量子点荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱检测番茄酱中罗丹明B的研究

目的:本研究根据抗原-抗体特异性识别反应和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的原理,构建一种基于量子点(Quantum dots,QDs)的新型荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱检测番茄酱中罗丹明B(Rhodamine B,RB)残留。方法:通过罗丹明B的单克隆抗体与溴化氢活化琼脂糖凝胶-4B偶联制备分析物抗体胶,设计单检测层的凝胶检测柱。基于抗原抗体的特异性结合反应,并利用罗丹明B和量子点之间的静电引力作用,构建一种新型的荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱。通过优化抗体添加量、量子点稀释倍数、孵育时间以及上样量等参数,最终实现番茄酱样品中罗丹明B的快速灵敏检测。结果:当1.0 g溴化氢活化的琼脂糖凝胶添加2.0 mg罗丹明B单克隆抗体,量子点溶液稀释3000倍,孵育时间控制在50 s,罗丹明B上样量为3.0 mL,该荧光猝灭免疫亲和凝胶检测柱针对罗丹明B的方法检测限(limit of detection,LOD)能够达到最小值1.0 μg/L。样品分析结果表明,该方法针对番茄酱样品中罗丹明B的检测限为5.0 μg/kg,并且与HPLC方法测定的结果表现出很好的一致性。结论:该方法操作简便,灵敏度高,检测时间短,结果易于判断,可以满足番茄酱中罗丹明B的现场快速检测的要求。     

辣椒制品中罗丹明B胶体金免疫层析法的建立

目的建立灵敏的胶体金免疫层析法快速检测辣椒制品中的罗丹明B (rhodamine B,RB)。方法用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并通过物理吸附标记罗丹明B单克隆抗体。在优化条件下,建立了基于竞争性抑制的罗丹明B的可视化胶体金免疫层析法。结果使用建立的方法检测辣椒制品中罗丹明B,定性检测限为5μg/kg,满足了国家安全限量要求;对实际样本的检测结果与液质联用检测结果一致。结论本研究建立的方法可以实现对辣椒制品中非法使用罗丹明B的灵敏、快速、高效的检测。     

同时检测伏马菌素B1和呕吐毒素的通用探针免疫层析卡研究

摘要 ：目的：研发同时检测伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)和呕吐毒素(deoxynivalenol, DON)的通用探针免疫层析卡。方法：通过标记物修饰在融合真菌毒素模拟表位的甘露糖结合蛋白(mannose binding protein, MBP)制备双功能抗原,引导针对标记物抗体的量子点微球通用探针,与检测线上的毒素抗体形成“夹心免疫复合物”,从而产生检测信号。 结果 标记物对MBP的反应摩尔比3.0/1.0,所制备的2种双功能抗原具有最优的双抗体结合活性。“毒素抗体/双功能抗原/通用探针”免疫复合物在2条检测线（T线）都形成荧光信号;只需调整2种毒素抗体的点阵浓度,FB1和DON的T线完全抑制的阈值统一优化为 预定的5.0 ng/mL。结论：基于双功能抗原引导的通用探针的免疫层析卡, 避免了分别制备单一特异性探针的繁琐,各T线检测阈值优化过程简便, 适合真菌毒素多残留检测免疫层析试剂的标准化制备。     

环丙沙星衍生物的制备及其抗体特异性研究

本文研究了环丙沙星(CPLX)羧基衍生物及其抗体的制备,并对该衍生物抗体的特异性进行了测定。将环丙沙星与3-溴丙酸反应,生成环丙沙星的羧基衍生物(CPLX-COOH),通过制备液相进行纯化,用红外光谱(IR)、电喷雾电离质谱(ESI-MS)与核磁共振法(NMR)进行鉴定;将环丙沙星衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别制备免疫抗原(CPLX-COOH-BSA)和包被抗原(CPLX-COOH-OVA),并用紫外光谱法进行鉴定。用免疫抗原免疫BALB/c小鼠,制备环丙沙星衍生物多克隆抗体。通过ELISA方阵滴定法,确定包被抗原的最佳包被浓度和抗体最佳稀释度,建立了CPLX-COOH间接竞争ELISA检测方法,其半抑制浓度IC50为228.56 ng/mL,最低检出限(LOD)为25.527 ng/mL,该抗体具有广谱特异性,可与多种氟喹诺酮类药物发生交叉反应,可进行氟喹诺酮类药物残留的多元检测。     

氯唑西林人工抗原的合成及其抗体的制备

为建立氯唑西林(cloxacillin,CLOX)残留的酶联免疫(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法,试验采用碳化二亚胺法,将氯唑西林偶联于载体蛋白牛清蛋白(Bovine albumin,BSA)和卵清蛋白(ovalbumin,OVA),制得免疫抗原(CLOX-BSA)和包被抗原(CLOX-OVA),并通过红外光谱扫描(infrared spectroscopy,IR)鉴定表明CLOX人工抗原合成成功。用免疫抗原免疫5只小鼠,制备CLOX多克隆抗体,通过间接ELISA法测定其对CLOX的效价及特异性。结果表明:用CLOX-BSA免疫制备的抗体效价达1∶64000以上,特异性较强,对CLOX的半抑制质量浓度IC50值为(5.64±0.03)ng/mL,IC15值为(22.43±0.02)ng/mL。说明试验得到了灵敏度高、特异性强及具有开发性的抗体,可为食品安全检验试剂盒的开发提供基础。     

黄曲霉毒素M_1酶联免疫吸附检测方法的建立

建立单抗-多抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)检测方法,为黄曲霉毒素M_1(AFM_1)的快速检测及研究奠定基础。采用有机合成法将AFM_1转化成半抗原AFM1肟化物(AFM1O),进一步与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清蛋白(OVA)偶联合成完全抗原AFM_1-KLH和AFM_1-OVA;以AFM_1-KLH为免疫抗原、AFM_1-OVA为筛选抗原,采用杂交瘤技术制备AFM1单克隆抗体,以AFM_1-KLH免疫新西兰大白兔制备兔多克隆抗体;以AFM_1-OVA为标准蛋白,制备的单克隆抗体为捕获抗体,纯化的兔多克隆抗体为检测抗体,商品化HRP标记的山羊抗兔Ig G作为检测二抗,采用方阵滴定法优化各步检测条件,得到最佳试验条件,建立AFM1夹心ELISA检测方法。标准曲线方程为y=0.004 4x+0.002 1(R2=0.992 2),检测范围0.5 ng/m L~128 ng/m L;最低检测限为0.5 ng/m L,批内和批间差均小于10%,重复性良好。     

米诺环素完全抗原的制备与表征

研究制备能有效用于米诺环素(MNC)残留检测的完全抗原。采用戊二醛合成法和重氮化合成法,将米诺环素与牛血清白蛋白(BSA)偶联,分别制备MNC 完全抗原MNC-BSA。经红外和紫外光谱扫描结果表明：两种物质已经偶联,两种完全抗原的平均偶联比分别为9.9 和5.9。采用戊二醛法合成的完全抗原免疫兔,检测抗血清效价为1:16000,表明合成的完全抗原可以作为免疫原用于制备抗体及检测时的包被原进行ELISA 检测。     

隐性孔雀石绿多克隆抗体的制备及鉴定

研究制备孔雀石绿(MG)代谢物隐性孔雀石绿(LMG)多克隆抗体进而间接鉴定鱼体中孔雀石绿的残留。首先利用化学方法合成含羧基的隐性孔雀石绿衍生物(CLMG),然后采用碳化二亚胺法偶联牛血清白蛋白(BSA)合成免疫抗原隐性孔雀石绿-BSA,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗隐性孔雀石绿多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附实验(iELISA)测定抗血清中抗隐性孔雀石绿多克隆抗体效价。结果表明：抗隐性孔雀石绿的抗体效价为1: 32000,可用于隐性孔雀石绿的免疫学检测。     

腊肠中罗丹明B 的高效液相色谱串联质谱检测方法

建立腊肠中罗丹明B(rhodamine B)残留量的高效液相色谱串联质谱检测方法。试样中残留的罗丹明B 用乙酸乙酯- 环己烷(1:1,V/V)提取,经凝胶色谱净化系统净化并浓缩后,用液相色谱- 质谱/ 质谱仪测定,外标峰面积法定量。罗丹明B 在5～100ng/mL 范围内呈良好的线性关系,3 个水平(5.0、10.0、25.0μg/kg)添加罗丹明B 的回收率为79.8%～110.3%,相对标准偏差(RSD)为10.0%～10.3%,检出限为5μg/kg。本方法简单、快速,适用于腊制品中残留罗丹明B 的检测。     

罗丹明B强吸附分子印迹材料的制备及吸附性能评价

目的制备一种对罗丹明B具有特异性和强吸附性能的分子印迹材料。方法采用沉淀聚合法合成罗丹明B分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymer,MIP),对分子印迹材料的动力学吸附、等温饱和吸附、选择性吸附及其对果汁样品中罗丹明B的吸附能力进行评价。结果以丙烯酰胺为功能单体制备的印迹聚合物的印迹效率(a=QMIP/QNIP)可达3。动力学吸附实验表明,MIP对罗丹明B的吸附可在15min内完成。等温吸附性能评价得出饱和吸附量约为170μg/mg。罗丹明B分子印迹聚合物对几种红色色素的吸附量的顺序为:罗丹明B诱惑红赤藓红苋菜红胭脂红。罗丹明B分子印迹聚合物对于添加到果汁中的罗丹明B可以很好地吸附而对其他成分的吸附较小。结论罗丹明B分子印迹聚合物对罗丹明B具有明显的特异性吸附性能,而且具有较强的吸附能力,是一种具有潜力的用于罗丹明B分析的固相萃取材料。     

固相萃取-高效液相色谱检测葡萄酒中罗丹明B

建立固相萃取富集净化,高效液相色谱紫外检测葡萄酒中禁用色素罗丹明B的方法。葡萄酒样品中的罗丹明B经C18固相萃取,40%乙醇溶液清洗净化,80%的甲醇溶液洗脱后,用高效液相色谱紫外检测器进行测定。结果表明：罗丹明B在1.0～10.0μg/mL范围呈现良好的线性关系,相关系数0.9924;在1.5～3.5μg/mL添加水平时,平均回收率为72.06%,相对标准偏差为2.87%(n=5);定量测出限为0.25μg/mL。表明该方法灵敏度高,重复性良好,操作简便快速,适用于葡萄酒中罗丹明B的检测。     

高效液相色谱法测定辣椒制品中的碱性橙和碱性玫瑰精含量

辣椒制品中的非食用色素工业染料经甲醇-水(7:3,V/V)超声振荡数次提取,高速离心,采用HPLC系统用20mmol/L醋酸铵溶液和甲醇梯度洗脱,采用二极管阵列检测器检测,用外标法峰面积定量。结果显示：4种工业染料在0.25～20.0μg/mL范围内的峰面积与质量浓度的线性关系良好,加标回收率为94.4%～101.9%。该方法简便易行,准确可靠。     

罗丹明B光谱探针测定面粉中过氧化苯甲酰

研究在磷酸氢二钠- 磷酸二氢钾缓冲溶液中(pH 6. 84),以罗丹明B 为光谱探针,分光光度法测定面粉中过氧化苯甲酰(BPO)的方法。结果表明,室温下,罗丹明B-BPO 体系在550nm 波长处有最大吸收,表观摩尔吸光系数(ε)为 1.1 × 104 L/mol·cm。BPO 含量在0.00～0.80mg/ml 范围内符合朗伯比尔定律。检出限为0.056mg/kg,加标回收率为97.5%～101.0% ,RSD 为1.46%～2.53%。该法简便易行,适用于基层单位测定面粉中微量BPO。     

罗丹明B分子印迹聚合物的合成及吸附性研究

以罗丹明B为模板分子,采用本体聚合法,以三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯为交联剂,乙腈为致孔剂,制备具有印迹位点的聚合物。通过振荡吸附实验确定了适宜的单体种类,并对致孔剂的用量进行优化。采用扫描电镜和红外分析仪对其微观形貌进行表征,并对聚合物进行平衡吸附和选择性研究。结果表明,印迹聚合物对目标分子具有较高的选择性和亲和性,在质量浓度为15 μg/mL时,达到平衡,饱和吸附量为370.49 μg/g。吸附动力学研究表明,时间为150 min时吸附达到平衡。     

微波萃取-凝胶渗透色谱-超快速液相色谱-串联质谱法检测腌猪肉中的罗丹明B残留

建立腌猪肉中罗丹明B残留的微波萃取凝胶净化色谱-超快速液相色谱-串联质谱（MAE-GPC-RRLC-MS/MS）的分析方法,采用多反应监测（MRM）扫描,正离子模式。样品经环己烷-乙酸乙酯微波萃取提取、凝胶净化色谱浓缩和净化后,以0.1%甲酸水-甲醇溶液为流动相,经Agilent Plus C18柱分离后进行RRLC-MS/MS多反应监测扫描模式分析检测。结果表明：腌猪肉中罗丹明B的定量限为0.25μg/kg。在1.0、3.0、5.0μg/kg添加水平下,上述罗丹明B的回收率为71.1%～102.0%,相对标准偏差为5.1%～17.1%。在1.0～100μg/L范围内,线性相关系数为0.9998。该方法具有快速、准确、特异性好等优点,可实现样本灵敏、准确的定性定量分析。     

高效液相色谱法测定辣椒粉中罗丹明B的测量不确定度评估

采用高效液相色谱法对辣椒粉中的罗丹明B残留量进行不确定度评定,评估方法的偏倚和精密度,并通过 对不确定度分量的分析计算,得出合成不确定度和扩展不确定度。评估结果表明,样品制备过程中凝胶渗透色谱净 化过程回收率的不确定度影响最大,所以控制凝胶渗透色谱净化过程对回收率的稳定性非常关键。该评估方法实用 性强,模型简单、易懂,具有较强的参考价值。     

基于近红外光谱的黄酒风格判别方法

提出了利用近红外透射光谱进行黄酒风格快速鉴别的方法。采用了标准化、标准正态变量变换、一阶导数 等多种预处理方法,建立了传统型、清爽型和特型3 种风格的绍兴黄酒偏最小二乘判别分析模型。结果表明,传统 型、清爽型和特型校正集和预测集的识别率均为100%,成功地实现了黄酒风格的判别。本研究为实现不同风格黄 酒快速、无损定性判别提供了新方法。     

毛细管电泳-电化学发光分离检测辣椒粉中罗丹明B

建立一种以三联吡啶钌（Ru(bpy)32＋）为发光体系的毛细管电泳-电化学发光检测系统,并将其应用于分离和测定辣椒粉中的罗丹明B含量。考察检测电压、Ru(bpy)32＋溶液浓度、磷酸盐缓冲液的pH值和浓度、分离电压、进样电压与进样时间等因素对分离检测的影响。结果表明：在检测电压1.14 V、Ru(bpy)32＋溶液浓度5 mmol/L、磷酸盐缓冲溶液浓度20 mmol/L（pH 8.0）、进样时间10 s、进样电压10 kV、分离电压15 kV条件下,罗丹明B在6 min中得到分离。方法的线性范围为5×10－7～5×10－5 mol/L,检出限为1×10－7 mol/L（RSN=3）。对1.0×10－5 mol/L的罗丹明B标准溶液连续测定5 次,迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为3.2%和1.5%。该方法可成功应用于辣椒粉中罗丹明B含量的测定。