Nachweis und Charakterisierung von Clostridium perfringens mittels real-time-PCR

Clostridium perfringens is a Gram-positive, anaerobic bacterium. The strains are classified into five types (type A to E), depending on the ability to produce alpha-, beta-, epsiloon and iota-toxin, but food-poisonings are mostly caused by C. perfringens type A isolates. Ingestion of contaminated food is followed by gastrointestinal disease, when enzyme-resistant C. perfringens enterotoxins (CpE) are set free during sporulation. In most cases the bacterium has to grow up to more than 10⁶ cfu/g food to cause a gastrointestinal disease (BVET, 2005; BfR, 2005). Cultural methods, normally used for the detection of C. perfringens, are not able to differentiate isolates into the five different toxin types. This is the reason, why the detection of C. perfringens in food under the present legal regulations can only used as an indication for inadequate production hygiene or a toxin-infection with contaminated food as source. For the detection of the toxin genes to differentiate C. perfringens in five different toxin types, three duplex real-time-PCR assays for the routine diagnostic were developed and validated. The assays can be used for quick detection and easy classification of C. perfringens isolates and as a rapid screening-system in suspected cases of C. perfringens food-poisonings.

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Zuszammenfassung:  Clostridium perfringens geh?rt zur Gruppe der gram-positiven, anaerob bzw. aerotolerant wachsenden Bakterien. Abh?ngig von der F?higkeit der einzelnen C. perfringens St?mme, alpha-, beta-, epsilon und iota-Toxin zu bilden, erfolgt eine Einteilung in die Typen A bis E, wobei C. perfringens Typ A für den überwiegenden Teil der lebensmittelassoziierten menschlichen Erkrankungen verantwortlich ist. Ursache solcher Toxin-Infektionen ist das erst im Darm im Rahmen der Sporulation der mit den Lebensmitteln aufgenommenen vegetativen Zellen gebildete Enterotoxin (CpE). In der Regel muss sich der Erreger im Lebensmittel auf mehr als 10⁶ KbE/g Lebensmittel vermehren, damit beim Konsumenten eine Erkrankung ausgel?st wird (BVET, 2005; BfR, 2005). Da die derzeit vorhandenen kulturellen Nachweisverfahren keine M?glichkeit bieten, die gewonnenen Isolate einem bestimmten Toxintyp zuzuordnen, kann der Nachweis von C. perfringens in einem Lebensmittel nach gültiger Rechtslage lediglich als ein Hinweis auf eine mangelhafte Produktions- oder Verarbeitungtechnologie oder auf das Vorliegen einer lebensmittelbedingten Toxin-Infektion gewertet werden. Zum Nachweis der Toxingene, die eine Einteilung von C. perfringens in die fünf verschiedene Toxintypen erm?glichen, wurden drei Duplex-real-time-PCR-Assays etabliert und die Einsatzm?glichkeiten in der Routinediagnostik getestet. Die Systeme sollen für einen schnellen Nachweis und eine rasche Differenzierung von C. perfringens sowie als Screening-System bei Verdacht auf eine lebensmittelbedingte Erkrankung genutzt werden.

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Eingegangen: 30. Januar 2007     

Der Nachweis von Zucker in Macis und in Zimt

Ohne Zusammenfassung     

Der Nachweis von Barium und Strontium in der Wasseranalyse

Zusammenfassung Der Nachweis von geringen Barium- und Strontiummengen in den natürlichen Wässern erfordert eine Abtrennung von den störenden Begleitstoffen und eine Anreicherung der Erdalkali-Ionen. Hierfür wird die Anwendung von Kationenaustauschern auf Kunstharzbasis in einer sog. Kippsäule beschrieben.Nach Eluierung mit 10%iger Salzsäure wird eingedampft bzw. eine Erdalkalicarbonatfällung vorgenommen. Die Erdalkalien in der Lösung können nunmehr papierehromatographisch entwickelt und getrennt, mit Rhodizonsäure sichtbar gemacht und im Vergleich mit Standardlösungen mengenmäßig geschätzt werden.Für die unermüdliche Mitarbeit möchte ich an dieser Stelle auch FrauHannelore Helming danken.     

Der Nachweis von Magnesium- und Zinkstearat in kosmetischen Mitteln

Ohne Zusammenfassung     

Nachweis und Charakterisierung von Clostridium perfringens mittels real-time-PCR

Clostridium perfringens is a Gram-positive, anaerobic bacterium. The strains are classified into five types (type A to E), depending on the ability to produce alpha-, beta-, epsiloon and iota-toxin, but food-poisonings are mostly caused by C. perfringens type A isolates. Ingestion of contaminated food is followed by gastrointestinal disease, when enzyme-resistant C. perfringens enterotoxins (CpE) are set free during sporulation. In most cases the bacterium has to grow up to more than 10⁶ cfu/g food to cause a gastrointestinal disease (BVET, 2005; BfR, 2005). Cultural methods, normally used for the detection of C. perfringens, are not able to differentiate isolates into the five different toxin types. This is the reason, why the detection of C. perfringens in food under the present legal regulations can only used as an indication for inadequate production hygiene or a toxin-infection with contaminated food as source. For the detection of the toxin genes to differentiate C. perfringens in five different toxin types, three duplex real-time-PCR assays for the routine diagnostic were developed and validated. The assays can be used for quick detection and easy classification of C. perfringens isolates and as a rapid screening-system in suspected cases of C. perfringens food-poisonings.     

Nachweis von Chloramphenicol mittels elektrochemischer Detektion

Zusammenfassung Die einfachen Bedingungen einer reduktiven elektrochemischen Detektion werden beschrieben, mit der es möglich ist, Chloramphenicol (CAP)-Gehalte bis zu 0,5 g/kg in Forellen zu bestimmen.

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Summary The simple conditions of a reductive electrochemical detection are described, which allows to determine the content of chloramphenicol (CAP) in trouts down to 0.5 g/kg.

     

Nachweis von verdorbenem Fleisch mittels Alkohols

Ohne ZusammenfassungMitteilung aus der Frauenklinik der Universität Halle a. S. (Direktor: Geh. Med.-Rat Prof. Sellheim.)     

Der Nachweis von Kakaokeimen in Kakaoerzeugnissen

Ohne Zusammenfassungbedeutet mit Abbildungen     

Nachweis von Estern aus Fruchts?uren und Zuckern in Fruchtsaftkonzentraten mittels GC-MS

Zusammenfassung Nativ vorkommende Ester aus Fruchtsäuren und Zuckern wurden von uns in Gemüse (17 Arten, 53 Sorten) und Obst (Äpfel, Süßkirschen, Himbeeren als Beispiele) nicht gefunden, dagegen konnten derartige Ester in Fruchtsaftkonzentraten nachgewiesen werden. Mittels Capillar-GC an selbsthergestellten Glassäulen (SE-30) gelang die Bestimmung einzelner definierter Ester, nachdem Vergleichsubstanzen durch Erhitzen konzentrierter wäßriger Lösungen von Fruchtsäure und Zucker hergestellt worden waren.

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Detection of esters of fruit acids and sugars in fruit juice concentrates by GC-MS

Summary Native esters of fruit acids and sugars were not found in vegetables (17 species, 53 varieties) and fruits (apples, cherries, raspberries for example) whereas these esters could be detected in fruit juice concentrates. By means of gaschromatography with self-made glass-capillaries (SE-30) certain particular esters could be determined after reference substances had been prepared by heating concentrated aqueous solutions of fruit acid and sugar.

     

Der chemische Nachweis von Pferdefleisch

Ohne Zusammenfassung     

Der Nachweis von Kartoffelzusatz im Kriegsbrot

Ohne ZusammenfassungMitteilung aus der Kgl. Technischen Hochschule Breslau, Lehrstuhl für Botanik.Unter diesem Titel erschien eine am 18. Februar eingereichte, in der Nummer vom 28. Februar 1915 veröffentlichte Notiz des Verf's in der Schlesischen Zeitung.     

Chemische Bestimmung von Bindegewebe in Fleisch und seinen Zubereitungen

Zusammenfassung Der Gehalt an Oxyprolin läßt sich in Fleisch and Fleischerzeugnissen exakt bestimmen und unter Anwendung eines geeigneten Faktors zur Berechnung des Gesamtgehaltes an Bindegewebe-Eiweiß verwenden. In ähnlicher Form ist das gleiche mit Glykokoll möglich, jedoch wird der Oxyprolinbestimmung der Vorzug gegeben. Nicolaus Antonacopoulos: Vorschläge zur quantitativen Bestimmung des Bindegewebes in Fleisch and seinen Zubereitungen. Inaug.-piss. Univ. München 1957.     

Nachweis von Clostridium botulinum Typ A, B, E und F mittels real-time-PCR

Clostridium botulinum is a Gram-positive, anaerobic, spore-performing bacterium with the ability to produce under certain conditions a protein with a characteristical neurotoxicity. Intoxications with C. botulinum toxin belong to the rare occuring food-poisonings; the mortality, however, is very high. C. botulinum produce seven different toxin types (type A to G), human intoxications are currently described to caused by toxin type A, B, E and F. C. botulinum is a strictly anaerobic growing bacterium, so the risk for the consumer’s health is mainly due to non-commercially produced food cans. A special form of botulism is the „infant botulism“. In contrast to the botulism of adults, where the disease is caused through toxin-containing food, spores of C. botulinum can sporulate and produce toxin in the intestines of an infant. The source of infant botulism can be honey, because it contains as a natural product C. botulinum spores. Because of the difficult and time-consuming cultural detection of C. botulinum, PCR methods to screen for the toxin genes A, B, E and F, which are relevant in the human medicine, have been used increasingly during the last years. In this presentation two real-time-PCR assays for C. botulinum, which can be applied in the routine laboratory, will be shown.

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Zusammenfassung: Clostridium botulinum z?hlt zu den anaeroben sporenbildenden Bakterien, die unter bestimmten Bedingungen in der Lage sind, sich in Lebensmitteln zu vermehren und ein Protein mit charakteristischer Neurotoxizit?t zu bilden. Intoxikationen mit Clostridium botulinum-Toxin geh?ren zu den seltenen lebensmittelassoziierten Intoxikationen; die Mortalit?t bei einer Erkrankung ist allerdings sehr hoch. C. botulinum produziert sieben unterschiedliche Toxintypen (Typ A-G), wobei für menschliche Erkrankungsf?lle bisher die Toxintypen A, B, E und F beschrieben sind. Da es sich bei den genannten Keimen um strikt anaerob wachsende Bakterien handelt, stellen vor allem nicht kommerziell hergestellte Konserven, wie z. B. Kesselkonserven, ein Risiko für den Verbraucher dar. Als besondere Form des Botulismus wird der so genannte „S?uglingsbotulismus“ beschrieben. Im Gegensatz zur der Erkrankung, die bei Erwachsenen auftritt und die durch die Aufnahme des bereits toxinhaltigen Lebensmittels verursacht wird, k?nnen Sporen von C. botulinum im Darm von S?uglingen auskeimen und dort Toxine bilden. Ursache für den S?uglingsbotulismus ist h?ufig Honig, der als Naturprodukt C. botulinum-Sporen enthalten kann. Da der kulturelle Nachweis von C. botulinum aufwendig und eine endgültige Differenzierung schwierig ist, wird im Bereich der Routinediagnostik seit einigen Jahren verst?rkt mit PCR-Nachweisverfahren gearbeitet, die ein schnelles Screening auf das Vorhandensein der vier in der Humanmedizin relevanten Toxingene A, B, E und F erm?glichen. In dieser Arbeit werden zwei real-time-PCR-Systeme vorgestellt, die im Bereich der Routinediagnostik einsetzbar sind.

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Eingegangen: 19. Januar 2007