATG制剂的活性及质量体外检测方法均以细胞毒和花环抑制试验为主。本文用上述方法检定了兔抗人淋巴细胞球蛋白(R-ATG)和马抗人淋巴细胞球蛋白(E-ATG)。结果表明:两种制剂的细胞毒滴度和花环抑制试验基本相同。应用~3H—胸腺嘧啶渗入试验研究ATG对PBMC促有丝分裂活性,结果表明:R-ATG的活性高于E-ATG。ATG体外促有丝分裂活性可作为预测ATG临床疗效的一个参数。     

微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测静注人免疫球蛋白中抗A、抗B血凝素滴度效果的比较

目的比较微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中抗A、抗B血凝素滴度的效果。方法分别采用微柱凝胶法与试管抗人球蛋白法检测34批IVIG样品以及1批IVIG抗A、抗B血凝素最大效价国际标准品(07/310)中的抗A、抗B血凝素滴度,并分析两种方法检测结果的相关性、灵敏度和重复性。结果两种方法检测抗A、抗B血凝素滴度的结果均呈高度正相关性(r值分别为0.809 4和0.834 9,P均0.05);微柱凝胶法的灵敏度比试管抗人球蛋白法高约2个滴度;微柱凝胶法较试管抗人球蛋白法具有更好的重复性。结论微柱凝胶法与传统的试管抗人球蛋白法相比,具有高度相关性、更高的灵敏度和更好的重复性,可用于IVIG中抗A、抗B血凝素滴度的测定。     

静注人免疫球蛋白新生产工艺病毒灭活/去除效果的验证及评估

目的对静注人免疫球蛋白(intravenous human immunoglobulin,IVIG)新生产工艺的病毒灭活/去除效果进行验证及评估。方法选择4种脂包膜病毒[人免疫缺陷综合征病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SV)和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)]及非脂包膜病毒[猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)]作为验证病毒,在缩小的生产规模条件下考察辛酸钠沉淀/深层过滤、低pH孵放和纳米膜过滤步骤对一种或几种指示病毒的灭活/去除能力。结果辛酸钠沉淀/深层过滤步骤可灭活/去除PPV 1.88 Log;低pH孵放对HIV、PRV、SV和VSV的灭活效果最低分别为≥5.22、≥4.26、≥6.56和≥5.69 Log;Bio EX纳米膜可去除PPV达4 Log以上。结论 IVIG新生产工艺的病毒灭活/去除效果合格,可有效灭活/去除未知的、新出现的病原体。     

静注人免疫球蛋白制剂抗巨细胞病毒中和抗体效价的筛查

目的筛查国内、外静注人免疫球蛋白(human intravenous immunoglobulin,IVIG)和静注巨细胞病毒人免疫球蛋白(human intravenous cytomegalovirus immunoglobulin,CMV-IVIG)制品抗CMV中和抗体效价。方法采用微量细胞病变法检测国内、外IVIG制品及CMV-IVIG抗CMV中和抗体效价,并进行比较。结果国外CMV-IVIG制品Cytogam(3 648 U/g IgG)和Cytotect(3 104 U/g IgG)抗CMV中和抗体效价分别是IVIG制品Privigen(1 048 U/g IgG)和Intratect(980 U/g IgG)的3.5和3.2倍;国内CMV-IVIG制品抗CMV中和抗体平均效价(7 195 U/g IgG)是国内13家企业19批IVIG制品(1 836 U/g IgG)的3.9倍;国内IVIG制品抗CMV中和抗体平均效价是国外IVIG制品Privigen和Intratect的1.8和1.9倍,国内CMV-IVIG制品抗CMV中和抗体平均效价是国外CMV-IVIG制品Cytogam和Cytotect的2.0和2.3倍。结论国内、外的CMV-IVIG制品抗CMV中和抗体效价均为相应IVIG制品3倍以上,采用微量细胞病变法筛查血浆用于制备CMV-IVIG具有可行性,为CMV相关疾病的被动免疫制剂的制备提供了实验依据。     

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG)双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)患者进行ALG的血药浓度监测(therapeutic drug monitoring,TDM)。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9~5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9~156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R2值为0.991 5,批内重复性CV值均10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%~107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1~3周及1~3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积(AOC)为(7.3±5.1)mg/(L·d)(95%CI),半衰期(t1/2)为(20.65±38.67)d(95%CI)。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。     

静注巨细胞病毒人免疫球蛋白原料血浆的筛选及制备

目的筛选获得高效价血浆并制备静注巨细胞病毒人免疫球蛋白(intravenous immunogloblin against cytomegalovirus,CMV-IVIG)。方法分别使用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法及微量细胞中和法对113份人血浆巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)IgG抗体进行结合效价及中和效价的检测,将两种方法获得的高效价血浆分别制备CMV-IVIG,采用常规微量细胞中和法检测抗CMV中和效价,并与IVIG中和效价进行比较,确定符合要求的免疫球蛋白成品,确立血浆筛选方法。结果对113份血浆进行效价检测,将结合效价≥20 IU/mL以及中和效价≥1∶32的血浆分别收集并制备5%CMV-IVIG,成品批号分别20190401和20190402;20190401批CMV-IVIG成品中和效价为498.28 IU/mL,20190402批CMV-IVIG成品中和效价为2 357.56 IU/mL,而5%IVIG中和效价为259.53 IU/mL。结论 ELISA法筛选获得的血浆制备的CMV...     

两种低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果比较

目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,以经典工艺(23～25℃灭活21 d)及新工艺[(37±0. 5)℃灭活9 h]低pH(pH为3. 8～4. 4)孵放法进行病毒灭活,分别检测不同灭活时间的病毒滴度,比较灭活效果。结果经典工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥5. 88 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 00 logTCID_(50)/0. 1 mL,且灭活的样品在敏感细胞盲传3代无细胞病变。新工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥4. 62 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 12 logTCID_(50)/0. 1 mL。结论两种低p H孵放法对指示病毒的灭活能力均符合国家标准,但经典工艺对两种指示病毒的灭活效果好且灭活彻底。     

人免疫球蛋白中甲肝抗体效价ELISA检测方法的建立及验证

目的建立人免疫球蛋白产品中甲肝抗体效价ELISA检测方法,并对该方法进行验证及初步应用,以期满足《中国药典》三部(2015版)对人免疫球蛋白产品中甲肝抗体效价的质量控制检测要求。方法将人免疫球蛋白甲肝抗体国际标准品(97/646)稀释后,采用建立的ELISA法检测甲肝抗体效价,分别验证方法的线性、准确性和精密度,试验均重复3次。应用建立的方法检测我国3家企业共13批人免疫球蛋白产品中的甲肝抗体效价。结果甲肝抗体效价在10~50 m IU/ml浓度范围内线性良好,相关系数为0.994 8;用建立的方法检测浓度为15、25、35 m IU/ml人免疫球蛋白甲肝抗体国际标准品的回收率在86.9%~104.4%之间,3次测定结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于10%。用建立的方法检测我国3家企业共13批人免疫球蛋白产品中的甲肝抗体效价,结果均低于《中国药典》三部(2015版)对甲肝抗体效价不低于100 IU/ml的新增要求。结论建立的ELISA方法快速、准确,可用于检测我国人免疫球蛋白产品的甲肝抗体效价。