啤酒废酵母酶解液作为有机氮源厌氧发酵制备丁二酸的研究

确定了以啤酒废酵母为原料,酵母酶解液中α-氨基氮含量为考察指标的蜗牛酶酶解破壁条件;并以啤酒废酵母酶解液为有机氮源,厌氧发酵制备丁二酸。结果表明蜗牛酶破壁效果最好,其最佳反应条件为蜗牛酶用量10mg/g干物质,pH6.5,40℃水浴,反应16h,酵母酶解液中α-氨基氮含量为0.504g/100mL;当发酵培养基中葡萄糖浓度为50g/L,啤酒废酵母酶解液作为有机氮源时,菌株Actinobacillus succinogenes NJ113可以产34.6g/L丁二酸,收率69%,和以酵母膏为有机氮源厌氧发酵制备丁二酸(丁二酸浓度为35.1g/L,收率70.2%)比较,产量相近,成本较低。     

不同方法提取酿酒酵母总RNA的比较

选择试剂盒法、总核糖核酸（RNA）提取试剂（Trizol）法、热酚法3种方法提取酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）总RNA,根据提取效果,选用酵母破壁酶辅助破壁并进行不同菌体量优化,通过对总RNA进行浓度和纯度的分析,比较不同方法对酿酒酵母总RNA提取的影响。结果表明,试剂盒法和Trizol法不适合提取酿酒酵母总RNA,但通过添加酵母破壁酶,可以提高提取效果。热酚法适合提取酿酒酵母总RNA,但添加酵母破壁酶反而会导致RNA降解。因此,使用热酚法提取酿酒酵母总RNA是较为有效且简便的方法。     

超声波辅助酶法分离提取葡萄酒泥酵母SOD工艺条件的优化

以葡萄酒泥酵母为试材,超氧化物歧化酶（SOD）比活力为指标,在超声功率、超声时间、蜗牛酶质量浓 度、酶解pH值和酶解温度等单因素试验基础上,采用正交试验优化超声波辅助蜗牛酶法提取SOD的工艺条件。结果 表明：提取工艺因素对SOD比活力影响大小顺序为超声时间＞蜗牛酶质量浓度＞超声功率＞酶解pH值＞酶解温度, 1 g湿酵母悬浮于5 mL 0.2 mol/L的磷酸盐缓冲液,其提取SOD最佳工艺条件为超声功率400W、超声时间12 min、 2.0 mg/100 mL蜗牛酶液1 mL、pH 6.6、温度37 ℃,在此条件下,分离提取得到的SOD比活力达192.27 U/mg。结果表 明超声波辅助酶法在葡萄酒泥酵母SOD的提取中具有较高的应用价值。     

啤酒废酵母蛋白质水解的研究

优选得到酵母破壁的所用酶－CEREMIX，并对影响其破壁提取酵母水解的几个主要因素进行研究。通过正交分析优化后得到反应条件为：反应温度45℃，反应时间32h,pH自然（6.5-7.0)，加酶量20u/g干酵母。在此实验条件下，总氨收率可以达到44.56mg/g干酵母。     

红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养破壁提取虾青素的研究

环状芽孢杆菌能以红法夫酵母细胞壁为唯一碳源进行发酵产胞壁溶解酶,将红法夫酵母与环状芽孢杆菌混合培养,可使环状芽孢杆菌在生长的同时产酶并逐渐溶解酵母细胞壁,从而提取虾青素。通过对红法夫酵母与环状芽孢杆菌两阶段混合培养条件的优化,总结出红法夫酵母产虾青素及酶法破壁提取的适宜工艺为:培养基初始糖浓度为30g/L,环状芽孢杆菌的最佳接种时间为红法夫酵母培养60～72h,接种量为10mL/L(1010个细胞/mL),接种后最适培养温度为30℃,pH为6.5,总发酵时间为120h,在此条件下,红法夫酵母虾青素产量可达到8960.2μg/L,虾青素最终提取率可达到96.8%。     

对酵母细胞酶法破壁的研究

研究了在重组酵母测评系统中，重组酵母细胞破壁条件的优化问题。通过酶法破壁酵母细胞得知，对于0．75mL酵母液来说，最佳反应时间为4h，最适反应温度为40℃，最佳酶量为10mg。同时，蜗牛酶破壁效果明显好于溶菌酶。     

氨解法在啤酒酵母中提取RNA的应用与研究

研究了用氨解法从啤酒酵母中提取 RNA 的工艺,并得出了最佳工艺条件: 酵母浓度 10%,氨浓度 1.0%,三氯乙酸的浓度为 2%,破壁 50min,提取 40min。     

氨解法在啤酒酵母中提取RNA的应用与研究

研究了用氨解法从啤酒酵母中提取RNA的工艺，并得出了最佳工艺条件：酵母浓度10％，氨浓度1．0％，三氯乙酸的浓度为2％，破壁50min，提取40min。     

碱法破壁-酶法提取葡萄酒废酵母细胞壁多糖的工艺研究

以工业发酵产生的葡萄酒废酵母泥为材料,过筛法除去葡萄果皮、果籽等杂质后,以细胞破壁液蛋白质含量、多糖提取率为评价指标,通过单因素试验和正交试验对碱法破壁-酶法提取细胞壁多糖工艺进行优化,以期提高多糖提取率。结果表明,最佳工艺条件为细胞破壁碱（KOH）处理温度为60 ℃,碱（KOH）质量浓度为70 g/L,处理时间为1.5 h,80 kHz超声辅助;酶法提取多糖最佳工艺为酶作用温度50 ℃,酶解时间1.5 h,中性蛋白酶添加量0.3%,初始pH值7.0。在此优化条件下,葡萄酒废酵母多糖提取率为21.08%。     

不同破壁方法提取酵母总RNA的比较

选择液氮碾磨、反复冻融、超声波、加玻璃珠漩涡振荡和蜗牛酶酶解5种方法破碎酵母菌细胞壁,再使用Trizol法提取酵母菌总RNA,通过对总RNA进行质量浓度和纯度分析,比较不同破壁方法对酵母菌总RNA提取的影响。结果表明：在使用Trizol法提取酵母菌总RNA的实验中,反复冻融和液氮碾磨是较为有效且简便的酵母菌细胞壁破碎方法。     

浓香型白酒酒醅中总RNA提取方法评价

为探寻我国特有的复杂微生态环境——浓香型酒醅样品总RNA提取方法,本实验建立了一种改良的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)-苯酚法,并从提取成本及耗时、RNA质量浓度和纯度、电泳结果、反转录效果及高通量测序分析5 个方面,比较其与试剂盒法、Trizol法、十六烷基三甲基溴化铵(hex...     

ε-聚赖氨酸与纳他霉素复配剂抑菌性能的研究

研究了ε-聚赖氨酸(ε-PL)与纳他霉素复配剂的抑菌活性.以典型菌株大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和热带假丝酵母为研究对象,采用二倍稀释法确定ε-PL和纳他霉素的最小抑菌浓度,96孔板法确定ε-PL与纳他霉素对酵母菌最佳复配抑菌浓度,通过测定胞内物质渗漏来反映酵母细胞膜的完整性.结果表明,二者抑制酿酒酵母的最佳复配浓度为ε-PL 100μg/mL、纳他霉素4μg/mL,抑制热带假丝酵母的最佳复配浓度为ε-PL 400μg/mL、纳他霉素2μg/mL,且两种复配剂均能抑制大部分细菌.通过测定抑菌剂作用于酿酒酵母在260nm、280nm的吸光度以及电导率的变化,可知复配剂对酿酒酵母细胞膜的破坏性最强.总之,ε-PL与纳他霉素复配使用,能够减少用量,拓宽抑菌范围,能更好的抑制食品中腐败微生物的生长.     

牛鼻软骨粉中硫酸软骨素的碱法提取及光谱分析

以牛鼻软骨为原料酶法制备软骨粉,采用稀碱液浸提和乙醇沉淀的方法提取硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate,ChS),通过单因素和正交试验对碱解工艺进行优化,确定的最佳条件是:料水比1:6,NaOH浓度5%,温度40℃,浸提时间6h,在此条件下,提取率达到12.58%,葡萄糖醛酸含量为32.44%,硫酸软骨素纯度达82%。紫外光谱分析:样品在196nm处有多糖的吸收峰,未见蛋白质(280nm)与核酸(260nm)的特征吸收峰;红外光谱分析发现为典型的硫酸软骨素A吸收峰。     

一种RNA提取试剂盒--TRIZOL的使用方法初探

以酿酒酵母为原料，利用TRIZOL试剂快速提取法，得到的总RNA不完整，只有5s rRNA一条条带，经过对该试剂盒的改进后提取的总RNA呈现28s rRNA，18s rRNA和5s rRNA三条清晰的条带，很少有降解，其A260／A280值可达1．946，A260／A230值为2．070，具有很高的纯度。     

复合酶辅助超声提取西藏芜菁总黄酮工艺优化及抗氧化活性分析

以西藏芜菁为原料,研究复合酶辅助超声法提取芜菁中总黄酮的最佳工艺条件及其抗氧化活性。以总黄酮得率为考察指标,通过Plackett-Burman实验筛选出对得率影响最显著的三个因素:复合酶配比、料液比及超声功率。随后通过响应面法优化芜菁总黄酮的提取工艺,同时通过DPPH自由基和ABTS+自由基清除实验评估了芜菁总黄酮的抗氧化活性。结果表明,复合酶辅助超声法提取芜菁总黄酮的最佳工艺条件为:复合酶配比为1.9:1 g/g,复合酶用量为2%,料液比为1:38 g/mL,乙醇浓度为75%,酶解温度为50℃,酶解时间为55 min,超声功率为204 W,超声时间为60 min,在此条件下总黄酮得率达到最大值1.458%。抗氧化实验结果表明芜菁总黄酮对DPPH自由基清除的IC₅₀为185.6 μg/mL,对ABTS+自由基清除的IC₅₀为164.3 μg/mL,说明芜菁总黄酮具有体外抗氧化活性。综上,本研究得到了复合酶辅助超声法提取芜菁总黄酮的最佳工艺条件,且提取得到的芜菁总黄酮具有较强的抗氧化活性,为西藏芜菁的开发及利用提供了一定的科学依据。     

粗壮脉纹孢菌原生质体的制备、再生及转化的条件

为建立原生质体介导的粗壮脉纹孢菌遗传转化系统,本研究主要考察了复合酶解液、菌龄及酶解时间对粗壮脉纹胞菌原生质体生成及再生的影响。结果表明,粗壮脉纹胞菌孢子悬液接种在马铃薯葡萄糖琼脂（potatodextrose agar,PDA）液体培养基中,30 ℃条件下摇床培养10 h的菌丝,采用0.5 g/100 mL蜗牛酶＋0.5 g/100 mL溶壁酶＋1 g/100 mL纤维素酶的复合酶解液、30 ℃条件下酶解10 h,粗壮脉纹胞菌原生质体生成及再生最为适合。在此条件下,原生质体生成数可达4.53×106 个,38#再生培养基中的再生数可达1.41×106 个,再生率达31.71%,聚乙二醇介导PAKHB载体转化NC原生质体,每微克质粒可获得8 个以上的转化子。     

Examination of DNA extract from kernels and processed foods using silica-base resin

A rapid and simple DNA extraction method is needed to detect genetically modified recombinant DNA in soybean kernels and processed foods. However, since various kernels and processed foods differ greatly in form, a uniform DNA extraction method has proved elusive. The silica-base resin DNA extraction method does not use any organic solvent, and the operation is simple and the cost per extraction is low, although the frequency of its use is very low and few domestic reports exist. We therefore studied suitable conditions for a silica-base resin method. We also developed the method to get more pure DNA from soybean kernels. The silica-base resin method was found to be adequate for extracting DNA from various processed foods for PCR amplification with endogenous gene primers. In the case of DNA extraction from soybean kernels, pure DNA could be efficiently extracted after pre-heating the soybean suspension in TNE buffer. The extracted DNA showed higher ratios of absorption at 260 nm/280 nm and 260 nm/230 nm than those for samples obtained with previous methods. Moreover, our observations suggested that the extraction time could be reduced to within 30 min for processed foods such as tofu.