蔬菜中有机磷农药残留的两种酶抑制快速检测方法的比较研究

本实验比较了快速测定蔬菜中有机磷农残的两种酶抑制法即胆碱酯酶抑制法和植物酯酶抑制法，通过正交实验优化了两种酶抑制法的测定条件。对实际蔬菜样品的磷农残测定结果表明：这两种酶抑制快速测定方法均可用于蔬菜中有机磷农残的测定，其加标回收率都达到85％以上。但植物酯酶法测量精密度较好(3％以下)，酶源易得，提取、保存方便，在有机磷的快速测定中有更广泛的应用价值。     

酶抑制法检测蔬菜中有机磷农药残留

对酶抑制法快速检测有机磷农药残留进行研究.以鲫鱼脑、肝脏和肌肉乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)为检测用酶,对5种蔬菜中有机磷农药残留进行检测.根据AChE酶活抑制率和农药抑制方程,判断农药残留情况.当AChE酶活抑制率大于35%时,可判断该样品中农药残留超标.结果表明,试验中5种蔬菜样品农药残留均未超标.除豆角外,该方法的回收率均在80%～120%之间,表明该方法的检测结果准确可靠.     

酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的研究现状及展望

概述了酶抑制法快速检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留技术的研究现状、检测原理、应用情况和存在的问题。酶抑制法具有检测时间短、成本低、操作简便等特点,是目前我国控制农药残留的一种有效的初筛方法。     

驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测.结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷＞乐果＞敌敌畏＞敌百虫 乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15 min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min 用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1％.     

驴血清胆碱酯酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留

采用驴血清丁酰胆碱酯酶作为酶源,对不同的有机磷农药的检测条件和方法进行了研究,同时通过酶抑制法对锦州地区的部分蔬菜进行了农药残留检测。结果表明:乐果、敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷对驴血清丁酰胆碱酯酶(BChE)的IC50分别为0.094、0.179、0.124、0.0078mg/mL,驴血清BChE对这4种有机磷农药灵敏度的大小顺序为:马拉硫磷>乐果>敌敌畏>敌百虫。乐果、敌敌畏对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为15min;敌百虫、马拉硫磷对丁酰胆碱酯酶的最佳抑制时间为20min。用酶抑制法检测3个农贸市场的蔬菜样品,发现韭菜有2例检测结果超标,油菜有1例检测结果超标,尖椒有2例检测结果超标;蔬菜样品合格率为86.1%。      

鸭血清胆碱酯酶抑制法检测果蔬农药残留的研究

对农药残留快速检测方法——胆碱酯酶抑制法进行了研究。以二次盐析后的鸭血清丁酰胆碱酯酶(BChE)为农药残留的检测用酶,碘化硫代丁酰胆碱(BTChI)为底物,5-5'-二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)为显色剂,410nm比色测定吸光值变化,计算胆碱酯酶的抑制率,从而推算农药残留情况。当抑制率大于35%时,表明农药含量超标。检测过程只需20～40min,可同时检测多个样品,与气相色谱检测结果的符合率大于85%。     

高通量酶抑制法快速测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留

目的 建立一种室温下高通量酶抑制法快速测定蔬菜中农药残留的方法。方法 从酶抑制法检测原理出发,以阳性蔬菜样品为研究对象,通过对提取剂、提取时间及反应体系的选择和优化,确立酶反应体系。采用该方法检测市售蔬菜样品,对筛选出阳性样品进行定量检测复核,验证方法有效性。结果 蔬菜样品用乙腈作为提取液,采用超声提取,上清液氮吹后加入磷酸盐缓冲溶液(pH 8.0)作为最终样液,农药提取效率最高,且不会对酶抑制法反应体系造成影响。采用优化后的高通量农药速测方法,以室温(25±5)℃下酶抑制率≥40%作为阳性判定标准,对筛选出的734个阳性样品进行仪器定量分析复核,检出符合率达到92.1%。结论 该方法有效提升了农药提取效率和检测效率,可有效用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测。     

基于酶抑制法农药残留检测仪的校准方法研究

目的研究一种适用于胆碱酯酶试剂盒比色法原理的农药残留检测仪的校准方法。方法经过对农药残留检测仪的波长稳定性及示值误差,透射比示值误差及重复性、通道差异、灵敏度等性能指标的实验和研究,建立该特定原理的农药残留检测仪的校准方法。结果起草农药残留检测仪校准规范,提出了仪器的校准项目与技术指标,确定了校准用的仪器设备,设计了完备的校准方法,使农药残留检测仪的量值溯源准确、可靠。结论制订国家统一的计量校准规范,完善农药残留检测仪的量值溯源体系,为统一相关量值发挥重要的作用。     

浅析酶抑制法在农药残留检测中的应用及酶源的研究进展

农药被认为是现代农业的重要组成部分,其在维持高效的农业生产力方面发挥着重要作用,但农药的滥用,也增加了农产品中农药残留超标的风险,从而对人体健康造成危害。本文分析了农药残留检测常用的检测方法,重点阐述了酶抑制法检测原理、检测方法和不同酶源研究进展,旨在为今后农药残留检测技术相关研究提供参考。     

荧光方法在酶抑制农药残留快速检测中的研究进展

农药残留污染是农产品质量安全的首要关注因子,基于大型仪器的实验室检测模式难以匹配检测时效性需求。基于乙酰胆碱酯酶活性抑制的农药残留快速检测方法(酶抑制法)具有操作便携、检测速度快等优势,已成为农产品质量安全的常用筛查手段。囿于常规可见光比色法性能,传统的酶抑制法在检测灵敏度方面受到制约,这限制了其进一步的发展。荧光方法利用特征的激发/发射光谱,可以有效降低非特异性干扰,因此将荧光信号作为数据采集技术是改善酶抑制法灵敏度缺陷的有效手段。本文重点介绍了荧光方法在酶抑制农药残留快速检测中的信号响应模式,包括单酶-荧光材料响应、多酶级联响应和酶活性靶向小分子荧光探针响应,还分别总结了不同方法的目标物响应机制、检测效果及应用现状,最后对酶抑制农药残留快速检测的发展方向进行了展望。     

ASE萃取/GPC-SPE净化/GC-MS法测定茶叶中的有机磷残留

建立加速溶剂萃取-凝胶渗透色谱/固相萃取净化-气质法测定茶叶中的有机磷残留的分析方法。样品用丙酮-二氯甲烷(1∶1)作为溶剂,加速溶剂提取,提取液经过凝胶渗透色谱除去大分子杂质后,再经过Carb/NH2柱净化后供GC-FPD和GC-MS分析。方法检出限为为0.001mg/kg~0.0075mg/kg,在加标水平为0.050mg/kg时,回收率为76.3%~94.6%,相对标准偏差为2.4%~8.1%。方法具有自动化程度高、萃取效率高、净化效果好、精密度好,分析快速等优点,适用于茶叶中有机磷残留的日常检测工作。     

吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立

通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行间接酶联免疫吸附和阻断酶联免疫吸附,初步探明抗吡虫啉多克隆抗体(IMI-pAb)的免疫学特性。在此基础上,采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合技术进行了免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过阳性杂交瘤细胞筛选和克隆化培养,获得3C8杂交瘤细胞株。结果显示:该3C8杂交瘤细胞株具有高效价、高亲和力和强特异性的特点;通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和最佳抗体稀释倍数,建立基于吡虫啉单克隆抗体(IMI-mAb)的IMI残留阻断酶联免疫吸附,其线性范围为7.48×10-6～3.24×10-4mg/mL(R2=0.9928),最低检测限为8.00×10-6mg/mL。     

酶抑制—比色法在农药残留快速检测中的研究进展

概述酶抑制- 比色法在农药残留快速检测中的检测原理、对不同种酶源的选择与保存、酶抑制法检测条件及改进方法等研究进展,并指出酶抑制- 比色法在使用中存在的问题和未来的发展趋势。     

酶抑制分光光度法与表面增强拉曼散射在农药检测中的进展

实现有机磷农药残留的快速检测,对农产品质量安全和人民生命健康具有重要意义。本文针对有机磷农药快速检测中的酶抑制分光光度法和表面增强拉曼光谱技术(SERS)分别就研究进展、应用情况以及面临的问题进行综述,旨在为后续有机磷农药快速检测的研究人员提供技术与应用参考。酶抑制分光光度法可对样品中有机磷农药残留总量做粗略估计,主要应用于大量样品进行快速筛选,但在检测过程中,存在酶活性一致性差、易受检测对象干扰以及检测环境严格等缺点。SERS技术具有指纹特性、检测速度快、检测成本低以及检测精度高等优点,可对样品中的有机磷农药残留进行快速定性定量分析,具有巨大的应用潜力。当然,作为新兴分析手段,在重复与稳定性上仍面临一些问题。     

酶联免疫吸附法快速检测黄曲霉毒素

结合间接竞争反应机制,运用酶联免疫吸附技术(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),从抗原(antigen,Ag)包被时间、体系反应温度、酶标二抗作用时间、显色时间等主要因素开展快速检测黄曲霉毒素改进方法的研究。研究结果表明适宜的优化条件为:采用Ag包被20 h、反应温度24℃左右、酶标二抗作用时间30 min、底物显色时间15min。通过对饲料等11种样本的检测得出:半抑制浓度IC50<0.1μg/L,添加回收率在67%~116%,灵敏度达到0.03μg/L,线性系数>0.99,板内变异小于5%。检测试验结果良好,表明该改进方法具有可行性。     

储粮中黄曲霉毒素B_1快速检测技术的研究

运用高效液相色谱方法检测储粮中黄曲霉毒素B1的含量,检测样品中黄曲霉毒素B1的含量为0.004 3 mg/kg,样品的RSD为0.033,回收率为97.41%,提取液是乙腈∶水=84∶16,流动相是甲醇∶乙腈∶水混合溶液=15∶13∶72,线性回归方程是y=188.97x+4.96相关系数是R2=0.999 8,检测器激发波长=460 nm,衍生法利用光化学衍生池,进化方法利用免疫亲和柱。高效液相色谱法测定黄曲霉毒素B1是一种操作简单、准确度好、灵敏度高的检测方法。     

胶体金免疫层析法检测食用肉中的氨基脲

制备特异性胶体金免疫层析试纸条,检测肉类食品中氨基脲的残留。用活性酯法将氨基脲(SEM)衍生物CPSEM交联到牛血清白蛋白(BSA)上制备完全抗原CPSEM-BSA,将硫酸铵沉淀法纯化的抗CPSEM单克隆抗体标记到柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,通过优化C/T线及金标抗体工作浓度,制备检测氨基脲的胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性进行测定。制备的试纸条检测5min后即可用肉眼观察到结果;对SEM的最低检测限达0.72ng/ml;除与呋喃西林有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应;该试纸条对猪肉中添加的SEM检测结果与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果呈现了很好的相关性;试纸条在室温下保存7周后不会失效。通过制备针对SEM的试纸条所建立的胶体金免疫层析法(ICA),快速简便、灵敏度高、特异性强、准确性和稳定性好,基本能达到商用检测要求。     

Elispot assay检测牛奶中庆大霉素

为了建立快速检测牛奶中庆大霉素的Elispot assay,采用制备GM免疫抗原获得抗GM多克隆抗体。将检测抗原点阵在PVDF膜上,通过检测抗原和样品中GM竞争结合抗GM多克隆抗体,酶标结合物催化底物显色,根据颜色的有无及深浅判读结果,从而建立了检测牛奶中GM的Elispot assay。该方法的检测阈值为10 ng/mL,检测时间为40 min,可对样品实现半定量检测。该方法制备的试纸条于4℃密封保存90 d仍可用于检测;与多种结构类似物未见交叉反应;其结果与酶联免疫方法一致。     

动物性食品中磺胺二甲嘧啶快速检测方法

根据竞争抑制免疫层析原理,应用胶体金免疫层析技术进行磺胺二甲嘧啶在鸡肉和鲫鱼中的残留检测研究。磺胺二甲嘧啶半抗原-OVA和羊抗兔二抗分别作为检测带(T线)和质控带(C线)包被在硝酸纤维素膜上,金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,制成免疫层析快速检测试纸条。所建立的检测体系对标准溶液的灵敏度达到1μg/L。成功检测了鸡肉和鲫鱼中的磺胺二甲嘧啶残留。该方法灵敏度高,所用试剂无毒、无污染,无需借助仪器,样品前处理简便,快速,检测过程可在10 min内完成,可以作为现场快速检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶残留的有效手段。     

亚临界水萃取法检测粮谷中24种残留农药

根据亚临界水可以定量萃取基质中绝大部分化合物的特点,借助加速溶剂萃取仪(ASE)将亚临界水萃取与C18填料固相吸附联用,通过萃取温度和萃取时间的优化,建立了芸豆、小米等粮谷基质中异稻瘟净等24种农药的亚临界水萃取-气相色谱/串联质谱检测法。方法的检测限为0.05 mg/kg,当添加量为0.05 mg/kg~0.10 mg/kg时,24种农药的回收率为70.45%~104.8%,RSD小于12%。