葡萄灰霉病生防菌株的筛选及其拮抗机理初探

以新疆哈密瓜、蟠桃及红枣中分离出的59株内生细菌为出发菌株,采用离体实验和活体实验,从中筛选出11株对葡萄灰霉菌具有较好抑制作用的菌株;经低温作用、农药耐受性及致病菌广谱性等复筛实验,从红枣中获得1株性能优良的目标菌株T2,该菌在0 ℃条件下对葡萄灰霉菌的抑菌率可达58.43%,农药耐受性达68.2%～98.4%,对致病菌具有广谱抗性,其中桃褐腐病菌和草莓灰霉菌的病原菌菌落直径均小于30 mm,葡萄炭疽菌病原菌菌落直径小于50 mm。经过形态、生理生化和16S rDNA同源性分析,确定菌株T2为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,该菌主要依靠菌体本身和重寄生作用对葡萄灰霉菌发挥拮抗作用。     

一株海洋拮抗菌的筛选与鉴定

通过平板分离、摇瓶发酵,从样品中分离到1株对枯草芽孢杆菌、藤黄八叠球菌、大肠杆菌等指示菌具有较强拮抗作用的菌株HY4,通过菌落形态、镜检、生理生化试验和对菌株16S rRNA基因序列遗传分析对菌株进行鉴定,发现该菌株跟芽孢杆菌属（Bacillus）的多数菌株序列有99%的相似性,将该菌株命名为芽孢杆菌HY4。当培养时间为48 h时,菌株的生物量达到最大值,OD600nm为2.49,此时菌株对枯草芽孢杆菌和藤黄八叠球菌的抑菌活性也达到最高,透明圈直径分别为1.38 cm和1.13 cm,当培养至60 h时,菌株对大肠杆菌的抑菌活性也达到最大,透明圈直径为1.13 cm,之后随着培养时间的延长,抑菌活性反而逐渐降低。     

酿酒黄水对枯草芽孢杆菌的抑菌机制研究

本论文以枯草芽孢杆菌为例,研究白酒发酵副产物黄水的抑菌机制。通过描绘细菌生长曲线,扫描电镜观察菌体表面形态,电导率实验研究实验菌细胞膜通透性,SDS-PAGE凝胶电泳观察菌内蛋白变化,DAPI荧光染色观察细菌核酸含量变化进行研究。结果证明:酿酒黄水处理的枯草芽孢杆菌生长曲线未出现明显对数生长,扫描电镜观察菌体表面粗糙,电导率实验证明酿酒黄水不能改变细胞膜通透性,SDS-PAGE凝胶电泳分析表明酿酒黄水可抑制菌内蛋白质合成,DAPI荧光染色结果表明酿酒黄水作用9 h后,枯草芽孢杆菌总DNA量减少30.39%,作用3 h后,RNA总量减少39.64%。因此,酿酒黄水抑菌机制主要通过抑制枯草芽孢杆菌菌体内蛋白质和核酸的合成实现的。      

致病性尖孢镰刀拮抗菌的筛选与鉴定

该研究从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）拮抗效果最好的拮抗菌株,采用形态观 察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,并绘制该菌株生长曲线、考察其培养液中的蛋白类及脂肽类物质的抑菌效 果。 结果表明,从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌拮抗效果最好的拮抗菌株,编号为P9,其抑菌圈直径达到20 mm 左右。 经鉴定,拮抗菌P9为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;生长曲线结果表明,拮抗菌P9在第9小时生长速率达到最大;抑菌物 质提取实验表明,拮抗菌P9能分泌具有抑菌作用的蛋白类物质及脂肽类物质。     

宁夏玉泉营地区酿酒葡萄酵母菌的分离筛选及分子鉴定

为进一步探究宁夏玉泉营地区酿酒葡萄酵母菌的多样性,更好地开发利用本土葡萄酒产区酵母菌资源,从宁夏玉泉营地区的葡萄园土壤、葡萄果实表皮以及葡萄自然发酵过程中进行酵母菌的分离筛选,对得到的22株酵母菌株运用WL营养琼脂培养基进行初步聚类分类,并采用26S rDNA D1/D2区序列分析法进行菌株鉴定。结果表明,供试菌株共鉴定为6种,分别为大隐球酵母（Cryptococcus magnus）、美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）、葡萄酒有孢汉生酵母（Hanseniaspora vineae）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、克鲁维毕赤酵母（Pichia kluyveri）、东方伊萨酵母（Issatchenkia orientalis）。     

番茄灰霉病拮抗细菌Bacillus-1的筛选和鉴定

为了寻找番茄灰霉病的高效生防菌,从感染灰霉病的番茄大田土壤中,筛选出一株对灰霉病有较强拮抗能力的细菌Bacillus-1,对番茄体外和体内实验发现,Bacillus-1对番茄灰霉病发病率的抑制率达到83%.经过形态特征、生理生化特性鉴定和16S rRNA基因序列分析,初步确定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).该高效拮抗菌的分离为番茄灰霉病的生物防治及其防治机理的研究奠定了基础.     

金黄色葡萄球菌拮抗菌株的筛选及鉴定

从甘肃中部干旱生境土壤中分离筛选到一株对食源性致病菌金黄色葡萄球菌具有抑制作用的拮抗菌,对其发酵液抑菌最低浓度稀释梯度及抑菌谱进行了测定,并通过形态学、生理生化及16S rDNA分子生物学方法鉴定了其种属.结果表明,该金黄色葡萄球菌拮抗菌株还对大肠杆菌、植物酸杆菌和表皮葡萄球菌具有抑制作用,其发酵液对金黄色葡萄球菌抑菌最低浓度稀释梯度为10-6,经鉴定,该拮抗菌为产碱杆菌属菌株Alcaligenes sp..     

金黄色葡萄球菌拮抗菌株的筛选及鉴定

从甘肃中部干旱生境土壤中分离筛选到一株对食源性致病菌金黄色葡萄球菌具有抑制作用的拮抗菌,对其发酵液抑菌最低浓度稀释梯度及抑菌谱进行了测定,并通过形态学、生理生化及16SrDNA分子生物学方法鉴定了其种属。结果表明,该金黄色葡萄球菌拮抗菌株还对大肠杆菌、植物酸杆菌和表皮葡萄球菌具有抑制作用,其发酵液对金黄色葡萄球菌抑菌最低浓度稀释梯度为10^-6,经鉴定,该拮抗菌为产碱杆菌属菌株Alcaligenes sp.。      

一株章鱼肠道共生菌的筛选鉴定及抑菌谱研究

采用梯度稀释法从章鱼肠道筛选分离出一株具有抗菌作用的放线菌菌株D-8,通过该菌株的培养特征、生理生化特性、16S rDNA的Blast检索及系统发育分析表明,该菌株与链霉菌属具有99%以上的同源性,鉴定该菌株为链霉菌。同时对菌株D-8的发酵产物进行抗细菌、真菌活性检测。结果表明,该菌株对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及部分真菌都有抗菌活性,其活性化合物有待进一步研究。      

纳豆芽孢益生杆菌的筛选鉴定及耐受性、抑菌能力的研究

根据纳豆芽孢杆菌的生物学特性,从不同纳豆食品中筛选出具有较高纤溶活性的菌株4株,分别就它们对温度、p H、抗生素的耐受性以及对病原菌的抑制能力和对有益菌的共生能力进行研究,结果表明:KH-1和KH-9具有良好的对温度、p H、抗生素耐受性及对病原菌的强抑制能力和对有益菌的共生能力。     

葡萄酒MLF高耐受性优良乳酸菌的筛选与鉴定

以活菌数为指标,以L450为对照菌株,考察了从自然发酵葡萄酒中分离的14株乳酸菌对酒精度、SO2浓度、p H值的耐受能力,筛选出高耐受性优良菌株。通过菌落形态、菌体形态、生理生化特征和16S r DNA分子测序进行优良菌株鉴定。结果表明:菌株G23与L42综合耐受能力最强且优于对照菌株L450,二者被鉴定为植物乳杆菌,可作为葡萄酒MLF高耐受性优良乳酸菌。     

烤烟霉变病原菌鉴定及其生防菌筛选

为明确云南省大理州烟叶烘烤变黄期叶柄和部分叶片霉变的病原菌,依据柯赫氏法则,采用组织分离法分离病原菌,经室内和烤房内验证致病性,结合形态学和多基因序列分析鉴定病原物种类,运用平板拮抗法和活体生测法筛选生防菌。结果表明,分离物的形态学与根霉属（Rhizopus sp.）真菌相似,其ITS序列与少根根霉菌（Rhizopus arrhizus.,异名Rhizopus oryzae）模式菌株CBS 112.07T序列一致性大于99%;基于内转录间隔区（ITS）、肌动蛋白（ACT）和翻译延伸因子1-α(TEF)的多基因序列系统发育分析也表明,病原菌与少根根霉菌亲缘关系最近。综合形态学和多基因序列分析结果,确定烤烟霉变病病原菌为少根根霉菌。通过平板对峙法筛选获得5株抑菌能力较强的拮抗菌,其中芽孢杆菌（Bacillus spp.）Z002和05-1205在烤房内的防治效果均在70%以上。     

冬枣采后病害拮抗菌的筛选和鉴定

从采集的土样中分离筛选11 株对冬枣细交链格孢病菌、多隔镰孢霉和美澳核果褐腐串珠霉具有较好抑制作用的拮抗菌。通过平板对峙生长法测抑菌半径。结果表明：其中B26 的抑菌效果最显著,对细交链格孢的平均抑菌圈半径为15.8mm,抑制率达78.8%,对冬枣多隔镰孢霉和美澳核果褐腐串珠霉的平均抑菌圈半径分别为14.3mm 和12.8mm,抑制率分别达71.3% 和63.8%。通过在PDA 生长的形态学观察、生理生化实验以及PCR产物测序结果综合分析,初步鉴定B26 为枯草芽孢杆菌。     

抗耐药性大肠杆菌乳酸菌的筛选及抑菌机制

筛选对耐药性大肠杆菌(Escherichia coli)拮抗活性较强的乳酸菌,并探究其作用机制.采用牛津杯打孔法筛选对耐药性E.coli具有抑制活性的乳酸菌,并通过生理生化实验和16S rDNA序列对其进行鉴定.通过测定阿奇霉素、乳酸菌粗提物、乳酸菌粗提物和阿奇霉素共同作用对耐药性E.coli电导率、胞外蛋白、紫外吸收...     

葡萄酒中甘油含量的测定及其在品质鉴别中的应用

使用Chem Well全自动酶联免疫生化分析仪,采用甘油激酶试剂盒,对葡萄酒中的甘油含量进行测定,实验表明,甘油含量在2.0~16.7 g/L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.9989;对不同的干红和干白葡萄酒,加标回收率为94.2%~118%;精密度和重复性(n=10)RSD%均小于5%。应用该法对部分进口和国产葡萄酒(包括采样的国产劣质葡萄酒)中的甘油含量进行了测定,通过甘油含量及甘油与酒精度的比值(简称甘酒比)对葡萄酒的品质进行了初步鉴别,效果良好。     

葡萄酒浑浊沉淀机理与鉴别

从微生物,物理化学和外在原因分析了葡萄酒浑浊沉淀的机理,提出了葡萄酒浑浊沉淀鉴别的感官方法,显微镜方法,微生物方法和特征试验方法。     

海洋湿地环境中拮抗水产品腐败菌的乳酸菌筛选与鉴定

从渤海锦州海岸湿地植物根系中筛选对腐败希瓦氏菌、铜绿假单胞菌和副溶血弧菌具有较强抑制作用的乳酸菌,为研发一种海产品防腐保鲜生物制剂奠定基础。应用牛津杯打孔法从碱蓬草、芦苇根部筛选拮抗性乳酸菌菌株,应用生长曲线分析菌株拮抗作用变化,通过pH、蛋白酶、温度、NaCl浓度等因素,分析乳酸菌无细胞上清液(CFS)的拮抗性能。从碱蓬草根部获得1株拮抗能力较强的乳酸菌株JP-12,初步判定其抑菌活性物质存在于CFS中,生长曲线结果显示其抑菌活性在培养28 h时达到峰值。CFS经不同蛋白酶处理后,抑菌活性均有所下降。对胃蛋白酶最为敏感,活性丧失率为24.21%;CFS经40~121 ℃等不同温度处理30 min,其抑菌活性基本不变;在pH3.0~4.5范围内抑菌活性保持稳定;3.0%~3.5% NaCl条件下其抑菌活性较强,抑菌直径达到18.46、18.15 mm。经生理生化实验和16S rRNA菌株JP-12被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。本文为挖掘拮抗性乳酸菌的资源及在水产品防腐保鲜中的应用提供一条新的途径。     

灰霉病菌拮抗放线菌的筛选鉴定及对草莓的防腐保鲜效果

为丰富草莓采后病害拮抗菌资源,以草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea）为指示菌,采用琼脂块法对草莓根际土壤分离的78 株放线菌进行筛选,并测定拮抗效果最强的菌株T3-5的拮抗谱。根据形态学特征、生理生化特性及16S rDNA序列进行鉴定,并初步研究其无菌发酵液对贮藏草莓腐烂发生及果实品质的影响。结果表明：草莓根际土壤分离的菌株T3-5对草莓灰霉病菌具有较强拮抗作用,拮抗圈直径为22.5 mm;对3 株常见细菌和6 株果蔬采后病原真菌均具有不同程度的抑制效果。该菌株经鉴定为黄暗色链霉菌（Streptomyces xanthophaeus）。菌株无菌发酵液能够显著降低贮藏草莓腐烂率（P＜0.05）,延缓果实硬度、可溶性固形物、可滴定酸及VC的降低。研究表明拮抗链霉菌T3-5对贮藏草莓具有良好的防腐保鲜作用,在草莓采后贮藏和生物保鲜中具有潜在的应用价值。