酶转化人参皂苷中间产品Rg3皂苷的分析

酶法改变Rb1、Rb2、Rc、Rd等人参二醇类皂苷制备低糖基次生皂苷,中间产品的主要成分除Rh2皂苷之外,还含有Rh3、Rh1、Rg3等稀有皂苷.以人参皂苷Rg3为目标,采用柱层析的方法来分离其中间产品,从43 g样品中分离得到Rh2组分19.2 g,Rh3组分2.42 g,Rg3组分4 g,并用沉淀方法提纯Rg3.通过HPLC检测,人参皂苷Rg3有20-R型和20-S型异构体,54%为20（R）-Rg3,46%为20（S）-Rg3.     

酶转化人参皂苷中间产品Rg_3皂苷的分析

酶法改变Rb1、Rb2、Rc、Rd等人参二醇类皂苷制备低糖基次生皂苷,中间产品的主要成分除Rh2皂苷之外,还含有Rh3、Rh1、Rg3等稀有皂苷。以人参皂苷Rg3为目标,采用柱层析的方法来分离其中间产品,从43 g样品中分离得到Rh2组分19.2 g,Rh3组分2.42 g,Rg3组分4 g,并用沉淀方法提纯Rg3。通过HPLC检测,人参皂苷Rg3有20-R型和20-S型异构体,54%为20(R)-Rg3,46%为20(S)-Rg3。     

酶反应产物中人参稀有皂苷F2与C-Mc的分离

原人参二醇类皂苷混合物经人参皂苷酶生物转化后可生成F2、C-Mc等7~10种稀有人参皂苷。天然人参中不含人参皂苷C-Mc,且F2的含量极低。在生物转化所得的人参二醇类皂苷酶反应产物中,分离纯化得到稀有人参皂苷F2与C-Mc,并进行HPLC检测。反应后得到粗产品40g,经脱糖脱色和硅胶柱分离后,成功得到稀有人参皂苷F23.49g,纯度为98.2%,得率8.72%;得到C-Mc 0.70g,纯度为82.2%,得率为1.80%。成功分离出了F2和C-Mc制品,建立了初步的分离制备方法。     

酶转化人参皂苷C-K的提取工艺

以粗品人参皂苷C-K为原料,进行脱色、脱脂、硅胶柱层析法分离纯化,得到纯度较高的人参皂苷C-K。结果表明,粗品人参皂苷C-K样品利用D-296树脂脱色柱脱色,除去色素占总质量的4.74%,石油醚脱脂共除去杂质占总质量的7.46%;应用硅胶柱法分离得到较纯人参皂苷C-K得率为41.2%;样品结晶后收率为90%,高效液相色谱检测结晶产物中稀有人参皂苷C-K的质量分数为98.09%。     

酶转化人参皂苷C-K的提取工艺

以粗品人参皂苷C-K为原料,进行脱色、脱脂、硅胶柱层析法分离纯化,得到纯度较高的人参皂苷C-K。结果表明,粗品人参皂苷C-K样品利用D-296树脂脱色柱脱色,除去色素占总质量的4.74%,石油醚脱脂共除去杂质占总质量的7.46%;应用硅胶柱法分离得到较纯人参皂苷C-K得率为41.2%;样品结晶后收率为90%,高效液相色谱检测结晶产物中稀有人参皂苷C-K的质量分数为98.09%。     

酶解产物人参稀有皂苷Rh3的制备与分离

人参二醇类皂苷经酶转化等方法处理,得到Rh2 和Rh3为主的混合物.经常压硅胶柱分离,得到纯Rh2,也得到Rh3粗品;Rh3粗品再经高压硅胶柱分离,成功地得到了Rh3单体.其纯度达到95%以上.     

酶解产物人参稀有皂苷Rh_3的制备与分离

人参二醇类皂苷经酶转化等方法处理,得到Rh2和Rh3为主的混合物。经常压硅胶柱分离,得到纯Rh2,也得到Rh3粗品;Rh3粗品再经高压硅胶柱分离,成功地得到了Rh3单体。其纯度达到95%以上。     

3种人参中的皂苷的组成

研究了市销人参、西洋参和三七参根部中总皂苷的含量及组成.采用正丁醇萃取法提取总皂苷发现:总皂苷在人参主根、须根中的质量分数分别为4.0%、6.1%;在西洋参主根、须根中的质量分数分别为4.1%、6.3%;在三七参主根、须根中的质量分数分别为8.2%、1.7%.人参、西洋参须根中总皂苷的质量分数均高于主根,是其1.5倍;...     

绞股蓝皂苷酶转化产物的分离纯化及鉴定

利用硅胶柱层析法对本实验室自制的绞股蓝皂苷的酶解产物进行了分离纯化,采用氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱,在V(氯仿)∶V(甲醇)=8∶2时洗脱出一种单体绞股蓝皂苷,其得率为25.3%。经高效液相色谱法检测,这种单体皂苷在色谱中的保留时间与人参皂苷Rd的保留时间相同,初步确定其为人参皂苷Rd。     

新细菌转化生产人参皂苷Rg3的条件研究

研究了新筛选的细菌Phycicoccus sp.BXN5-13转化人参二醇类皂苷生成Rd和Rg3皂苷酶反应条件.结果表明,该细菌产生的人参皂苷酶为胞内酶,最佳产酶发酵条件为在含胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、NaCl 10 g/L的培养基中加入产酶诱导物,即人参茎叶总皂苷,在35 ℃培养72 h.其粗酶反应最佳条件:底物质量浓度为1 mg/mL,最适pH为6,在45 ℃反应24 h.其发酵液与人参二醇类皂苷反应后,用薄层层析法与高效液相色谱法检测结果;其酶液将Rb1等人参二醇类皂苷,转化为人参皂苷Rd,将Rd进一步转化为人参皂苷Rg3;转化率为44%.     

绞股蓝皂苷酶转化产物的分离纯化及鉴定

利用硅胶柱层析法对本实验室自制的绞股蓝皂苷的酶解产物进行了分离纯化,采用氯仿-甲醇系统进行梯度洗脱,在V(氯仿)∶V(甲醇)=8∶2时洗脱出一种单体绞股蓝皂苷,其得率为25.3%。经高效液相色谱法检测,这种单体皂苷在色谱中的保留时间与人参皂苷Rd的保留时间相同,初步确定其为人参皂苷Rd。     

新细菌转化生产人参皂苷Rg_3的条件研究

研究了新筛选的细菌Phycicoccus sp.BXN5-13转化人参二醇类皂苷生成Rd和Rg3皂苷酶反应条件。结果表明,该细菌产生的人参皂苷酶为胞内酶,最佳产酶发酵条件为在含胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5 g/L、NaCl 10 g/L的培养基中加入产酶诱导物,即人参茎叶总皂苷,在35℃培养72 h。其粗酶反应最佳条件:底物质量浓度为1 mg/mL,最适pH为6,在45℃反应24 h。其发酵液与人参二醇类皂苷反应后,用薄层层析法与高效液相色谱法检测结果;其酶液将Rb1等人参二醇类皂苷,转化为人参皂苷Rd,将Rd进一步转化为人参皂苷Rg3;转化率为44%。     

党参内生菌转化人参根总皂苷为稀有人参皂苷F2和C-K的研究

利用组织分离法从党参中分离得到32种内生菌,其中菌株D19转化人参主皂苷为稀有皂苷的活性最强.在最佳发酵条件(水培养基,pH 5.0)下,稀有人参皂苷F2、C-K和Rh1的最高产率分别为30%、17%和8%.根据单体皂苷转化实验确定了稀有人参皂苷的来源和人参皂苷Rb1的转化路径,并通过16SrDNA序列分析,鉴定内生菌D19为藤黄色杆菌属(Dyella).     

3种人参中的皂苷的组成

研究了市销人参、西洋参和三七参根部中总皂苷的含量及组成。采用正丁醇萃取法提取总皂苷发现:总皂苷在人参主根、须根中的质量分数分别为4.0%、6.1%;在西洋参主根、须根中的质量分数分别为4.1%、6.3%;在三七参主根、须根中的质量分数分别为8.2%、1.7%。人参、西洋参须根中总皂苷的质量分数均高于主根,是其1.5倍;而三七参主根中总皂苷的质量分数高于须根,是其3倍。TLC和HPLC检测结果表明,人参中各种皂苷的质量分数差别不大,主根、须根的w(PPD)/w(PPT)分别为37∶58、66∶33,人参中含有特征皂苷Rf,其质量分数为5%~8%,人参中还含有微量R1。西洋参中Re、Rb1含量较高,占总皂苷的40%~50%,主根、须根的w(PPD)/w(PPT)分别为50∶43、58∶39,西洋参中不含有R1和Rf皂苷。三七参中Rg1、Rb1的质量分数较高,占总皂苷的70%,其主根、须根总皂苷组成相似,三七参中含有特征皂苷R1,其质量分数为9%~11%。     

人参稀有皂苷C-K的分离与纯化

研究了硅胶柱层析法对酶反应产物 皂苷C K粗品进行的分离纯化。当流动相V(氯仿)∶V(甲醇)=9∶1时分离效果最好,可以得到纯度较高的产品。用核磁共振法对产品进行分析,确认产品为人参稀有皂苷C K,即20 O (β D 葡萄糖基) 达玛 24烯,3β,12β,20(S) 三醇。经高效液相色谱进行纯度检测,分离得到的人参皂苷C K的纯度为95%以上,纯品得率为33%,理论得率为60%以上。     

人参皂苷Re酶转化的F1皂苷等产品的分离提纯

利用大孔吸附树脂和硅胶层析相结合的方法,对人参皂苷Re的酶解产物进行分离提纯.结果表明,65.0g的Re酶解产物经大孔吸附树脂AB-8和D-296脱糖、脱色处理后,共得干燥粗产品37.0g,得率为56.9％.采用硅胶层析柱进一步分离纯化后,共得到纯度为96.0％的Rgl皂苷ll.2g,在粗产品中的得率为30.2％;得到纯度为98.0％的稀有人参皂苷F1皂苷4.75g,在粗产品中的得率为12.8％.Re经人参皂苷酶转化得到Rgl皂苷的得率为17.2％,F1皂苷的得率为7.31％.     

三七提取中人参皂苷的转化

为提高三七自身含有的人参皂苷糖苷酶的作用,采用TLC和HPLC方法检测,研究了不同温度水提三七过程中人参皂苷的变化。结果表明,在80~100℃,15%以上三七中的人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1转化为Rg2、Rg3、Rh2、C-K等稀有人参皂苷;提高温度到110~121℃时完全转化;而人参皂苷本身对温度很稳定,在80~121℃不发生转化。这说明三七提取中人参皂苷的变化,主要不是温度的作用,而可能是自身酶等三七内部的特殊物质起的作用。     

三七提取中人参皂苷的转化

为提高三七自身含有的人参皂苷糖苷酶的作用,采用TLC和HPLC方法检测,研究了不同温度水提三七过程中人参皂苷的变化。结果表明,在80~100℃,15%以上三七中的人参皂苷Rb1、Rd、Re、Rg1转化为Rg2、Rg3、Rh2、C-K等稀有人参皂苷;提高温度到110~121℃时完全转化;而人参皂苷本身对温度很稳定,在80~121℃不发生转化。这说明三七提取中人参皂苷的变化,主要不是温度的作用,而可能是自身酶等三七内部的特殊物质起的作用。     

人参皂苷Rf的分离提纯

以人参根须为原料,采用甲醇浸提法提取人参根须中总皂苷,再用硅胶柱层析法对总皂苷进行分离,得到较纯净的人参皂苷单体Rf.结果表明,500 g人参根须中提取得到总皂苷20.5 g,提取率为4.10%.总皂苷中主要含Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd等成分.20.5 g人参根须总皂苷经硅胶柱层析法分离,得到较纯人...     

制备色谱技术对人参皂苷Rg2(组)的分离效果

人参皂苷Rg2(组)是红参中含有的稀有皂苷,由20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rg6及Rg4等4种异构体组成。本实验采用制备色谱技术对4种混合皂苷进行分离,应用高效液相色谱技术对分离产品进行检测分析。从50mg Rg2(组)皂苷中获得20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rg6及Rg4等4种皂苷分别为2.6、2.8、1.5及3.9mg,纯度分别为95.3%、96.4%、96.3%及98.3%。