ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞基因P16及P53变化的研究

目的研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞瘤基因P16及P53变化.方法以不同剂量ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、160μg/ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗C6胶质瘤细胞,以流式细胞仪测试基因P16及基因P53的变化.结果本实验中未作PDT治疗的对照组,肿瘤细胞生长良好,可见P16值小于6.59%.P53值小于4%.而PDT治疗组随着光敏剂剂量的加大P16及P53基因值逐渐上升,是未作PDT治疗组的3-4倍,且两光敏剂混合组,P16及P53基因值大于单纯ALA或HPD-PDT治疗组.HPD1μg/ml联合ALA60μg/ml,HPD2μg/ml联合ALA40μg/ml就能达到HPD5μg/ml PDT治疗组P16基因及P53基因水平.结论推测PDT疗法激活了P16基因及p53基因功能,促使肿瘤细胞凋亡及坏死.联合疗法HPD1μg/ml联合ALA60μg/ml,HPD2μg/ml联合ALA40μg/ml光动力学治疗能达到HPD常规剂量5μg/ml PDT的效果,这样可明显提高ALA-PDT疗效及减少HPD-PDT的皮肤光毒反应.     

ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化.方法:以不同剂量ALA(20、40、60、80、160mg/kg、)、HPD(1、2、3、4,5mg/kg)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤,应用Fluo-3AM为细胞内钙离子荧光指示剂,以激光共聚焦显微镜测定对照组及光动力学组照光后立即、一天、三天肿瘤活细胞细胞内钙离子含量,并同时测定单激光、单用光敏剂、及空白对照组鼠肿瘤细胞内钙离子表达.结果:空白对照组、单激光、单加光敏剂组鼠G422胶质瘤肿瘤显示3天内钙离子荧光值维持在较恒定值,光动力组在治疗后立即组可见钙离子值明显高于未作光动力学治疗的对照组,且与光敏剂剂量增加有关.光动力学治疗后一天及三天组肿瘤细胞内钙离子值明显低于立即组及未作光动力学治疗组.且与光敏剂剂量增加有关.ALA-PDT组较HPD-PDT组更明显.联合治疗组HPD1-2mg/kg联合LA40-60mg/kg光动力学治疗组肿瘤细胞内钙离子值接近HPD 5mg/kg光动力学治疗组.结论:通过本实验可推测光动力学作用后细胞内钙离子超载可能在细胞凋亡及死亡中发挥重要作用.二光敏剂联合可提高疗效,降低HPD光敏剂用量,减少皮肤光毒副反应,HPD1-2 mg/kg联合ALA40-60 mg/kg是较合适的剂量.     

ALA联合小剂量HPD激光光动力学治疗皮肤肿瘤临床研究

目的:局部外敷ALA和静脉注射小剂量HPD联合用药后进行激光光敏诊断和光动力学治疗,探讨这种联合用药光动力学疗法治疗皮肤恶性肿瘤的疗效.并与常规HPD-PDT及激光气化肿瘤合并ALA-PDT治疗作临床疗效对比.方法:30例患者,45处皮肤损害.采用ALA-PDT与小剂量HPD-PDT联合的方案进行治疗.光敏药物剂量:8%ALA 霜剂外敷,1.5mg/kg HPD静脉用药,波长630nm半导体激光照射(功率密度250mW/cm~2,照射时间20分钟/光斑).同时在PDT治疗过程中,及以后的随访中均以激光光敏诊断技术指导治疗及判断避光时间.并与常规HPD(5mg/kg)-PDT治疗皮肤恶性肿瘤43例及三周前激光气化肿瘤加20%ALA霜剂外敷光动力学治疗29例作疗效比较.结果:ALA联合小剂量HPD激光光动力学治疗组,除一例鳞癌II级患者及一例恶性黑色素瘤患者出现复发外,其余患者对联合治疗的效果均佳,随访6～24月,均获得了痊愈,近期痊愈率93.33%,显效率6.67%,皮肤避光时间减少到10～14天.HPD-PDT治疗皮肤恶性肿瘤组43例,40例达近期痊愈,近期痊愈率91.43%,3例显效,显效率8.57%(显效3例,2例为色素型基底细胞癌, 1例为直肠癌肛周复发).激光气化肿瘤加ALA-PDT治疗组29例,26例一次治疗痊愈,近期痊愈率89.66%,3例显效,显效率10.34%(显效3例,2例鳞癌II级经二次治疗痊愈,1例汗管癌7周复发改用手术治疗).结论:1.ALA联合小剂量HPD的光动力学疗法对于诊断和治疗皮肤恶性肿瘤有较佳的疗效.两种光敏剂的联合使用,使皮肤避光时间由原来常规剂量HPD-PDT所必需的4～5周缩短到2周左右,并改善了ALA-PDT作用深度浅(2mm)的弊端.2.光敏诊断是一种简便、快捷、灵敏、非创伤性的肿瘤诊断方法,对于提高肿瘤的早期诊断率有很大意义,又能作为判断避光时间的辅助手段.3.光动力学治疗是一种对肿瘤组织杀伤具有高度选择性的微创技术,病人对整个治疗过程的耐受性好,更适合于年老体弱或对皮肤美观有特殊需求的患者.     

ALA口服光动力学治疗鼠G22胶质细胞瘤的研究

目的:通过鼠肿瘤动物模型确定ALA口服激光光动力疗法促使肿细胞死亡及凋亡的疗效及光敏药物最佳用药剂量。方法:以不同剂量的ALA口服(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、120μg/ml、240μg/ml)、以630nm半导体激光200mW/cm2照射,每光斑照射20分钟剂量,照光前及照光后不同时间以肉眼、肿瘤大小测定、病理、电镜、流式细胞仪观察疗效差别并与未作光动力学治疗的空白对照组模型作比较,寻找最佳的光敏药物配合的剂量。结果:随ALA口服剂量增加PDT疗效增加,口服剂量达60mg/kg疗效明显增加能抑止肿瘤生长,肿瘤变暗,质变硬,结痂,60mg/kg,120mg/kg,240mg/kg疗效相似,并不能达到完全的杀除肿瘤,该法作为肿瘤治疗若与HPD-PDT联合使用,可提高疗效,减少HPD剂量,减少避光时间,ALA-PDT可作肿瘤诊断,可避免了HPD光敏诊断的皮肤光毒反应。结论:光动力学治疗脑瘤口服剂量达60mg/kg疗效明显增加,能抑止肿瘤生长,剂量再增加疗效相似,并不能达到完全的杀灭肿瘤。     

ALA联合HPD光动力学治疗对鼠G422胶质瘤影响的研究

目的:通过鼠G422胶质瘤研究确定ALA联合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿瘤细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别.方法:以不同剂量的HPD(1、2、3、4、5 mg/kg)、ALA(20、40、60、80、160 mg/kg)、两者联合口服与静脉注射鼠G422脑胶质瘤瘤模型,随后以630nm半导体激光200mW/cm2 照射肿瘤.照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空向对照组比较.以流式细胞仪、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,病理,肿瘤生长曲线观察治疗肿瘤,促使肿瘤细胞凋亡及死亡的最小合适剂量.结果:HPDl-2mg/kg联合ALA40-60 mg/kg给药,630半导体激光200mW/cm.,照射20分钟组,从流式细胞仪测定细胞凋亡、死亡及电镜、病理及肿瘤生长曲线形态学观察,其是能达到较佳的细胞凋亡、死亡的最小、合适的光敏剂剂量.单纯ALA-PDT组中能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80-160mg/kg),单纯HPD-PDT组是HPD4-5mg/kg.结论:HPDI一2mg/kg配合ALA40-60mg/kg,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟是能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡死亡,治疗肿瘤合适的最小光敏剂剂量.     

ALA联合HPD光动力学治疗鼠S180肉瘤研究

目的通过鼠肿瘤动物模型确定ALA配合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿细胞死亡及凋亡的疗效及光敏药物最佳用药剂量。方法以不同剂量的ALA口服(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml)、HPD2.5μg/ml静脉注射、24小时后,以630nm半导体激光250mW/cm2照射,每光斑照射20分钟剂量,照光前及照光后不同时间以肉眼、肿瘤大小测定、病理、电镜、流式细胞仪观察单纯ALA-PDT、HPD-PDT、二者配合的疗效差别并与未作光动力学治疗的空白对照组模型作比较,寻找最佳的光敏药物配合的剂量。结果ALA20-40μg/ml口服配合HPD2.5μg/ml静脉注射作半导体630nm激光250mW/cm2照射20分钟组光动力学治疗组,从形态学观察,肿瘤大小测定、病理、电镜、流式细胞仪观察是能达到较佳的肿瘤坏死变性、细胞凋亡、肿瘤消失的最小用光敏剂剂量。结论ALA20-40mg/kg配合HPD2.5mg/kg,630半导体激光250mW/cm2,照射20分钟是能到小鼠S180肉瘤肿瘤模型光动力学治疗最佳疗效的最小光敏剂剂量。     

ALA联合HPD光动力学治疗对C6胶质瘤细胞影响的研究

目的通过细胞学水平研究确定ALA配合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别.方法以不同剂量的ALA(20μg/ml、40μg/ml、60μg/ ml、80μg/ ml、160μg/ ml)、HPD(1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml)、两者联合与C6胶质瘤瘤细胞一起培养,随后以630nm半导体激光200mW/cm2,照射肿瘤细胞,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较.以流式细胞仪及倒置显微镜、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,寻找促使肿瘤细胞凋亡或死亡的最小合适剂量.结果ALA40μg/ml配合HPD2.5μg/ml与C6胶质瘤细胞同时培养,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟组从倒置显微镜及电镜形态学观察及流式细胞仪测定是能达到较佳的细胞凋亡的最小光敏剂剂量.单纯ALA-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80μg/ml),单纯HPD-PDT组中能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡最小剂量是HPD(5μg/ml).结论ALA40mg/kg配合HPD2.5mg/kg,630半导体激光200mW/cm2,照射20分钟是能达到小鼠C6胶质瘤细胞明显凋亡的最小光敏剂剂量.     

5-ALA介导的光动力治疗在耐药白血病中的作用机制研究

目的: 本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法: 以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型, 同时在11例白血病患者原代细胞中进行检测。实验分为4组, 对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA＋PDT组。用MTT法测定细胞的存活率, 采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位, 用Real-time PCR检测PDT前后HL-60/ADR细胞株中bcl-2基因及多药耐药基因MRP的表达变化。结果: ALA-PDT后HL-60/ADR细胞株线粒体跨膜电位出现快速下降, 0, 2, 4 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例分别升高至55.91%±2.60%、64.27%±1.08%、82.17%±0.43%, 与对照组相比皆有显著差异(P＜0.05), 呈时间依赖性。而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化。HL-60/ADR细胞株在ALA-PDT后Bcl-2和MRP基因均呈明显下降趋势。在初发和复发难治急性白血病原代细胞中ALA＋PDT组均显示较强的光动力效应。结论: ALA-PDT诱导的HL-60/ADR细胞的杀伤可能与其影响线粒体跨膜电位有关, 即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡。同时表明ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的发生, 另一方面通过下调耐药基因MRP的表达而部分逆转耐药。同时ALA-PDT对原代白血病细胞同样有较大的抑制作用。     

ALA-PDT对健康人及银屑病患者PBMCs生物效应的实验研究

目的:通过研究ALA-PDT对体外培养的PBMCs的生物效应,探讨ALA -PDT对银屑病的免疫功能的影响、治疗的可行性及优化参数.方法:将健康人及银屑病患者新鲜外周血分别进行PBMCs分离与培养,分设空白对照组、单纯ALA组、单纯照光组以及不同ALA浓度与不同用药孵育时间组进行PDT.Annexin V/PI双染法、MTT法检测PBMCs存活率,以确定ALA最佳药物浓度和最佳用药孵育时间;TEM观察PBMCs细胞超微结构的变化;RT-PCR检测PBMCs表达Th1、Th2相关细胞因子的水平.结果:0.6 mmol/L ALA避光孵育1h后PDT组PBMCs存活率最低(P＜ 0.05); ALA-PDT后PBMCs结构呈现典型凋亡改变;银屑病患者PBMCs的IFN-γ、TNF-α mRNA表达量与健康人相比显著升高,ALA-PDT后表达量显著下降、IL-4 mRNA表达量较健康人显著降低,经ALA-PDT后显著升高(P＜0.05); IL-10mRNA表达量较健康人略有减低,经ALA-PDT后有所升高,但无统计学意义.结论:0.6 mmol/L ALA避光作孵育1h后PDT可明显促进PBMCs凋亡,银屑病患者PBMCs经ALA-PDT后由Th1优势应答向Th1/Th2平衡方向转变.     

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤各部位突变型p53蛋白和p16蛋白表达及与HpD-PDT对比

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤各部位mtp53蛋白和p16蛋白表达的影响并和HpD-PDT做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单注射HPD 5 mg/kg组、单665 nm激光照射组、单630n m激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg组、0.3 mg/kg组、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HPD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂,24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm~2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm~2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm~2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm~2。于PDT后9 d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后肿瘤及对照组各部位(肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织)、血液突变型p53蛋白(mutant type p53 protein,mtp53)和p16蛋白表达变化。结果:空白、单注药和单照光三组对照组之间mtp53蛋白和p16蛋白表达值两两比较,P>0.05,差别无统计学意义。HPPH-PDT各剂量组及HPD-PDT组与空白对照组比较,mtp53蛋白表达值明显降低,p16蛋白表达值明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。且接近正常脑组织值,或p16蛋白表达稍低于正常脑值,mtp53蛋白值表达稍高于正常脑组织值。0.3mg/kg和0.45mg/kg HPPH-PDT组与0.15 mg/kg HPPH-PDT组及HPD-PDT相比,mtp53蛋白表达值降低,p16蛋白表达值升高,P<005,差别有统计学意义,0.45 mg/kgHPPH-PDT组mtp53蛋白表达值稍低于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,p16蛋白表达值稍高于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,P>0.05,差别无统计学意义。HPPH-PDT0.3 mg/kg组的mtp53蛋白表达值低于HpD-PDT5 mg/kg组,p16蛋白表达值高于HpD-PDT 5 mg/kg组,P<0.05,差别有统计学意义。肿瘤边缘mtp53蛋白值稍高于肿瘤值,血液低于肿瘤值;p16蛋白值肿瘤边缘稍低于肿瘤值,血液高于肿瘤值。结论:HPPH-PDT能诱导mtp53蛋白表达降低,p16蛋白表达升高。与HpD-PDT相比,HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低,p16蛋白表达更高。本次实验条件下HPPH 0.3 mg/kg是适宜的HPPH-PDT剂量。     

P4P技术简介

与传统的两种思路,即P2P应用感知物理网络状况,或者运营商网络限制P2P流量不同,P4P将P2P应用和承载网联合设计,一方面使P2P应用利用网络的能力得到提升,另一方面减少了网络骨干线路上的负载,从而显著地提高ISP的网络效率。本文从P4P的背景、起源、架构、发展前景等方面对P4P进行了介绍。     

P4P：P2P的替代者

P2P网络的出现,成功地实现了可扩展的网络应用设计,并且已经成为一种新的范式。然而,P2P也面临着如何高效和公平地利用网络资源的挑战。特别是,缺乏明确地与网络供应商进行沟通,P2P的应用程序可能会消耗太多的带宽,使网络运营商负担不起,导致供应商采取很多限制P2P的措施。文章提出了一个简单,轻量的P4P结构,以便更有效地与网络供应商合作,最终更加高效地利用网络资源。     

P4P技术简介

与传统的两种思路,即P2P应用感知物理网络状况,或者运营商网络限制P2P流量不同,P4P将P2P应用和承载网联合设计,一方面使P2P应用利用网络的能力得到提升,另一方面减少了网络骨干线路上的负载,从而显著地提高ISP的网络效率。本文从P4P的背景、起源、架构、发展前景等方面对P4P进行了介绍。     

P2P系统研究

对等网络(Peer to Peer,简称P2P)是一种新兴的网络计算模式,打破了传统的C/S模式,其应用领域受到越来越多的关注,首先介绍了P2P网络的概念、特点,然后分析了P2P网络的四种拓扑结构,比较了它们的优缺点,最后概括了P2P系统的评测标准.     

P2P IPTV技术进展

IPTV的发展面临客户机，服务器模式的输入／输出“瓶颈”的制约；另外一方面。中国在发展P2P Internet TV方面取得了骄人的进展。用发展P2P Internet TV的思路和技术发展IPTV有可能开创新局面，即P2P IPTV的概念。发展P2P IPTV有可能使中国实现世界级的技术创新。由于电信业在发展宽带业务方面有强烈的需求和良好的基础，有先进的网络基础设施和有国际竞争力的电信和网络设备制造业，可以成功地支持这一创新。     

P2P相关技术的研究

对等网络（P2P）是一种构筑于底层通信网络基础设施之上的虚拟网络,是一个分布式的、具有互操作性的自组织系统。现在,运用P2P技术的软件比比皆是,使人们在不知不觉中感受到了P2P技术带来的快乐,与此同时它也浪费了大量的网络带宽。为了让P2P系统更高效的运行,同时降低网络的流量,本文介绍了P4P技术的相关理论。通过对P2P技术的研究,指出了P2P应用与网络运营商之间的矛盾,并对其解决办法进行了详细的分析。     

P2P技术

本文简要介绍了P2P技术的实现原理.文章以对SKYPE软件进行黑盒分析的结果为基础,深入剖析了SKYPE的实现技术,包括网络结构、呼叫接续、被叫寻址以及语音编码等各方面.对研究P2P语音技术的人员有一定的参考价值.     

On the resilience of P2P botnet footprints in the presence of legitimate P2P traffic

Botnet is a distributed platform for illegal activities severely threaten the security of the Internet. Fortunately, although their complicated nature, bots leave some footprints during the C&C communication that have been utilized by security researchers to design detection mechanisms. Nevertheless, botnet designers are always trying to evade detection systems by leveraging the legitimate P2P protocol as C&C channel or even mimicking legitimate peer‐to‐peer (P2P) behavior. Consequently, detecting P2P botnet in the presence of normal P2P traffic is one of the most challenging issues in network security. However, the resilience of P2P botnet detection systems in the presence of normal P2P traffic is not investigated in most proposed schemes. In this paper, we focused on the footprint as the most essential part of a detection system and presented a taxonomy of footprints utilized in behavioral P2P botnet detection systems. Then, the resilience of mentioned footprints is analyzed using three evaluation scenarios. Our experimental and analytical investigations indicated that the most P2P botnet footprints are not resilient to the presence of legitimate P2P traffic and there is a pressing need to introduce more resilient footprints.     

P2P搜索技术研究

本文对P2P搜索的拓扑结构和搜索算法等相关知识作了较详细的介绍,对基于不同P2P结构的搜索算法作了简单的对比和分析。并针对现有搜索算法存在的问题,提出一些解决的设想,最后对影响搜索算法的因素和解决的方法进行了归纳。