胰岛素治疗糖尿病不良反应的药学分析

对元宝枫（Acer truncatum Bunge）种仁多糖进行提取纯化,探究其理化性质和降糖活性。采用水提醇沉法提取元宝枫种仁多糖,并通过响应面法优化元宝枫种仁多糖提取工艺。通过Sevage法脱蛋白和柱层析对元宝枫种仁多糖进行纯化,通过红外光谱、热重分析及离子色谱法对其进行单糖组成和结构表征,并进一步通过建立肝癌细胞胰岛素抵抗模型（IR-HepG2）,考察纯化后元宝枫种仁多糖体外降糖活性。结果表明,在提取1次、液固比为30:1 mL/g、提取温度为80 ℃、提取时间为3.5 h条件下,多糖（PATM）得率为18.17%。经Sevage法脱蛋白,DEAE-DE纤维素52层析柱和SephadexG-100凝胶层析柱分离纯化,得到纯化多糖（PATM-3-1）。PATM-3-1具有多糖组分红外光谱特征峰,其单糖组成为D-半乳糖醛酸、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖醛酸、L-岩藻糖、D-核糖和D-氨基葡萄糖。体外降糖活性实验的结果表明,PATM-3-1具有较强的α-淀粉酶抑制活性,能显著（P<0.05）提高胰岛素诱导的HepG2细胞中葡萄糖消耗量、糖原含量、己糖激酶、丙酮酸激酶含量,展现出优异的降糖活性。本研究为元宝枫种仁多糖的开发和应用提供参考和数据支撑。

     

茶叶多糖的提取纯化及其单糖组分的鉴定

研究了用水煮醇沉法提取茶叶多糖,用savage法除蛋白,苯酚-硫酸法测多糖含量,通过正交试验确定茶叶多糖的最佳提取条件;粗多糖经Sephadex-100柱层析纯化,得到精制茶叶多糖;薄层层析法鉴定单糖组分。结果表明:最佳提取条件为95℃,料液比1∶20(g:mL),提取时间2h,提取3次,茶叶多糖含量为35.92mg/g。茶叶多糖中含有2种不同的多糖,水解得到单糖D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、L-阿拉伯糖等。     

橘皮多糖微波提取工艺优化及分离纯化研究

利用响应面法优化微波辅助提取橘皮多糖工艺。在单因素实验的基础上,选择3因素3水平的Box-Behnken Design(BBD)实验设计考察微波功率、提取温度和提取时间对多糖提取得率的影响。得到最佳提取条件为:微波功率704 W、提取温度52℃、提取时间41 min。在此条件下橘皮粗多糖的提取得率为(19.86±0.23)%,与预测得率基本一致。粗多糖用纤维素DEAE-52和葡聚糖G-75凝胶进行了分离纯化,得到主要纯化多糖组分的平均分子量和纯度用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)进行了测定。分离纯化得到的主要多糖组分(TPPs-Ⅱ)为平均分子量17.81 ku的均一多糖组分。说明响应面优化得到的微波辅助提取工艺参数准确、可靠。     

栉江珧粗多糖提取工艺优化、组成分析及其抗氧化活性研究

在单因素实验的基础上,采用响应面法优化栉江珧粗多糖的水浸提取工艺,并对优化后提取得到的多糖的组成及其抗氧化活性进行分析。结果表明:栉江珧粗多糖提取的最佳工艺条件为提取温度94 ℃、提取时间215 min、液固比34:1 (mL/g),在此条件下粗多糖得率为18.37%。栉江珧粗多糖中多糖含量为94.39%、蛋白质含量为2.8%、糖醛酸含量为0.63%、硫酸基含量为0.08%;采用红外光谱扫描和气相色谱分析粗多糖的结构和单糖组成,结果表明该多糖由葡萄糖组成。此外该粗多糖的清除超氧自由基和羟基自由基以及金属螯合力的半抑制浓度分别为0.599、1.01和0.29 mg/mL。研究结果可以为栉江珧粗多糖活性研究和功能性产品的开发提供理论基础。     

不同提取方法对小麦麸皮多糖化学组分及免疫调节活性的影响

目的:以小麦麸皮超微粉为实验材料,分别用酸法、碱法、水提和酶法提取获得多糖,研究不同提取方法对小麦麸皮多糖得率、提取后麸皮残渣微观形态、糖醛酸含量、硫酸根含量、蛋白质含量、单糖组成及免疫调节活性的影响。方法:采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,硫酸-间羟基苯酚法测定糖醛酸含量,BaCl₂-明胶法测定硫酸根含量,气相色谱法测定单糖组分;采用MTT检测细胞毒性,Griess法测定细胞上清液中NO含量,Western Blot法检测细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达。结果:碱提法获得的粗多糖得率最高,为31.73%,测定提取的粗多糖中多糖含量为57.79%;小麦麸皮多糖中糖醛酸和硫酸根的含量依次为:碱提法>酶提法>酸提法>水提法;不同提取方法的小麦麸皮多糖组分中所含单糖的种类为阿拉伯糖、木聚糖及葡萄糖;MTT法检测四种小麦麸皮多糖对细胞均无毒性,其中水提多糖能促进RAW264.7细胞分泌NO因子并能促进细胞诱导型一氧化氮合成酶和环氧合酶-2蛋白的表达。结论:四种不同提取方法所得到的小麦麸皮多糖的得率、化学组成成分及生物活性各不相同,采用传统水提法工艺提取多糖更利于维持多糖的免疫调节活性。     

响应面法优化山豆根多糖提取工艺及其分级醇沉组分的抗氧化活性

为研究山豆根多糖的提取工艺及其抗氧化性,采用热水浸提法提取山豆根粗多糖(SGP),研究提取温度、提取时间、液料比对多糖得率的影响,在单因素实验基础上采用响应面法对山豆根粗多糖的提取工艺进行条件优化。将提取得到的粗多糖分级醇沉,并分别采用清除DPPH、ABTS⁺自由基及还原能力的方法对各醇沉组分多糖的抗氧化活性进行评估。结果表明,山豆根粗多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度83℃,提取时间133 min,液料比30:1 mL/g。在此工艺条件下,山豆根粗多糖得率为3.98%。粗多糖经分级醇沉共获得SGP50、SGP70、SGP80和SGP90 4个组分,且SGP90表现出最强的抗氧化能力,尤其是在清除DPPH自由基方面,显著高于其它组分(P<0.05)。     

厚壳贻贝多糖的提取工艺优化及体外生物活性研究

以抗氧化和抗肿瘤活性为指导优化提取工艺,分别采用热水提取,两步联合酶解法（木瓜蛋白酶和胰蛋白酶）从厚壳贻贝中提取和分离纯化具有生物活性的贻贝多糖,对其进行基本理化性质分析和DEAE-Cellulose 52 柱层析分离纯化并进行体外抗氧化、抗肿瘤生物活性研究。通过对热水提取法,单一酶提法和联合酶提取法得到的贻贝多糖粗品进行理化性质分析和活性筛选,发现联合酶解提取得到的贻贝粗多糖在得率、纯度和生物活性上均优于其他方法提取得到的粗多糖,其提取粗多糖的得率为23.69%。联合酶提粗多糖体外抗氧化研究表明其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和脂质过氧化物清除的半最大效应浓度（concentration for 50% of maximal effect,EC50）分别为3.75、5.01 mg/mL和2.41 mg/mL;对体外前列腺癌DU-145细胞48 h,IC50为2.93 mg/mL。通过分离纯化后对各组分的得率和组成分析表明：联合酶提可提高贻贝多糖类糖胺聚糖（MT3）的含量,并达到13.5%,单糖组成主要为Man、GlcN、GlcUA、Gal和Fuc,分子质量约为18 kD。和其他组分相比,MT3 组分表现出良好的体外抗肿瘤活性,对体外前列腺癌DU-145细胞48 h,IC50 为2.71 mg/mL。通过活性追踪和工艺优化结果表明,热水提取后酶解工艺不仅可以降解蛋白提高多糖的纯度,而且还可以显著提高贻贝多糖中类糖胺聚糖的含量,而贻贝类糖胺聚糖是贻贝多糖的主要活性组分,具有良好的抗肿瘤活性。     

甘草多糖超声辅助提取工艺优化及分子表征

优化超声辅助提取甘草多糖的条件,并对甘草多糖的分子量和结构进行了研究。单因素实验确定最佳提取条件为:设定超声功率500 W时,液料比为20∶1(m L/g),超声时间60 min,温度60℃。应用GC/MS对甘草多糖进行单糖组分分析,得出人工与野生甘草多糖的单糖组分主要是甘露糖和葡萄糖,另外还含有阿拉伯糖、核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸,说明人工与野生甘草多糖均为酸性多糖。最后利用Sepharose CL-6B层析柱对甘草多糖进行分离纯化,测得人工甘草两个多糖组分相对分子量分别为212 ku和25.1 ku,野生甘草多糖两个组分的相对分子量分别为34.1 ku和0.1 ku。本研究为甘草多糖的生物活性研究和应用提供了理论基础。     

低共熔溶剂提取的黄精多糖性质分析

为研究低共熔溶剂提取条件对黄精多糖性质及体外抗氧化活性的影响,以鸡头黄精为原料,对不同条件下低共熔溶剂提取得到的黄精多糖进行相对分子量、单糖组成等基本性质和体外抗氧化活性的测定。结果显示,相比于传统水提醇沉法,采用低共熔溶剂法提取黄精多糖,70 ℃时得率为18%,提高了36%,所得多糖的相对分子量变小且半乳糖含量升高;100 ℃提取的多糖相对分子量更小,且主要成分为葡萄糖。羟基自由基与DPPH自由基清除率、总抗氧化能力测定结果均表明,采用低共熔熔剂在70 ℃条件下提取的黄精多糖体外抗氧化能力明显高于传统水提醇沉法和低共熔溶剂法在100 ℃条件下提取的黄精多糖。当浓度为3.0 mg/mL时,采用低共熔熔剂在70 ℃提取的黄精多糖总抗氧化能力为4.5 U/mL,是水提多糖的4.3倍,是100 ℃条件提取黄精多糖的7.4倍。低共熔溶剂对黄精多糖具有降低分子量、提高抗氧化性等效果,研究结果可以为低共熔溶剂在多糖提取方面的应用提供参考。     

响应面法优化中性蛋白酶提取苦竹花多糖及多糖性质分析

目的:采用响应面法优化中性蛋白酶辅助提取苦竹花多糖的最优条件,并对提取得到的粗多糖进行分离纯化、理化性质及体外抗氧化性测定。方法:在单因素试验基础上,考察提取时间、酶添加量、提取温度对苦竹花粗多糖得率的影响。利用响应面试验建立数学模型,确定最佳提取条件。苦竹花粗多糖经分离纯化,获取2个组分,分别命名为SBH-1和SBH-2,其中以SBH-1为主要组分。通过高效凝胶渗透色谱和红外光谱对SBH-1组分进行单糖组成、分子质量及初步的结构研究。通过与VC对比,研究苦竹花粗多糖SBH-1的体外抗氧化活性,即1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率及抗脂质过氧化能力的测定。结果:在中性蛋白酶添加量0.83%,提取温度46.68℃,提取时间115.95 min条件下,粗多糖得率为7.63%。经检测苦竹花粗多糖SBH-1组分分子质量为18.3 k D,主要由甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)3种单糖组成比例为1.3∶2.3∶1.2。SBH-1对DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除EC_(50)分别为2.03 mg/mL和1.038 mg/mL。结论:采用中性蛋白酶辅助提取得到的苦竹花粗多糖简单易行,纯化得到的中性杂多糖SBH-1具有很好的活性,为进一步研究和开发提供理论基础。     

虾夷扇贝柱粗多糖不同提取工艺优化及其化学性质与抗氧化活性的比较

目的 优化虾夷扇贝柱粗多糖2种提取工艺,并对比分析2种提取方式对扇贝柱粗多糖的化学性质及抗氧化活性的影响。方法 以提取率为指标,在单因素实验基础上,通过响应面分析法对扇贝柱粗多糖热水浸提法及酶解提取法进行优化,并比较2种粗多糖红外光谱、单糖组成及抗氧化活性。结果 热水浸提法的最优工艺为:料液比1:3(g/mL)、浸提时间6h、浸提温度90℃;酶解法最优工艺为:木瓜蛋白酶添加量0.3%(鲜重)、pH 7.0、酶解温度55℃、酶解时间5 h、料液比1:3 (g/mL)。2种粗多糖组成单糖相同,但各单糖物质的量之比有所不同;红外光谱结果表明,2种粗多糖结构相似,主要由α-D型吡喃糖构成,且含有糖醛酸。抗氧化结果表明,不同提取方式得到的扇贝柱粗多糖具有不同的抗氧化活性,酶解法提取的粗多糖具有较高的抗氧化活性。结论 本研究确定了虾夷扇贝柱粗多糖2种提取方式的最优条件,酶解法粗多糖提取率较高且具有较好抗氧化活性,为后续研究提供了理论依据。     

辣木叶多糖的分离纯化及其体外降糖活性研究

目的研究辣木叶多糖的制备、单糖组成以及体外降糖活性。方法采用水提醇沉、Sevage法、大孔树脂-阴阳离子交换树脂联用技术得到较高纯度辣木叶粗多糖,再进一步通过二乙氨基乙基纤维素和葡聚糖凝胶柱层析分离得到2个主要多糖组分(MOs-2-a、MOs-2-b),并通过水解衍生化对其单糖组成进行分析。此外,采用HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,以细胞葡萄糖消耗量为指标,考察辣木叶多糖的降糖作用。结果本文采用的制备工艺可以得到较高纯度的辣木叶粗多糖(纯度为73.10%),辣木叶多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖组成,其中各单糖摩尔比为0.49:3.65:0.63:1.27。与模型组相比,辣木叶多糖组分MOs-2-a、MOs-2-b均能显著增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量(P0.05)。结论辣木叶多糖MOs-2-a、MOs-2-b具有良好的降糖效果,本文可以为辣木叶多糖作为功能食品发展的提供科学依据。     

单环刺螠体壁多糖的分离纯化、理化性质及抗脂质过氧化活性

为研究和开发单环刺螠中活性多糖成分,采用酶法提取和色谱分离技术,从单环刺螠的体壁中提取分离多糖组分,采用化学和仪器分析方法对其单糖组成、分子质量等理化性质进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其进行初步的活性评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠多糖（unicinctus polysaccharide,UP）得率为5.3%。通过离子交换柱层析分离纯化后主要得到两个组分UP-1和UP-2。UP-1是主要由葡萄糖（Glc）组成的高聚葡聚糖,分子质量340 kD,而UP-2为组成复杂的类糖胺聚糖,分子质量约为7.9 kD,主要含有葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、氨基葡萄糖（GlcN）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的甘露糖（Man）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成Man、GlcN、GalN、Glc、Gal、Fuc物质的量比例为1.0∶1.47∶0.64∶6.49∶2.5∶3.0。和其他海洋动物来源类糖胺聚糖类似,UP-2还含有少量的硫酸基,含量为7.4%。对UP-1和UP-2进行初步体外抗氧化活性研究表明,类糖胺聚糖UP-2具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为5.0 mg/mL。     

超声波辅助杂多酸提取竹叶多糖工艺优化及其生物活性研究

以竹叶为原料,采用磷钨酸耦合超声波提取竹叶多糖,通过单因素实验结合响应面试验优化竹叶多糖的提取工艺。利用傅里叶红外光谱(FT-IR)、电子扫描显微镜(SEM)和高效阴离子色谱(HPAE),对竹叶多糖结构、单糖组成进行了初步的表征和检测,并研究了竹叶多糖的体外相关生物活性。结果表明,提取竹叶多糖最优条件为超声温度80℃、提取时间2 h、料液比1:20 g/mL、磷钨酸质量分数4.50%、超声功率300 W,该条件下竹叶多糖的得率为9.89%。竹叶多糖是一种具有α-型吡喃糖苷键结构的杂多糖,由L-岩藻糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-半乳糖和D-木糖组成。竹叶多糖对还原力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH)均具有一定的抑制作用,且体外抗氧化活性的能力与竹叶多糖的质量浓度呈现正相关。在0.25~4.00 mg/mL范围内,随着竹叶多糖质量浓度的增加,其对癌细胞HepG-2的增殖抑制率逐渐增大。当竹叶多糖质量浓度为4.0 mg/mL时,对肿瘤细胞HepG-2增殖的抑制率达到半抑制浓度,说明竹叶多糖具有一定的抗肿瘤活性。     

新型铜绿菇多糖的制取、结构性质及其抗氧化活性的研究

以铜绿菇子实体为原料,结合单因素实验和响应面法首次建立其多糖的水提醇沉工艺,对于所获得粗提物再利用DEAE-纤维素-52和Sephadex G-150分离纯化得到两种铜绿菇多糖,并采用高效凝胶过滤色谱法和单糖柱前衍生法对其进行相对分子量和单糖组成的测定,通过红外扫描和刚果红实验研究其结构性质,利用扫描电镜和原子力显微镜观察其形貌,最后对其抗氧化活性进行初探。研究结果表明,铜绿菇多糖在提取温度为84℃,提取时间2.6 h,料液比1:23 g/mL的最佳提取条件下,得率达4.30%;纯化后所获得两种新型多糖的相对分子量分别为18.05 kDa和2398.83 kDa,具有典型的多糖特征吸收峰,其中一种多糖具有三股螺旋结构。Crude RLP、RLP-1-1和RLP-2-1的DPPH自由基清除率分别为41.19%、38.97%和39.27%,而它们的金属离子螯合率分别为29.83%、27.81%和51.96%,铜绿菇多糖表现出一定的抗氧化活性。     

平菇粗多糖的提取及活性研究

目的比较不同提取平菇粗多糖方法的优劣并对其粗多糖抑菌特性进行检测。方法采取水提法、超声波法、微波法、纤维素酶法提取平菇粗多糖,利用细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌)和真菌(毛霉、根霉、青霉、曲霉)作为试验菌株,采用打孔法,对不同提取方法提取的平菇粗多糖的抑菌特性进行研究。结果纤维素酶法提取的平菇粗多糖的多糖含量为57.50%、多糖得率为1.538%,均明显优于其他3种方法。在抑菌试验中,平菇粗多糖浓度为100 mg/m L时,水提法、超声波法、纤维素酶法提取的平菇粗多糖对毛霉的生长具有抑制作用。结论纤维素酶法提取平菇粗多糖效果较好,不同方法提取的平菇粗多糖在高浓度时均对毛霉有微弱抑制作用。     

白芍多糖提取工艺优化、分子特性分析及其对巨噬细胞的增殖作用

本文采用水提醇沉法提取白芍多糖,通过正交试验确定白芍多糖提取工艺参数并分析其化学组成,使用高效尺寸排阻色谱-紫外检测器-多角度激光光散射仪-示差折光检测器联机系统检测多糖分子量,利用气相色谱-质谱联用仪分析多糖的单糖组成和链接方式,采用WST法检测白芍多糖对巨噬细胞RAW264.7增殖率的影响。结果表明:白芍多糖的最佳提取工艺参数为液料比25:1 mL/g、提取温度85 ℃、提取时间3.0 h,得率12.40%。白芍多糖含有96.2%±1.2%总糖和5.5%±0.6%蛋白质,未检出硫酸根和糖醛酸,其分子质量和回转半径分别为2.3×106 u和234.9 nm。白芍多糖主要含葡萄糖,大部分是通过（1→4）糖苷键链接的。同时,白芍多糖可以在2、5、10 μg/mL浓度范围促进RAW264.7细胞增殖。其中,10 μg/mL处理组的细胞增殖率得到大幅提升,且与其他组别的细胞增殖率存在显著性差异（P<0.05）。     

沙棘多糖分离纯化及抗氧化活性

分离纯化沙棘多糖(sea buckthorn(Hippophae rhamnoides)polysaccharides,SBP),并对其单糖组分、结构表征及体外抗氧化活性进行分析.通过水提醇沉、Sevag法除蛋白得到沙棘粗多糖,利用DEAE-52纤维素柱对其进行分离纯化得到中性多糖SBP-I和酸性多糖SBP-II、SB...