白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0~7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

豆豉纤溶酶的酶动力性质研究

对豆豉纤溶酶(DFE)的催化动力学性质进行了研究,结果表明:酶的相对分子量为41 970,是一种新的豆豉纤溶酶;酶最适用pH为7.0,酶活力在pH7~8范围内最稳定,在pH8~10范围内相对稳定,在pH4以下降为0;最适作用温度为41℃,在37~45℃范围内,酶活性均较高,在15℃时酶的保存稳定性最好;Hg2+大大降低了酶活性,Fe3+和L i+则能显著提高酶活性;以酪蛋白为底物时,纤溶酶催化的反应受到底物的抑制.     

重组毕赤酵母产匍枝根霉内切葡聚糖酶Ⅱ的分离纯化及其酶学性质研究

将来源于匍枝根霉的endoglucanaseⅡ(egⅡ)在毕赤酵母中实现异源表达,对构建完成的重组毕赤酵母进行高密度发酵,制备目标酶蛋白.发酵液经Ni柱分离纯化,得到分子量大小约为38kDa,比酶活为37.8IU/mg的蛋白.酶学性质研究表明:该酶最适反应温度为55℃,最适反应pH为4.8;Mn2+、Zn2+、Fe2+对egⅡ的酶活力有一定的激活作用,Cu2+对egⅡ酶活有抑制作用,Mg2+、Co2+、Na+和K+等离子对该酶的催化活力没有明显影响;该酶以CMC-Na为底物时其反应米氏常数为2.04mg/ml.     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究

为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。     

储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉,将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析纯化得到过氧化氢酶.对分离酶的主要特性研究结果表明,这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右,在水溶液中对热不稳定.酶催化适宜的pH范围为4～9,最适pH均在7 0左右,酶的Km值在33.3～41.7mmol/L范围,金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同;1mmol/L浓度的Cu2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对酶活力有激活作用,1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe3+、Ca2+对酶活力有抑制作用,1mmol/L的NaN3、Hg2+可使酶完全失活.该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础.     

黄原胶液化酶的反应条件

XT11菌种经过发酵能够产生黄原胶液化酶,该酶能够分解黄原胶生成寡糖。实验结果说明,黄原胶液化酶的最适温度为40℃,以磷酸盐缓冲液为最佳缓冲液的酶反应的最适pH值为6.0;酶反应最适底物质量浓度为3 g/L,Km=1.68,Vmax=0.203 7 g.mL-1.min-1。Ca2+在浓度较低时对黄原胶液化酶有激活作用,而其他离子在10和30 mmol/L时对黄原胶液化酶有不同程度的抑制作用,并且Fe3+和Cr3+的抑制作用表现最为突出。     

褐藻酸降解菌AGN12制备褐藻酸裂解酶的反应条件

新分离菌AGN12能够降解褐藻酸,具有褐藻酸裂解酶活性。褐藻酸裂解酶降解褐藻酸的最适反应条件是:温度30℃,pH 7.0,底物浓度8 g/L。褐藻酸裂解酶稳定性对温度高度敏感,50℃保温1 h酶活力基本消失。Mn2+、Mg2+浓度高低对褐藻酸裂解酶均有激活作用,K+在5 mmol/L浓度下对该酶有激活作用,而Cu2+、Fe3+对该酶具有抑制作用。     

豆壳过氧化物酶的酶学性质研究

豆壳过氧化物酶(Soybean Hull Peroxidase,SHP)是从大豆豆壳分离得到的一类重要的氧化还原酶,试验通过缓冲溶液抽提法提纯豆壳过氧化物酶,采用愈创木酚法测定酶活力。结果表明,豆壳过氧化物酶是一种耐高温、耐酸碱的酶,其酶作用的最适温度为35℃,最适pH值为5.2,对愈创木酚和过氧化氢的表观Km值分别为1.53 mmol/L和0.36 mmol/L。常见化合物对豆壳过氧化物酶活性的影响也不尽相同,Fe3+对酶的抑制作用明显,而Mg2+对酶反应有一定的激活作用。     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.     

白头翁皂苷酶解产物的分离纯化

白头翁皂苷酶解产物经硅胶柱梯度洗脱分离纯化,通过白头翁皂苷酶解产物的第28碳糖基水解反应、TLC和HPLC实验确定:酶解产物Ⅰ为白头翁皂苷Ⅳ,即3 O α L 阿拉伯糖 3β,23 二烃基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 酸,其得率为4.08%;酶解产物Ⅱ为白头翁皂苷Ⅴ,即3 O α L 阿拉伯糖 3β,23 二烃基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 O 糖基酯苷,其得率为44%;没有反应的底物为白头翁皂苷Ⅲ,即3 O [α L 鼠李糖基(1→2) α L 阿拉伯糖基] 3β,23 二烃基 Δ20(29) 羽扇豆烯 28 O [α L 鼠李糖基(1→4) β D 葡萄糖基(1→6)] β D 葡萄糖酯苷,其得率为0.5%,酶解产物Ⅲ结构有待进一步测定。HPLC(高效液相色谱)检测结果显示所得纯品纯度可达95%以上。     

产黄芪甲苷酶的酶反应条件

为提高黄芪甲苷产率,研究了微生物所产的黄芪甲苷糖苷酶将3个糖基黄芪皂苷转化为黄芪甲苷的酶性质。该酶的最佳反应条件为:反应温度为35℃,底物质量浓度为30 mg/mL,pH 5.0,酶反应时间28 h,K+、Na+对提纯酶有激活作用,Zn2+、Fe3+对酶有抑制作用,其中Fe3+抑制作用显著。在20~60℃p、H 4.0~7.0时,酶活力相对稳定。在最佳酶反应条件下,黄芪甲苷的产率为8.7%。     

海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶培养基优化及其酶学性质

以琼胶酶的酶活力为指标,对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养基组分进行优化,并研究琼胶酶粗酶液的酶学性质。通过单因素和正交试验对海洋细菌Vibrio agarivorans-1的培养条件进行优化,结果表明最佳营养组分为:酵母膏的质量浓度为12g/L,琼脂粉质量浓度为3g/L,NaCl质量浓度为45g/L,在该条件下酶活力达到7.689U/g。其粗酶液的最适反应温度为40℃,最适反应pH为7,在pH范围为6~8的内酶活性较稳定,温度在20~40℃时酶的稳定性较好,但温度达到80℃基本失活。     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究.结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉 5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28 ℃;酶反应的最适条件为25 ℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL.     

GS0202菌产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶条件及其酶的反应条件

为提高Arthrobacter chlorophenolicus GS0202菌所产人参皂苷-β-葡萄糖苷酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rg3的能力,采用单因素研究方法,对菌体发酵条件,及其所产酶的酶反应条件进行了研究。结果表明,菌体发酵的最适培养基组成为胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,氯化钠10 g,水1 L;诱导物为人参总皂苷,其加入量为3.2 mg/mL,培养温度为28℃;酶反应的最适条件为25℃,pH 4,底物质量浓度为3 mg/mL。